熒光PCR技術(shù)與直接涂片法對(duì)淋球菌檢測(cè)的臨床應(yīng)用分析

李新善，胡燕玲，羅明

(1、江西省臨床檢驗(yàn)中心，江西 南昌 330006；2、南昌市男科醫(yī)院，江西 南昌 330008)

性傳播疾病是當(dāng)今社會(huì)上廣泛流行的傳染病，其中以淋病居多，其病原菌為淋病奈瑟菌(簡(jiǎn)稱淋球菌)，也是我國(guó)最常見(jiàn)的性傳播疾病之一。淋病的診斷主要是病史、臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查，在此環(huán)節(jié)中，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)疾病的診斷、治療和有效控制等具有十分重要的作用。目前，實(shí)驗(yàn)室檢查主要有直接涂片革蘭染色、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、分離培養(yǎng)和細(xì)菌學(xué)鑒定等。上述幾種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，本資料采用直接涂片革蘭染色、熒光PCR二種方法，對(duì)2012年臨床疑似淋病的116例患者進(jìn)行比較分析，重點(diǎn)對(duì)不同臨床癥狀及男、女標(biāo)本分別采用直接涂片染色和熒光PCR法做檢測(cè)對(duì)比，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 68例男性和48例女性病人均來(lái)自南昌市男科醫(yī)院的門診和住院病例，男性年齡19~70歲，平均年齡39.5歲，女性年齡18~45歲，平均年齡26.8歲。所有病例基本具有以下特征：(1)婚外性交史或其配偶有婚外性交史；(2)不同程度的生殖道癥狀；(3)符合上述二點(diǎn)，有尿道口紅腫、明顯分泌物增多、膿性白帶的判為重癥，僅有尿頻尿急、尿道灼熱刺痛、紅腫程度小、分泌物少的判為輕度。絕大多數(shù)病例近期內(nèi)未使用任何抗生素。

1.2 標(biāo)本采集 取材由臨床醫(yī)生按常規(guī)方法操作[1]，男性取尿道分泌物、前列腺液，女性取陰道分泌物、宮頸粘液。立即裝入無(wú)菌試管送實(shí)驗(yàn)室，分別進(jìn)行直接涂片和PCR檢測(cè)。

1.3 直接涂片法 將標(biāo)本拭子在消毒好的玻片上輕輕滾動(dòng)，待干燥固定后行革蘭染色、鏡檢。以鏡檢中性粒細(xì)胞內(nèi)有革蘭陰性雙球菌為陽(yáng)性。

1.4 熒光PCR法 試劑盒由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供。擴(kuò)增儀為上海宏石SLAN全自動(dòng)擴(kuò)增儀。PCR檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒操作說(shuō)明書和實(shí)驗(yàn)室SOP要求進(jìn)行。淋球菌標(biāo)準(zhǔn)株來(lái)源于江西省疾病控制中心，為熒光PCR陽(yáng)性對(duì)照用。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件，數(shù)據(jù)分析采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

用二種不同方法對(duì)116例臨床疑似病例進(jìn)行檢測(cè)，按不同癥狀和男、女分組作對(duì)比分析，結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1 不同癥狀二種檢測(cè)方法的結(jié)果

表2 不同性別二種檢測(cè)方法的結(jié)果

3 討論

本資料表1和表2結(jié)果顯示，熒光PCR法對(duì)癥狀輕微患者、女性標(biāo)本的檢出率高于直接法(P＜0.01)。對(duì)于癥狀較重患者、男性標(biāo)本，二種方法則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。直接涂片法對(duì)于癥狀較重患者、男性標(biāo)本具有較高的陽(yáng)性檢出率，明顯高于女性標(biāo)本(P＜0.01)。

從方法學(xué)角度，淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷由于實(shí)驗(yàn)方法的選擇不同，造成了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靈敏度，準(zhǔn)確度有所不同[2]。直接涂片法：能快速檢出結(jié)果，結(jié)果直觀可靠，可使患者節(jié)省費(fèi)用、縮短候診時(shí)間、盡早得到治療，但是其陽(yáng)性檢出率較低，尤其是輕微的女性病例標(biāo)本受多種主觀和客觀因素的影響，結(jié)果判讀非常困難，常會(huì)出現(xiàn)假性結(jié)果，對(duì)檢測(cè)者的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)要求很高[3]。熒光PCR法：具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確和快速[4]的特點(diǎn)，但是此方法容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求高，操作過(guò)程中一定要特別仔細(xì)認(rèn)真，嚴(yán)格按照PCR標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作，應(yīng)建立有效的防污措施，杜絕殘留污染和樣品間擴(kuò)增序列交叉污染，實(shí)驗(yàn)全過(guò)程必須設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照，嚴(yán)防假陽(yáng)性、假陰性。細(xì)菌培養(yǎng)法：淋球菌分離培養(yǎng)和藥敏鑒定是WHO和我國(guó)推薦的金標(biāo)準(zhǔn)之一，由于分離培養(yǎng)和細(xì)菌學(xué)鑒定對(duì)標(biāo)本要求相對(duì)高，培養(yǎng)條件苛刻，操做繁瑣，報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)難以被患者接受等缺點(diǎn)[5]，該方法的臨床推廣應(yīng)用受到制約。

綜上所述，目前，淋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法各自有優(yōu)缺點(diǎn)，單一某種檢測(cè)方法無(wú)法得到滿意的結(jié)果。從116例臨床疑似病例采用直接涂片染色法和熒光PCR[6]法所做的結(jié)果表明，同一種方法對(duì)不同癥狀、不同性別的陽(yáng)性率不同，經(jīng)比較分析得出直接涂片法具有簡(jiǎn)便、快捷、直觀的優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)女性檢出率較低。熒光PCR法敏感高、特異特異強(qiáng)，能提高檢出率，對(duì)女性疑似病例具有較好的補(bǔ)充效果。本文認(rèn)為，實(shí)驗(yàn)室對(duì)疑似病例先后采用直接涂片染色法和熒光PCR法檢測(cè)，基本能滿足臨床需要。

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