耳穴按壓對(duì)大鼠精神性疲勞影響的實(shí)驗(yàn)研究*

丁婷婷，袁 紅，李思諾，梁 田，張 茜，肖 響

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029)

持續(xù)的腦力勞動(dòng)、睡眠不足或某些身心疾病均可誘發(fā)精神疲勞，又稱心理疲勞［1］。由于疲勞與精神活動(dòng)密切相關(guān)，因此中樞神經(jīng)系統(tǒng)是疲勞研究的主要對(duì)象，如疲勞后腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化及調(diào)控腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)來延緩疲勞的發(fā)生［2］、連續(xù)駕駛后駕駛員疲勞評(píng)價(jià)［3］及中醫(yī)證模型［4］等。睡眠質(zhì)量的下降和睡眠不足是臨床慢性疲勞癥患者的主訴，因此睡眠剝奪(sleep deprivation，SD)是建立疲勞模型的主要方法之一。在長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)茸鳂I(yè)條件下，睡眠剝奪現(xiàn)象會(huì)經(jīng)常發(fā)生，駕駛?cè)藛T的身心健康會(huì)受到很大影響，產(chǎn)生諸多問題，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致免疫力下降及腦功能受損。同時(shí)精神疲勞駕駛是惡性交通事故的重要誘發(fā)因素，特別是在交通及航天領(lǐng)域約20%～30%的事故來源于此［5］。因此，如何緩解駕駛精神疲勞，對(duì)于改善精神狀態(tài)、保障交通安全具有重要的社會(huì)意義。

耳穴壓丸法是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下安全有效的自然療法。本實(shí)驗(yàn)以耳部的“全息理論”和經(jīng)絡(luò)臟－腑相關(guān)性作為突破口，將課題主要對(duì)象設(shè)定為精神疲勞造模的大鼠，通過對(duì)其雙耳“心”、“皮質(zhì)下”耳穴的壓迫刺激［6－8］，探究耳穴刺激對(duì)精神性疲勞的緩解作用。

1 材料

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)150 g雄性Wistar大鼠60只(生產(chǎn)許可號(hào):SCXK京2011－0004)，購(gòu)自斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司。

1．2 睡眠剝奪箱的制備［9－10］

睡眠剝奪箱是51 cm×36 cm×20 cm的大鼠箱，其中放置一個(gè)小平臺(tái)(d=6．5 cm)或一個(gè)大平臺(tái)(d=15 cm)，平臺(tái)周圍注3 cm的水，形成水環(huán)境，平臺(tái)露出水面以上1 cm，在平臺(tái)上方16 cm處放置籠罩，籠罩以平行的不銹鋼絲制成，上面可以提供水和食物。水溫與室溫保持一致，并且每日換水、打掃睡眠剝奪箱。

1．3 實(shí)驗(yàn)器材

可調(diào)溫游泳箱;YLS－1A多功能大鼠自主活動(dòng)記錄儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)。

2 方法

2．1 動(dòng)物分組

清潔級(jí)150 g雄性Wistar大鼠60只。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)(隨機(jī)數(shù)字表)平均分成4組，每組15只，分別為空白組(A組):不給予任何處理，只是同步飼養(yǎng);單純抓取組(B組):不進(jìn)行睡眠剝奪，抓取時(shí)間與治療組相同但不刺激耳穴;模型組(C組):進(jìn)行睡眠剝奪，不進(jìn)行耳穴按壓，其余與耳穴按壓組相同;耳穴按壓組(D組):進(jìn)行睡眠剝奪，給予雙耳“心”、“皮質(zhì)下”耳穴按壓刺激。在實(shí)驗(yàn)過程中保證動(dòng)物可以自由進(jìn)食飲水，室溫控制在25℃，提供12 h光照/12 h黑暗的環(huán)境(光照時(shí)間為7:00～19:00)［11］。

2．2 大鼠精神疲勞模型的建立及干預(yù)

