鳳仙花不同部位乙醇提取物多酚、黃酮含量測(cè)定及抗氧化活性研究

姜洪芳, 石寶俊，程 晶,張鳳倩，朱 熹,施國(guó)新*,張衛(wèi)明*

(1.南京師范大學(xué), 江蘇 南京 210046；2.南京野生植物綜合利用研究院, 江蘇 南京 210042；3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇 南京 210095)

鳳仙花(ImpatiensbalsaminaL.)為鳳仙花科(Balsaminaceae)鳳仙花屬(Impatiens)一年生草本植物。鳳仙花屬共有植物900余種，全球均有分布，其中鳳仙花(ImpatiensbalsaminaL.)作為觀賞植物國(guó)內(nèi)外均有種植，也是該屬植物的常見(jiàn)品種，其花、莖、葉、種子在民間有悠久的藥用歷史，被廣泛用于各種中藥配方中，例如抗感染、關(guān)節(jié)炎、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗過(guò)敏、抗腫瘤、肌肉拉傷及產(chǎn)后產(chǎn)生的疼痛[1-2]。已經(jīng)從鳳仙花中分離鑒別了多種成分，如黃酮、多酚、花青素、皂苷、醌類。一些化合物的鎮(zhèn)痛和抗過(guò)敏活性，特別是多酚及醌類已經(jīng)進(jìn)行了廣泛研究[3-6]，而以植物化學(xué)為基礎(chǔ)的鳳仙花提取物的其他傳統(tǒng)應(yīng)用相對(duì)研究較少。鳳仙花的傳統(tǒng)用法為，用水煮沸直接飲用治療細(xì)菌及真菌感染，或者是直接制成糊劑用于治療皮膚及指甲的局部感染。國(guó)內(nèi)胡喜蘭等利用不同溶劑對(duì)鳳仙花的紅色花瓣進(jìn)行活性成分提取，采用試劑盒法對(duì)其進(jìn)行抗氧化活性測(cè)定，結(jié)果顯示鳳仙花的各種不同提取物均具有一定的抗氧化能力[7]?，F(xiàn)代研究表明，抗氧化劑具有延緩衰老，降低多種疾病產(chǎn)生，增強(qiáng)人體免疫力等多種功能，研究開發(fā)安全高效的天然抗氧化劑已經(jīng)成為當(dāng)今研究熱點(diǎn)之一，而鳳仙花各部位又具有不同功效，因此對(duì)于鳳仙花不同部位的抗氧化活性具有進(jìn)一步探索的必要。

本文用55%的乙醇分別回流提取鳳仙花的莖、葉、花中的活性物質(zhì)，然后測(cè)定各部位的多酚及黃酮含量，采用常用的幾種體外抗氧化體系，測(cè)定各提取物對(duì)DPPH、羥自由基、超氧陰離子自由基的清除能力和還原力等抗氧化活性指標(biāo)。結(jié)果表明，鳳仙花各部位的多酚含量由高到低依次為鳳仙花的葉、花、莖。各種提取物均有不同程度的抗氧化活性，且抗氧化活性與提取物濃度存在量效關(guān)系，其中葉提取物清除DPPH自由基、羥自由基、超氧陰離子自由基活性以及還原力均最高，本研究為鳳仙花作為低毒高效的天然抗氧化劑應(yīng)用提供了依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

T6紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)、恒溫水浴鍋、分析天平(METTLER)、離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器材廠)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器廠)。

沒(méi)食子酸、蘆丁均購(gòu)于中國(guó)生物制品檢定研究院，批號(hào)110831-201303、100080-201202。

抗壞血酸(即Vc)，三氯化鋁、福林酚(Folin-Ciocalteu)試劑、無(wú)水碳酸鈉、DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)、過(guò)氧化氫、鄰苯三酚(焦性沒(méi)食子酸)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鹽酸、三氯乙酸、磷酸二氫鈉 、磷酸氫二鈉、三氯化鐵、水楊酸、硫酸亞鐵、鐵氰化鉀為市售分析純。

