丹龍醒腦片治療缺血性腦卒中的實驗研究進展

徐瑾瑜，顧 星，張秋雁*

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208)

丹龍醒腦片治療缺血性腦卒中的實驗研究進展

徐瑾瑜，顧 星，張秋雁*

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208)

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為缺血性腦卒中主要病因病機為“瘀”、“痰”、“虛”。痰瘀內(nèi)阻，為發(fā)病的關(guān)鍵，年邁精氣虧虛是老年患者發(fā)病的病理基礎(chǔ)。丹龍醒腦片為我校周小青教授經(jīng)驗方，由丹參、三七、地龍、石菖蒲等藥物組成，具有活血化痰、通竅醒腦之功效，是治療缺血性腦卒中及其后遺癥的有效方劑。實驗研究表明，該方對預(yù)防腦血栓形成以及腦缺血再灌注損傷等疾病的治療有積極作用。

丹龍醒腦片；缺血性腦卒中；再灌注損傷

腦卒中是當(dāng)今世界最重要的致死性疾病之一，而在腦卒中中，缺血性中風(fēng)占80%以上[1]。缺血性腦卒中是由于腦部血液循環(huán)障礙，造成細(xì)胞能量代謝衰竭，從而啟動的損傷級聯(lián)反應(yīng)的結(jié)果[2]，其臨床常見類型有腦血栓形成、腦栓塞、腔隙性梗死等，以半身不遂、口眼歪斜、語言不利為臨床特征，其最常見的病因為動脈粥樣硬化斑導(dǎo)致管腔狹窄和血栓形成[3]。缺血性腦卒中在中醫(yī)屬于中風(fēng)范疇，綜觀歷代中醫(yī)對本病的認(rèn)識，其主要病因病機為“瘀”、“痰”、“虛”。痰瘀內(nèi)阻，為發(fā)病的關(guān)鍵，年邁精氣虧虛是老年患者發(fā)病的病理基礎(chǔ)，多因素體稟賦不足，年老正衰，或肝腎不足，陽亢化風(fēng)，或風(fēng)血，痹阻脈絡(luò)，或痰熱腑實，濁毒內(nèi)生，或氣虛血瘀，脈絡(luò)不暢，以致臟腑失調(diào)，氣血逆亂，風(fēng)夾痰瘀，擾于腦竅，竄犯經(jīng)絡(luò)發(fā)為中風(fēng)[4]。

丹龍醒腦片是我校周小青教授經(jīng)驗方，為臨床治療缺血性腦卒中的有效復(fù)方，由丹參、三七、地龍、石菖蒲等藥物組成，具有活血化痰、通竅醒腦之功效。本方藥少力專，配伍精當(dāng)?；钛幾⒅鼗钛粋?，化痰藥重在開竅醒神、安神定志，而祛痰作用較輕?；钛禑o傷正之憂，溫陽無剛燥之弊。下面就丹龍醒腦片治療缺血性腦卒中的實驗研究進展作一綜述。

1 對血管性癡呆大鼠模型的影響

血管性癡呆（vascular dementiame，VD）是指由于腦血管病變引起，以癡呆為主要臨床表現(xiàn)的疾病，多發(fā)生于多次短暫性腦缺血發(fā)作或連續(xù)的急性腦血管意外之后。

周小青、劉旺華等[5-6]研究并探討丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶、腦組織興奮性氨基酸影響及腦組織脂質(zhì)過氧化和鈣超載的影響。他們采用雙側(cè)頸總動脈反復(fù)夾閉再灌注配合腹腔注射硝普鈉降壓方法建立VD（vascular dementiame，血管性癡呆）大鼠模型，用跳臺法及水迷宮法觀察各組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能；用高效液相色譜分析熒光法（HPLC）檢測腦組織谷氨酸（Glu）、天門冬氨酸（Asp）濃度；腦組織SOD活力測定采用黃嘌呤氧化酶法，MDA含量測定采用硫代巴比妥酸（TBA）法，Ca2+含量測定采用甲基百里香酚藍（MTB）比色法。結(jié)果表明丹龍醒腦片能明顯改善大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，調(diào)節(jié)腦組織興奮性氨基酸含量、減輕其興奮性毒性，保護大腦神經(jīng)細(xì)胞，其能明顯改善自由基代謝、減輕神經(jīng)細(xì)胞Ca2+超載，這可能是丹龍醒腦片治療VD的作用機制之一。