在適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后進(jìn)行睡眠剝奪，大鼠精神疲勞的模型采用改良后的小站臺(tái)水環(huán)境法(flowerpot)［12］。將模型組大鼠、耳穴按壓組大鼠分別放入睡眠剝奪箱內(nèi)的小平臺(tái)(d=6．5 cm)上，每箱裝1只大鼠。小平臺(tái)上的大鼠不能舒展身軀，但進(jìn)食和飲水不受影響，還可進(jìn)行簡(jiǎn)單的動(dòng)作如轉(zhuǎn)頭、舔毛等，可以小憩，但如果大鼠進(jìn)入快速動(dòng)眼睡眠時(shí)期，由于全身的肌張力降低、肌肉的松弛和節(jié)律性垂頭，大鼠會(huì)落水突然驚醒，因?yàn)榇笫髴炙?，不?huì)在水中長(zhǎng)留而重回小站臺(tái)，重復(fù)之前的動(dòng)作站立，如此實(shí)現(xiàn)持續(xù)睡眠剝奪72 h?？瞻捉M大鼠、單純抓取組大鼠放入睡眠剝奪箱內(nèi)的大平臺(tái)(d=15 cm)上，大鼠在大平臺(tái)上可以睡眠而不會(huì)落入水中，其它環(huán)境與模型組相同，但大平臺(tái)直徑大，可保持完整的睡眠周期，并可排除隔離、限制活動(dòng)和水環(huán)境造成的應(yīng)激影響。大鼠在睡眠剝奪期間可自由進(jìn)食飲水，室內(nèi)照明控制在12 h/12 h的明暗周期。72 h睡眠剝奪結(jié)束后，耳穴按壓組進(jìn)行耳穴按壓干預(yù)(2006年中國(guó)針灸學(xué)會(huì)耳穴、腧穴專業(yè)委員會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)上華興邦指出動(dòng)物模型可在耳廓上出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)點(diǎn)，但是陽(yáng)性反應(yīng)點(diǎn)不是點(diǎn)狀而是片狀、小區(qū)，因此耳穴按壓組的刺激方式為耳穴區(qū)域按壓)，單純抓取組只給予抓取刺激，模型組除造模外不進(jìn)行耳穴干預(yù)，空白組不給予任何干預(yù)。

2．3 測(cè)定指標(biāo)及方法

干預(yù)結(jié)束后檢測(cè)各組大鼠的自發(fā)活動(dòng)度(大鼠在自主活動(dòng)箱中經(jīng)過5 min的適應(yīng)期后，以運(yùn)動(dòng)測(cè)量法測(cè)量大鼠3 min爬格數(shù)、3 min探身數(shù))及負(fù)重游泳時(shí)間［5］。負(fù)重游泳以“大鼠游泳協(xié)調(diào)性顯著性下降、身體下沉、水淹沒鼻尖至再次浮出水面超過10秒”作為力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)［13］。

2．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS軟件完成數(shù)據(jù)的獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)以及單因素方差的分析，采用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

3 結(jié)果

各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果比較見表1;各組大鼠游泳時(shí)間測(cè)定結(jié)果比較見表2。與空白組對(duì)照比較，模型組的爬格數(shù)和探身數(shù)均顯著減少(P＜0．05)，負(fù)重游泳時(shí)間顯著縮短(P＜0．05)，表明建模成功;與空白組對(duì)照比較單純抓取組的爬格數(shù)和探身數(shù)均無顯著增多或減少(P＞0．05)，負(fù)重游泳時(shí)間無顯著延長(zhǎng)或縮短(P＞0．05)，因此可排除抓取對(duì)本次實(shí)驗(yàn)大鼠精神性疲勞產(chǎn)生影響這一混雜因素;與模型組對(duì)照比較，耳穴按壓組的爬格數(shù)和探身數(shù)均顯著增多(P＜0.05)，耳穴按壓組的負(fù)重游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)，表明按壓耳穴可顯著改善大鼠精神性疲勞。