鳳仙花的花、莖、葉、均于2013年7月采自南京市郊區(qū)，晾干，經(jīng)鑒定其基原為ImpatiensbalsaminaL.。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取物的制備

分別稱取50 g鳳仙花的花、莖、葉，研磨碾碎后分別加入55%乙醇750 mL，回流提取2 h，過(guò)濾，濾渣加入55%乙醇600 mL混勻，再次回流提取2 h，過(guò)濾，合并兩次濾液，70 ℃減壓蒸干，備用。

1.2.2 多酚、總黃酮含量測(cè)定[8-9]

1.2.2.1 多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱定0.1001 g沒(méi)食子酸，用蒸餾水溶解定容至100 mL，得1.001 mg/mL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mL到50 mL容量瓶中，加入25 mL蒸餾水，加入2.00 mL Folin-Ciocalteu試劑搖勻，靜置4～5 min，加入10%Na2CO3溶液4.00 mL，用蒸餾水定容至50 mL，置于25 ℃的恒溫水浴鍋中顯色2 h，于最大吸收波長(zhǎng)765 nm處測(cè)定各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度，以沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程。

1.2.2.2 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱定0.042 01 g蘆丁，用甲醇溶解定容至10 mL，得4.201 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10 mL到10 mL具塞試管中，加入1%AlCl3溶液5.00 mL，混勻，室溫靜置30 min，于415 nm處測(cè)定吸光度值，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程。

1.2.2.3 鳳仙花不同部位多酚、總黃酮測(cè)定

準(zhǔn)確稱取鳳仙花的花、莖、葉提取物各0.1000 g，溶于100 mL 65%乙醇中，得1.000 mg/mL樣品液，準(zhǔn)確吸取0.10 mL提取液按1.2.2.1、1.2.2.2進(jìn)行顯色反應(yīng)，按照回歸方程計(jì)算測(cè)定液中多酚、總黃酮濃度，并計(jì)算出提取物中多酚、總黃酮的含量。

1.2.3 鳳仙花各部位提取物抗氧化活性比較

準(zhǔn)確稱取鳳仙花的花、莖、葉提取物和對(duì)照品Vc各0.100 0 g，溶于100 mL 65%乙醇中，得1.000 mg/mL母液，并分別稀釋，配制成0.10、0.25、0.50、0.75、1.00 mg/mL的提取物及對(duì)照品溶液，供抗氧化活性測(cè)定用。

1.2.3.1 對(duì)DPPH自由基清除活性的測(cè)定[10]

(1)0.5 mmol/L DPPH甲醇溶液

準(zhǔn)確稱取DPPH固體粉末0.049 5 g，在燒杯中用少量甲醇溶解，定容至250 mL容量瓶中，配制成0.5 mmol/L DPPH甲醇溶液。

(2)樣品溶液的測(cè)定

分別移取不同濃度的樣品及對(duì)照品溶液2.00 mL，加入0.5 mmol/L DPPH甲醇溶液2.00 mL，混勻15 s后，放置30 min，以2 .00 mL不同濃度樣品或?qū)φ掌啡芤杭尤?.00 mL甲醇為參比，于517 nm測(cè)吸光度，記為A1，每個(gè)試樣作3次平行測(cè)定，取其均值，同時(shí)移取2.00 mL 65%乙醇加入2.00 mL 0.5 mmol/L DPPH甲醇溶液，混勻15 s后，放置30 min，以2.00 mL 65%乙醇加入2.00 mL甲醇為參比，于517 nm測(cè)吸光度，記為A0，并根據(jù)下述公式計(jì)算清除率。

1.2.3.2 對(duì)羥自由基清除活性的測(cè)定

采用改良的Smirnoff水楊酸法[11]，即利用H2O2與Fe2+反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，即：H2O2+Fe2+→·OH+H2O+Fe3+，在體系內(nèi)加入水楊酸捕捉并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510 nm處有最大吸收。