此外，劉旺華、周小青等[7-9]還對丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠血液流變學(xué)影響及大鼠腦組織乙酰膽堿酯酶（AchE）、三磷酸腺苷酶（AT-PaSe）活性的影響進行了實驗研究，探討丹龍醒腦片活血化瘀的實驗依據(jù)。實驗結(jié)果表明缺血再灌注后，全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、纖維蛋白原均有不同程度升高（P<0.05），血液流變學(xué)各指標(biāo)明顯異常。而丹龍醒腦片治療各組大鼠血液流變狀態(tài)較模型組均有所改善，尤以大、中劑量組表現(xiàn)更為明顯。由此可見，丹龍醒腦片可改善缺血再灌注后腦組織血液循環(huán)，從而減輕缺血再灌注后微循環(huán)障礙引起的腦組織損傷，對腦功能的恢復(fù)有積極的作用。

2 對腦血栓形成大鼠模型的影響

腦血栓形成（cerebralthrombosis，CT）是腦梗死最常見的類型。是腦動脈主干或皮質(zhì)支動脈粥樣硬化導(dǎo)致血管增厚、管腔狹窄閉塞和血栓形成，引起腦局部血流減少或供血中斷，腦組織缺血缺氧導(dǎo)致軟化壞死出現(xiàn)局灶性神經(jīng)系統(tǒng)癥狀體征，故而臨床上又稱為“動脈粥樣硬化性腦血栓”，或“血栓性腦梗死”。

劉旺華、李花[10]等研究丹龍醒腦片對腦血栓形成大鼠腦血管通透性及對花生四烯酸代謝的影響。用結(jié)扎頸外動脈同時頸內(nèi)動脈注射復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑的方法建立實驗性腦血栓形成大鼠模型。用伊文思蘭法檢測腦血栓形成后伊文思蘭的滲出量，用放免法（RIA）檢測血漿血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-Keto-PGF11α）含量。實驗結(jié)果表明丹龍醒腦片對腦血栓形成后腦血管通透性的升高有抑制作用，其作用可能是通過對抗腦血栓形成而發(fā)揮的。

3 對腦缺血性損傷大鼠模型的影響

臨床上，處理腦缺血性損傷的原則是盡早恢復(fù)血液再灌注，但由于腦缺血再灌注損傷的存在使得腦組織的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷更嚴(yán)重，死亡率更高[11]。腦缺血再灌注損傷是腦血管病、腦腫瘤切除術(shù)以及顱腦外傷，失血性休克等疾病共同經(jīng)歷的一個復(fù)雜的病理生理過程[12]，是指腦血流的再通超過了再灌注時間窗的時限，則腦損傷可繼續(xù)加劇，目前認(rèn)為其發(fā)生機制主要是自由基的過度形成及“瀑布式”自由基連鎖反應(yīng)、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣超載、興奮性氨基酸的細(xì)胞毒作用和酸中毒等一系列代謝影響，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷[13]。

李花、劉旺華[14]等研究丹龍醒腦片對腦缺血再灌注沙土鼠模型腦組織興奮性氨基酸（EAAs）含量的影響及對海馬區(qū)神經(jīng)元的保護作用，結(jié)果表明丹龍醒腦片能調(diào)節(jié)缺血再灌注大鼠腦組織興奮性氨基酸含量、減輕其興奮性毒性，保護大腦海馬區(qū)神經(jīng)元。何倩、馬中建等[15-17]研究了丹龍醒腦片對大鼠腦缺血再灌注后海馬區(qū)AI、Fas／FasL、TNF-α以及腫瘤壞死因子α表達和細(xì)胞凋亡的影響。實驗表明腦缺血后細(xì)胞凋亡指數(shù)、Fas／FasL、TNF-α的表達明顯增強，丹龍醒腦片能顯著抑制細(xì)胞凋亡數(shù)及Fas／FasL、TNF-α的表達，同時丹龍醒腦片通過抑制TNF-a表達而有效減輕腦細(xì)胞損傷，對急性腦缺血有顯著保護作用。

4 結(jié)語

綜上所述，丹龍醒腦片能增加腦組織局部血流量，保護大腦神經(jīng)細(xì)胞，改善學(xué)習(xí)記憶能力，有效減輕腦細(xì)胞損傷，對抗腦血栓形成，對血管性癡呆、腦血栓形成以及缺血性腦損傷有積極的治療作用，為缺血性腦卒中的防治提供了一種新的可行性途徑，但是，近年的研究多局限在實驗研究，缺乏相應(yīng)的臨床報道以及研究，同時實驗室研究也停留在對孤立的單一指標(biāo)及簡單現(xiàn)象的描述，或是圍繞著單一基因表達在凋亡中的改變進行研究，而對其深層次的機理缺乏探討。