表1 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果比較(±s)

表1 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果比較(±s)

注:與 A 組比較，b1 P=0．95 ＞0．05，b2P=0．95 ＞0．05，c1 P=0．00 ＜0．05，c2 P=0．001 ＜0．05;與 C 組比較，d1 P=0．00 ＜0．05，d2 P=0．00 ＜0．05。

組別 例數(shù)(只) 爬格數(shù)(個(gè)) 探身數(shù)(次)A組15 51．93 ±21．83 14．40 ±6．21 B 組 15 51．40 ±20．72b1 14．27 ±6．1b2 C 組 15 27．60 ±8．08c1 8．40 ±3．98c2 D 組 15 52．36 ±16．66d1 16．43 ±2．95d2

表2 各組大鼠游泳時(shí)間測(cè)定結(jié)果比較(±s)

表2 各組大鼠游泳時(shí)間測(cè)定結(jié)果比較(±s)

注:與A組比較，c3P=0．00＜0．05;與C 組比較，d3P=0.00 ＜0．05。

組別 例數(shù)(只) 游泳時(shí)間(min)A組15 7．85 ±1．97 B 組 15 7．83 ±1．83b3 C 組 15 4．50 ±1．28c3 D 組 15 8．86 ±2．18d3

4 討論

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是測(cè)評(píng)動(dòng)物情緒興奮性和探究活動(dòng)的傳統(tǒng)方法，主要反映動(dòng)物對(duì)新環(huán)境的探索、適應(yīng)性以及伴隨的情緒變化［14］。本實(shí)驗(yàn)中觀察到，與空白組對(duì)照比較，模型組的爬格數(shù)和探身數(shù)均顯著減少(P＜0．05)，負(fù)重游泳時(shí)間顯著縮短(P＜0.05)，這說明本實(shí)驗(yàn)采用72 h睡眠剝奪法后，模型組大鼠興奮性明顯減弱，與文獻(xiàn)報(bào)道［15］一致，表明建模成功。

針灸是中國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)的重要組成部分，耳穴診治法是針灸學(xué)微針體系中的一種，早在2000多年前，《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就記載了許多以耳診治療疾病的經(jīng)驗(yàn)和理論，如耳與經(jīng)絡(luò)、臟腑的關(guān)系，望耳診斷疾病，耳背放血治療抽搐等。耳穴的研究在國(guó)外也備受關(guān)注。1956年，法國(guó)學(xué)者PaulNogier提出了42個(gè)耳穴點(diǎn)和形如倒置胚胎的耳穴分布圖［16］成為了國(guó)際范圍的焦點(diǎn)此后，我國(guó)學(xué)者不僅整理和發(fā)掘古代文獻(xiàn)，同時(shí)吸收國(guó)外先進(jìn)的研究成果，組織并開展了大量臨床研究和探索，眾多未被報(bào)道過的耳穴有效點(diǎn)和區(qū)域被發(fā)現(xiàn)，同時(shí)耳廓分區(qū)和穴位定位的研究也同時(shí)大規(guī)模展開［17］。隨著時(shí)間的推移，耳穴的研究日益繁榮，成果更加突出，耳穴的功效也被越來越多的醫(yī)學(xué)工作者肯定，現(xiàn)代對(duì)耳穴療效的原理研究也頗多，主要有全息胚學(xué)說和生物全息律的耳廓的穴位分布的3個(gè)規(guī)律(耳廓穴位分布全息律、耳廓經(jīng)絡(luò)全息律及耳廓對(duì)稱全息律［18］)，詳盡的闡釋了耳穴的分布與功效的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

通過本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，耳穴“心”、“皮質(zhì)下”對(duì)神經(jīng)衰弱患者有良好療效，按壓耳穴可緩解大鼠由于長(zhǎng)時(shí)間疲勞興奮性差的問題，顯著改善精神疲勞。

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