(1)10 mmol/L硫酸亞鐵溶液的配制

精密稱取0.3475 g硫酸亞鐵，溶于250 mL蒸餾水中，即得10 mmol/L硫酸亞鐵溶液。

(2)10 mmol/L水楊酸乙醇溶液的配制

精密稱取0.417 5 g水楊酸，溶于250 mL乙醇中，即得10 mmol/L水楊酸乙醇溶液。

(3)2.5 mmol/L H2O2溶液的配制

精密量取0.13 mL H2O2溶液(體積分?jǐn)?shù)為30%)，加蒸餾水稀釋，并定容至500 mL,即得2.5 mmol/L H2O2溶液。

(4)樣品溶液的測(cè)定

分別準(zhǔn)確量取10 mmol/L硫酸亞鐵溶液、10 mmol/L水楊酸乙醇溶液和不同濃度的樣品溶液各1.00 mL，置于具塞試管中混勻，分別加入2.5 mmol/L H2O2溶液2.00 mL，37 ℃水浴30 min后，分別在510 nm處測(cè)定吸光度值。每個(gè)試樣作3次平行測(cè)定，取其均值為A1，另外參照上述操作分別測(cè)定相應(yīng)的吸光度值A(chǔ)0和A2，按下式計(jì)算羥自由基清除率：

其中：A0為反應(yīng)體系中不含樣品，但含鄰苯三酚的吸光度值；A1為反應(yīng)體系中既含樣品，又含鄰苯三酚的吸光度值；A2為反應(yīng)體系中含有樣品，但不含鄰苯三酚的吸光度值。

1.2.3.3 對(duì)超氧陰離子自由基清除活性的測(cè)定

采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)定樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力[12]。

(1)0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH=8.2)的配制

精密稱取1.211 g 三羥甲基氨基甲烷(Tris),溶于蒸餾水中定容至100 mL；量取50.00 mL上述溶液與0.1 mol/L鹽酸22.90 mL混勻后，加水稀釋至100 mL，所得緩沖液pH值為8.2。

(2)鹽酸溶液的配制

精密量取0.8 mL的濃鹽酸，加蒸餾水稀釋至100 mL,即得0.1 mol/L鹽酸溶液；精密量取0.85 mL濃鹽酸，加水稀釋至1 000 mL，即得10 mmol/L鹽酸溶液。

(3)25 mmol/L鄰苯三酚溶液的配制

精密稱取0.315 0 g鄰苯三酚，用10 mmol/L鹽酸溶解，定容至100 mL，即得25 mmol/L鄰苯三酚溶液。

(4)樣品溶液的測(cè)定

精密量取0.05 mmol/L Tris-HCl緩沖液4.50 mL，25 ℃水浴20 min，分別加入1.00 mL不同濃度的各樣品溶液和25 mmol/L鄰苯三酚溶液0.40 mL,混勻，于25 ℃水浴中反應(yīng)5 min，加入10 mmol/L鹽酸溶液1.00 mL終止反應(yīng)，于325 nm處測(cè)定吸光度。每個(gè)試樣作三次平行測(cè)定，取其均值為A1。另外參照上述操作分別測(cè)定相應(yīng)的吸光度值A(chǔ)0和A2，按下式計(jì)算超氧陰離子清除率：

其中：A0為反應(yīng)體系中不含樣品，但含鄰苯三酚的吸光度值；A1為反應(yīng)體系中既含樣品，又含鄰苯三酚的吸光度值；A2為反應(yīng)體系中含有樣品，但不含鄰苯三酚的吸光度值。

1.2.3.4 鳳仙花還原力的測(cè)定

參考Oyaizu和Amarowicz等的方法，稍作改進(jìn)[13]。

(1)pH6.6磷酸緩沖液的配制

分別精密稱取磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和氯化鈉1.740 0 g、2.700 0 g、1.700 0 g，溶于400 mL蒸餾水中，即得pH6.6磷酸緩沖液。