何煜舟、汪云開等[18]總結(jié)了近年來傳統(tǒng)中藥在防治腦缺血再灌注損傷方面的研究成果，他們認(rèn)為腦缺血再灌注損傷的病理生理是一個多環(huán)節(jié)、多因素、多途徑損傷的酶促級聯(lián)反應(yīng)，是多種因素共同作用的結(jié)果，但是其基本原理是由于腦部血液循環(huán)障礙，造成細(xì)胞能量代謝衰竭，從而啟動的損傷級聯(lián)反應(yīng)的結(jié)果[19]。有研究表明，腦動脈的功能和完整性是維持腦血流量，從而將腦損傷降至最小的關(guān)鍵因素[20]，因此血管保護可能成為除溶栓和神經(jīng)保護之外腦損傷治療的新靶點[21]。在缺血性再灌注損傷中，局部血流的減少或完全阻斷會引起缺血、缺氧、組織壞死和炎癥等一系列反應(yīng)[22]，但在各種病理條件下可在原有微血管基礎(chǔ)上形成新血管，同時微血管密度與腦卒中的病死率密切相關(guān)，因此促進微血管再生，及時恢復(fù)缺血區(qū)腦組織血流量尤為重要[23]。但研究發(fā)現(xiàn)，除了細(xì)胞凋亡，血管新生障礙亦是腦缺血性損傷時腦細(xì)胞死亡的主要方式，而血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）、血管生成素（Angiopoietin，Ang）等血管生成因子在血管新生過程中起關(guān)鍵作用。VEGF是調(diào)節(jié)血管生成主要因子，有研究表明VEGF可以促進新生血管的形成，減輕腦水腫，降低梗死面積，保護神經(jīng)細(xì)胞的作用[24]，而腦損傷后VEGF的表達也同樣增加[25]，可能是腦損傷的內(nèi)源性的細(xì)胞保護機制，促進血管再生和改善缺血區(qū)的血液供應(yīng)[26]。FGF是在缺血性疾病中的一種生長因子，有促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、促進蛋白激酶釋放以降解基底膜以及促進內(nèi)皮細(xì)胞形成管腔的等作用[27]。Ang是另外一種調(diào)節(jié)新生血管形成和穩(wěn)定血腦屏障的生長因子，能加強血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的緊密連接、降低微血管的通透性[28]。綜上述，從血管保護、血管新生及其相關(guān)因子表達方面研究丹龍醒腦片治療腦缺血再灌注損傷的作用及其機制，可以為中醫(yī)藥防治缺血性腦血管疾病提供新途徑、新靶點，其具體可包括以下方面：（1）丹龍醒腦片對大鼠腦缺血再灌注后的血管保護作用及機制；（2）丹龍醒腦片對大鼠腦缺血再灌注后腦微血管密度的影響；（3）丹龍醒腦片對大鼠腦缺血再灌注后VEGF、FGF、Ang因子表達的影響。

[1] 李經(jīng)輝,劉 藝,白 鵬,等.不同濃度高滲鹽水對大鼠急性局灶性腦缺血再灌注損傷的保護[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,33(7):54-57.

[2] 關(guān) 莉,劉 微,閏福曼,等.補陽還五湯對全腦缺血再灌注不同時點大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸受體2表達的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,31(4):61-63.

[3] 蔡光先,趙玉庸.中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2005:741.

[4] 周仲英.中醫(yī)內(nèi)科學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2007:305-306.

[5] 周小青,李 花,劉旺華,等.丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織脂質(zhì)過氧化和鈣超載的影響[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,002,22(3):1-4.

[6] 周小青,劉旺華,李 花,等.丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織興奮性氨基酸影響的實驗研究[J]湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,22(2):4-7.

[7] 李 花,劉旺華,周小青,等.丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠血液流變性影響的實驗研究[J]湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,22(4):10-12.

[8] 劉旺華,李 花,周小青,等.丹龍醒腦片對擬血管性癡呆大鼠腦組織AchE、ATP酶活性的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2003,1(7):378-380.

[9] 劉旺華,周小青,李 花,等.丹龍醒腦片對血瘀證家兔血液流變性和球結(jié)膜微循環(huán)的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2006,13(1):37-39.

[10] 劉旺華,李 花,周小青,等.丹龍醒腦片對腦血栓形成大鼠腦血管通透性及對花生四烯酸代謝的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2005,3(9):776-778.

[11] 韓若東,湯其強,肖 晗,等.丹參酮1I A對早期腦缺血和腦缺血再灌注損傷的腦保護作用[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,47(6),655-658.