(2)1%鐵氰化鉀溶液的配制

精密稱取1.000 0 g鐵氰化鉀，溶于100 mL蒸餾水中，即得1%鐵氰化鉀溶液。

(3)10%三氯乙酸溶液的配制

精密稱取10.000 0 g三氯乙酸，溶于100 mL蒸餾水中，即得10%三氯乙酸溶液。

(4)0.1%三氯化鐵溶液的配制

精密稱取0.170 0 g六水合氯化鐵，溶于100 mL蒸餾水中，即得0.1%三氯化鐵溶液。

(5)樣品溶液的測(cè)定

精密量取不同濃度的樣品溶液2.50 mL于試管中，依次加入2.50 mL磷酸緩沖液(pH6.6)和1%鐵氰化鉀溶液2.50 mL，于50 ℃水浴保溫20 min，快速冷卻，再加入10%三氯乙酸2.50 mL，以3 000 r/min離心10 min，取上清液2.50 mL，依次加入2.00 mL蒸餾水，0.1%的三氯化鐵溶液0.50 mL，充分混勻，靜置10 min后，于700 nm處測(cè)吸光度值，吸光值越大表示還原力越強(qiáng)(以蒸餾水作對(duì)比)。每個(gè)試樣作3次平行測(cè)定，取其平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 鳳仙花各部位乙醇提取物的提取率、多酚及總黃酮含量

從表1中可以看出，鳳仙花不同部位的乙醇提取物的得率存在差異，其中鳳仙花的花提取物得率為33.20%，鳳仙花的莖提取物得率為22.40%，鳳仙花的葉提取物的得率為28.33%。通過(guò)應(yīng)用多酚線性回歸方程：y=0.108 5x-0.027 9(R2=0.995 5)及總黃酮線性回歸方程：y=6.517x-1.159 6(R2=0.999 2)，計(jì)算出鳳仙花不同部位醇提取物中的多酚含量(以沒(méi)食子酸計(jì))及總黃酮含量(以蘆丁計(jì))，見(jiàn)表1。

表1 鳳仙花不同部位乙醇提取率和多酚、總黃酮含量

2.2 鳳仙花各部位提取物抗氧化活性比較

2.2.1 對(duì)DPPH自由基清除活性的測(cè)定結(jié)果

DPPH法從1958年被提出后，就被廣泛地用于各種生物試樣和食品的抗氧化能力測(cè)定。DPPH自由基以氮為中心，其結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，主要是由于起共振作用的3個(gè)苯環(huán)的空間障礙，使氮原子上的單電子不能夠發(fā)揮電子成對(duì)作用。DPPH檢測(cè)法是根據(jù)DPPH自由基于517 nm處有一強(qiáng)吸收峰，其醇溶液呈紫色的特性。當(dāng)自由基清除劑存在時(shí)，通過(guò)使DPPH分子中1個(gè)穩(wěn)定自由基與抗氧化劑提供的1個(gè)電子配對(duì)結(jié)合使DPPH的特征紫色消失,褪色的程度和自由基清除劑的電子數(shù)量存在定量關(guān)系，因此可用分光光度計(jì)進(jìn)行快速定量分析從而用于抗氧化劑清除自由基能力的評(píng)價(jià)。與其他體外抗氧化法相比，清除DPPH自由基法更加快速、簡(jiǎn)單、靈敏，因而被廣泛應(yīng)用。

圖1 鳳仙花不同部位提取物對(duì)DPPH清除活性

鳳仙花各部位乙醇提取物對(duì)DPPH清除率的分析如圖1所示，在此實(shí)驗(yàn)中，以Vc為對(duì)照，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的升高，Vc及各樣品對(duì)DPPH自由基的清除率都呈現(xiàn)增長(zhǎng)的趨勢(shì)，且各樣品對(duì)DPPH自由基清除率在濃度較低時(shí)上升較快，在濃度較高時(shí)上升較慢。各試驗(yàn)樣品對(duì)DPPH清除能力大小從高到低分別為：Vc >鳳仙花的葉提取物>鳳仙花的花提取物>鳳仙花的莖提取物。當(dāng)濃度達(dá)到1.00 mg/mL時(shí)，Vc對(duì)DPPH自由基的清除率高達(dá)98.03%，鳳仙花的葉提取物對(duì)DPPH自由基也具有較好的清除能力，清除率為88.53%。

2.2.2 對(duì)超氧陰離子自由基清除活性的測(cè)定結(jié)果

人體內(nèi)大部分氧分子代謝生成水，但有約5%的氧分子受單一電子還原，從而成為超氧陰離子，超氧陰離子不僅是陰離子同時(shí)也是自由基，性質(zhì)十分活潑，具有很強(qiáng)的氧化性和還原性。超氧陰離子是氧自由基生成中的第一個(gè)自由基，是生物體生理反應(yīng)常見(jiàn)的中間產(chǎn)物，作為活性氧的一種，可能引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能的破壞，從而導(dǎo)致組織損傷、衰老，誘發(fā)炎癥和腫瘤。

鄰苯三酚自氧化法是測(cè)定超氧陰離子自由基清除活性的常用方法，其主要機(jī)理為，鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化從而釋放超氧陰離子自由基，并生成有色中間物質(zhì)，該物質(zhì)在325 nm左右有特征吸收，當(dāng)有抑制劑存在時(shí)，可以減少此中間物質(zhì)的積累，因此可通過(guò)比色法檢測(cè)該物質(zhì)的吸光度值來(lái)計(jì)算待測(cè)物質(zhì)對(duì)超氧陰離子的清除能力。

圖2 鳳仙花不同部位提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除活性

以Vc為對(duì)照，測(cè)定鳳仙花各部位提取物清除超氧陰離子的能力，結(jié)果如圖2所示。從圖中可以看出，在試驗(yàn)所測(cè)定濃度范圍內(nèi)，各樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除率都隨著濃度的升高而升高。各試驗(yàn)樣品對(duì)超氧陰離子清除能力大小從高到低分別為：Vc>鳳仙花的葉提取物>鳳仙花的花提取物>鳳仙花的莖提取物。其中Vc的上升趨勢(shì)較快，并且在濃度達(dá)到0.75 mg/mL時(shí)，Vc對(duì)超氧陰離子自由基的清除率已經(jīng)達(dá)到95%；鳳仙花各部位提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除率雖然有所升高，但趨勢(shì)較為緩慢，在1.00 mg/mL的濃度下，其抑制率不到40%，因此鳳仙花對(duì)超氧陰離子自由基具有一定的清除作用，但是較弱。

2.2.3 鳳仙花對(duì)羥自由基清除活性的測(cè)定

人體在生命活動(dòng)氧化代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生各種各樣的自由基，而羥自由基是其中化學(xué)性質(zhì)最活潑、對(duì)機(jī)體危害最大的自由基。它能夠和多肽、蛋白、脂類、DNA，特別是鳥嘌呤核苷等發(fā)生反應(yīng)，使得不飽和脂肪酸氧化，生成脂質(zhì)過(guò)氧化物，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)遭到破壞，從而使機(jī)體受到損傷與破壞，加快機(jī)體的衰老，引起腦缺血、帕金森氏癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、呼吸窘迫綜合癥、心血管疾病和癌癥等疾病[1]。本試驗(yàn)采用水楊酸法測(cè)定樣品對(duì)羥自由基的清除能力，水楊酸是最常用的捕獲劑，其羥基化產(chǎn)物是2,3-二羥基苯甲酸以及2,5-二羥基苯甲酸。過(guò)氧化氫和硫酸亞鐵溶液中的二價(jià)鐵離子發(fā)生Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，用水楊酸捕捉高活性的羥自由基可產(chǎn)生有色物質(zhì)，且該有色物質(zhì)在510 nm處有最大吸收，若向反應(yīng)體系里加入抗氧化劑，可以和水楊酸形成競(jìng)爭(zhēng)從而減少有色物質(zhì)生成。因此本試驗(yàn)通過(guò)分光光度計(jì)對(duì)有色物質(zhì)的吸光度進(jìn)行測(cè)定達(dá)到間接測(cè)定自由基的目的，進(jìn)而反應(yīng)氧化應(yīng)激水平。