[12] 李經(jīng)輝,劉 藝,白 鵬,等.不同濃度高滲鹽水對大鼠急性局灶性腦缺血再灌注損傷的保護[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,33(7):54-57.

[13] 蔡光先,趙玉庸.中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2005:742.

[14] 李 花,劉旺華,周小青,等.丹龍醒腦片對沙土鼠腦缺血再灌注保護作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2003,10(5):29-30.

[15] 何 倩,周小青,李 花,等.丹龍醒腦片對大鼠局灶性腦缺血再灌注后海馬區(qū)腫瘤壞死因子α表達和細(xì)胞凋亡的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2009,16(3):37-38.

[16] 何 倩,李 花,周小青,等.丹龍醒腦片對大鼠局灶性腦缺血再灌注后海馬區(qū)AI及Fas/FasL、TNF-α表達的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2009,29(2):23-25.

[17] 馬中建,劉旺華,李 花,等.丹龍醒腦片對大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,28(3):20-22.

[18] 何煜舟,汪云開,祝 晨,等.中醫(yī)藥防治腦缺血再灌注損傷實驗研究進展[J].浙江中醫(yī)雜志,2012,47(8):617-619.

[19] Plaisier F,Bastide M,Ouk T,et al.Stobadine-induced hastening of senso rimotor recovery after focal ischemia/reperfusion is associated with cer ebrovascular protection[J].Brain Res,2008,120(8):240-249.

[20] Rodriguez-Yanez M,Castellanos M,Blanco M,et al.Vascular protection in brain ischemia[J].Cerebrovasc Dis,2006,21(Supp 12):21-29．

[21] Liu X,Chen Y.Synergistically therapeutic effects of VEGF165 and angiopoietin-1 on ischemic rat myocardium[J].Scand Cardiovase J,2007,4 1(2):P95-101．

[22] 黃 愷,姚 蘭,黃 丹.急性心肌梗死后l型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶的活化與炎癥因子水平的關(guān)系[J].臨床心血管病雜志,2008,24(5):382-384.

[23] 尹育華,吳曉光.補陽還五湯預(yù)處理對腦缺血再灌注損傷沙鼠VEGF和Ang-1表達的影響[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2012,11(7):487-488.

[24] Skold MK,Risling M,Holmin S.Inhibition of vascular endothelial gro wth factor receptor 2 activity in experimental brain contusions aggravat es injury outcome and leads to early increased neuronal and glial degen eration[J].Eur J Neurosci,2006,23(1):21-34.

[25] Skold MK,yon Gertten C,Sandberg-nordqvist AC,et al.VEGF andmV EGF receptor expression after experimental brain contusion in rat[J]. J Neurotrauma,2005,22(3):353-367．

[26] Zhang ZG,Zhang L,Tsang W,et al.Correlation of VEGF and angiopoietin expression with disruption of blood-brain barrier and angi ogenesis after focal cerebral ischemia[J].J Cereb Blood Flow Met ab,2002,22(4):379-392．

[27] Klagsbrun M.Mediators of angiogenesis:the biological signi fi cance of basic fi broblast growth factor (bFGF)-heparan and heparin sulfate inter actions[J].Semin Cancer Biol,1992,3:81-87.

[28] Hayashi T,Noshita N,Sugawara T,et al.Temporal pro fi le of angiogenesis and expression of related genes in the brain after ischemia[J].J Cer eb Blood Flow Metab,2003,23(2):166-180.

（本文編輯 董林）

Danlong Xingnao Tablet’s experimental research progress about treat Ischemic stroke

XU Jin yu,GU Xing,ZHANG Qiu yan＊
(TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

Ischemic stroke, the doctor of traditional Chinese medicine thinks the main etiology and pathogenesis as for "stasis", "phlegm", "virtual", Phlegm and blood stasis plugging with each other is the key for it, old age and essence de fi ciency is the basis of pathology of elderly patients. Danlong Xingnao Tablet is a classical prescription of our school professor ZhouXiaoQing, including salvia miltiorrhiza, pseudo-ginseng, lumbricus, rhizoma acori graminei and so on. It has effects of invigorate the circulation of blood, reduce phlegm, restoring consciousness. It is the effective prescription of Ischemic stroke and its sequelaes. Experimental research shows that this prescription played a positive role to cerebral thrombosis and cerebral ischemia reperfusion.

Danlong Xingnao Tablet;Ischemic stroke;Reperfusion injury

R742

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2014.02.045.062.02

2013-9-21

湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金項目（12K090）

徐瑾瑜，湖南長沙人，在讀碩士研究生。

*張秋雁，女，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail:qyz17@yahoo.com.cn