圖3 鳳仙花不同部位提取物對(duì)羥自由基的清除活性

從圖3可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增大，Vc對(duì)羥自由基的清除率上升較快，鳳仙花各部位提取物對(duì)羥自由基的清除率有緩慢的升高。當(dāng)濃度在0.1 mg/mL左右時(shí)，各提取物的清除能力均高于Vc；當(dāng)濃度達(dá)到0.25 mg/mL時(shí)，鳳仙花的葉提取物對(duì)羥自由基的清除率分別達(dá)到57.84%，基本與Vc(清除率為58.14%)相同；隨著濃度繼續(xù)升高，試驗(yàn)樣品對(duì)羥自由基清除能力大小從高到低分別為：Vc>鳳仙花的葉提取物>鳳仙花的花提取物>鳳仙花的莖提取物；當(dāng)濃度達(dá)到1 mg/mL時(shí)，鳳仙花的葉提取物對(duì)羥自由基清除率分別達(dá)到74.57%，具有較強(qiáng)的清除作用。

2.2.4 還原力測(cè)定

一種物質(zhì)的還原能力可以在一定程度上反應(yīng)它潛在的抗氧化活性，通過(guò)給自由基提供電子而自身得到一個(gè)質(zhì)子，使自由基失活。通常來(lái)說(shuō)，物質(zhì)的還原力越強(qiáng)，就表示其抗氧化活性越強(qiáng)。還原力測(cè)定的實(shí)質(zhì)就是檢測(cè)待測(cè)樣品能否成為好的電子供應(yīng)者。本試驗(yàn)以普魯士藍(lán)的生成作為檢測(cè)指標(biāo)，待測(cè)樣品將Fe3+/鐵氰化物還原為Fe2+/鐵氰化物，反應(yīng)體系溶液變?yōu)椴煌潭鹊乃{(lán)色，其在700 nm處有特征光吸收，吸光度大小反應(yīng)待測(cè)樣品的抗氧化活性。

圖4 鳳仙花不同部位提取物還原力測(cè)定

由圖4可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，試驗(yàn)樣品還原力大小由高到低分別為：Vc >鳳仙花的葉提取物>鳳仙花的花提取物>鳳仙花的莖提取物。Vc還原力隨著濃度的增加而明顯增大，在濃度為0.25 mg/mL時(shí)，其還原能力達(dá)到1.4；鳳仙花各部位提取物的還原力與濃度存在量效關(guān)系，但還原能力一般，在濃度為1 mg/mL時(shí)，鳳仙花的花、莖、葉提取物的還原力分別為0.536、0.315、0.787。

3 結(jié) 論

3.1 鳳仙花的花、莖、葉三個(gè)部位均采用55%乙醇回流提取獲得提取物，但提取率有所差異，其中鳳仙花的花得率最高為33.32%，其次為鳳仙花的葉，鳳仙花莖的得率最低為22.40%；鳳仙花各部位醇提取物中多酚的含量也有差異，鳳仙花的葉的多酚含量最高為72.81 mg/g，其次為鳳仙花的花66.07 mg/g，而鳳仙花莖的多酚含量最低為37.07 mg/g，總黃酮的含量在花、莖、葉三個(gè)部位中為112.13～30.62 mg/g。

3.2 目前，沒(méi)有一種普遍通用的方法就能較為準(zhǔn)確地定量測(cè)定某樣品的抗氧化能力，因此在評(píng)價(jià)某樣品抗氧化活性時(shí)，通常采用幾種不同的檢測(cè)方法。本文采用了DPPH自由基清除能力測(cè)定、羥自由基清除能力測(cè)定、超氧陰離子清除能力測(cè)定和還原能力測(cè)定，以Vc為對(duì)照，結(jié)果表明，鳳仙花各部位提取物均有不同程度的抗氧化活性，且抗氧化能力與濃度呈量效關(guān)系；綜合各個(gè)檢測(cè)方法，鳳仙花的葉相比花和莖，具有較強(qiáng)的自由基清除活性和還原力，但仍低于對(duì)照組的Vc，且都有劑量依賴性，其次是鳳仙花的花，而鳳仙花的莖抗氧化活性最低。

3.3 樣品的抗氧化活性與多酚、總黃酮含量之間存在一定的相關(guān)性。雖然未對(duì)其相關(guān)性作定量測(cè)定，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總的來(lái)說(shuō)鳳仙花各部位的抗氧化活性與多酚、總黃酮含量有較為密切的關(guān)系，多酚及總黃酮含量越高的部位，其抗氧化活性也越強(qiáng)。

3.4 鳳仙花提取物中成分復(fù)雜，但其中的多酚可能是主要抗氧化成分之一。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可知，鳳仙花的各部位特別是鳳仙花的葉，具有較好的綜合抗氧化能力，可以作為新型天然抗氧化劑的原料來(lái)開發(fā)利用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典:上冊(cè)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1984:278-346.

[2] 鞠培俊,孔德云,李曉波.鳳仙花化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,24(5):320-324.

[3] Sakunphueak A, Panichayupakaranant P.Comparison of antimicrobial activities of naphthoquinones fromImpatiensbalsamina[J].Nat Prod Res, 2012, 26, 1119-1124.

[4] Oku H, Ishiguro K.Cyclooxygenase-2 inhibitory 1, 4-naphthoquinones from Impatiens balsamina L.[J].Biol Pharm Bull, 2002, 25, 658-660.

[5] Reanmongkol W, Subhadhirasakul S, Panichayupakaranant P, et al.Anti-allergic and anti-oxidative activities of some compounds from Thai medicinal plants [J].Pharm Biol,2003, 41,592-598.

[6] 胡喜蘭,朱慧,劉存瑞,等.鳳仙花的化學(xué)成分研究(分離鑒定了豆甾醇及山奈酚苷)[J].中成藥,2003,25(10):833-834.

[7] 胡喜蘭,韓照祥,劉玉芬,等.鳳仙花提取物的抗氧化活性研究[J].食品科學(xué),2007,28(2):48-50.

[8] Singleton V L,Rossi J R.Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdicphosphotungstic acid[J].Am J Enol Vitic, 1965, 16, 144-158.

[9] Meda A, Lamien C E, Romito M, et al.Determination of the total phenolic, flavonoid and proline contents in Burkina Fasan honey, as well as their radical scavenging activity[J].Food Chem, 2005, 91, 571-577.

[10] 韋獻(xiàn)雅,殷麗琴,鐘成,等.DPPH 法評(píng)價(jià)抗氧化活性研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2014,35(9):317-322.

[11] Halliwell B, Gutteridge J M C, Aruoma O I.The deoxyribose method: A simple “test-tube” assay for determination of rate constants for reactions of hydroxyl radicals.Anal[J].Biochem, 1987,165, 215-219.

[12] 張曉璐,徐凱宏.山楂葉總黃酮清除DPPH和超氧陰離子自由基的研究[J].林業(yè)科技,2008,33(5):51-54.

[13] 李穎暢,孟憲軍.藍(lán)莓葉黃酮提取物抗氧化活性的研究[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2008,30(1):427-429.