光強(qiáng)對(duì)馬蘭形態(tài)、生理及黃酮類化合物含量的影響

李中林，郭開(kāi)秀，周守標(biāo)，鄭和權(quán)，劉坤

（安徽師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽 蕪湖241000）

光是影響植物生理生化特性、光合作用和生理代謝的重要生態(tài)因子之一，也是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育和分布的重要環(huán)境因子之一［1］，主要通過(guò)光照強(qiáng)度、光照時(shí)間以及光質(zhì)來(lái)影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育和形態(tài)建成［2］。光對(duì)植物的影響不僅體現(xiàn)在作為主要能量來(lái)源參與光合作用，還能以環(huán)境信號(hào)的形式通過(guò)光敏色素等的作用參與植物整個(gè)生命周期過(guò)程中生長(zhǎng)發(fā)育和生理代謝的調(diào)節(jié)［3］。植物適應(yīng)光環(huán)境變化的能力很大程度上決定著植物的產(chǎn)量和分布模式，植物對(duì)不同的光強(qiáng)會(huì)做出不同的反應(yīng)。光照對(duì)植物的生長(zhǎng)、發(fā)育和演化具有極其重要的作用，并對(duì)植物體內(nèi)的次生代謝物的生物合成和積累產(chǎn)生重要影響。在栽培管理中，通過(guò)調(diào)整種植密度，或者套種等措施可改變種植對(duì)象的光強(qiáng)條件，因此了解光照強(qiáng)度對(duì)植物的生長(zhǎng)和次生代謝產(chǎn)物的影響具有重要的理論和實(shí)踐意義［4］。

黃酮類化合物是一組存在于植物體中的天然次級(jí)代謝產(chǎn)物，幾乎絕大多數(shù)植物都能合成，到目前為止，已發(fā)現(xiàn)2000多種，常以游離態(tài)或糖苷形式存在，少數(shù)以游離形式存在［5］。研究表明，黃酮類化合物具有多方面生物活性，包括：抗癌、抗腫瘤、抗心血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌、抗病毒、抗氧化、抗衰老以及抗輻射等［6－11］。因此，黃酮類化合物已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)之一，是具有廣泛開(kāi)發(fā)與應(yīng)用前景的天然藥物成分［12］，有著廣闊的市場(chǎng)前景。

馬蘭（Kalimerisindica），又名馬蘭頭，屬菊科（Compositae）馬蘭屬（Kalimeris）多年生草本植物，嫩莖葉常作蔬菜食用，全草可入藥，具有較高的藥用價(jià)值。馬蘭廣泛分布于我國(guó)東部、中部、西部、南部以及東北以南地區(qū)［13］。馬蘭營(yíng)養(yǎng)成分豐富，富含大量礦質(zhì)元素、維生素、氨基酸等，是一類兼具營(yíng)養(yǎng)與保健的野生蔬菜［14－15］。馬蘭因其清香可口、風(fēng)味獨(dú)特、且具有多種營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，在浙江金華、麗水、溫州等地農(nóng)民開(kāi)始試種野生馬蘭，發(fā)展馬蘭生產(chǎn)［14］。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)馬蘭的研究主要集中在栽培技術(shù)［16－17］、蔬菜加工技術(shù)［18］、營(yíng)養(yǎng)成分［19］、化學(xué)成分［20－21］和黃酮類化合物提?。?2］等方面的研究，而不同光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭的生理生態(tài)和次生代謝產(chǎn)物的影響研究較少。本文通過(guò)人工設(shè)置100%，62.29%，35.17%三個(gè)梯度的透光率，初步探討了不同遮陰條件下馬蘭的形態(tài)、生理及黃酮類化合物含量，旨在了解馬蘭的形態(tài)、生理和黃酮類化合物對(duì)光照強(qiáng)度的響應(yīng)，為馬蘭在蔬菜和藥物方面的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試材料馬蘭采自安徽師范大學(xué)赭山校區(qū)校園內(nèi)。2008年3月選取健壯，長(zhǎng)勢(shì)一致的馬蘭植株移栽于5.0 m×1.3m（長(zhǎng)×寬）實(shí)驗(yàn)地中。試驗(yàn)地屬溫帶大陸性季風(fēng)氣候，日照長(zhǎng)，雨水充沛，年平均氣溫為15～16℃，年日照時(shí)數(shù)2000h左右，年平均降水量1200mm，主要集中在6、7月，全年的無(wú)霜期達(dá)219～240d。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在試驗(yàn)地經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的適應(yīng)生長(zhǎng)后，將實(shí)驗(yàn)地均勻分為1.2m×1.0m（長(zhǎng)×寬）3小塊，于2008年5月26日對(duì)馬蘭植株進(jìn)行遮光試驗(yàn)，遮光實(shí)驗(yàn)前對(duì)馬蘭的生長(zhǎng)指標(biāo)和生理指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，作為統(tǒng)一的基準(zhǔn)值。遮光開(kāi)始時(shí)去除各處理水平長(zhǎng)勢(shì)不同的馬蘭植株。遮光分為3個(gè)處理水平，CK：全光照，無(wú)遮陰網(wǎng)（透光率100%）；T1：一層遮陰網(wǎng)（透光率為62.29%，即指透過(guò)遮陰網(wǎng)進(jìn)入植株頂部的光照水平，以占全日照的百分率表示，下同）；T2：二層遮陰網(wǎng)（透光率為35.17%）。遮光材料為黑色遮光網(wǎng)，用CI－340便攜式光合測(cè)定儀于晴天11：00，14：00，16：00左右測(cè)定各處理組的相對(duì)透光率，每時(shí)段每組重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。遮光棚高度為75cm。為了防止光照的互相影響，各組間均留出1m的間隔。試驗(yàn)期間各處理組均保持正常一致的管理措施，所選取的植株依次做好序號(hào)標(biāo)記，并記錄每株植株的葉片數(shù)目、植株高度、葉片長(zhǎng)寬和莖稈直徑。試驗(yàn)于2008年7月15日結(jié)束。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

從5月26日開(kāi)始進(jìn)行遮陰實(shí)驗(yàn)，并分別在遮陰處理的第10，20，30，40和50天進(jìn)行測(cè)量。在同一葉位 （中部葉）測(cè)定其生長(zhǎng)指標(biāo)后，采適量的中部新鮮成熟葉片用液氮冷凍測(cè)定其生理指標(biāo)。每次測(cè)量時(shí)間點(diǎn)盡量相同。

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定 馬蘭植株高度、葉片長(zhǎng)和寬分別用直尺和游標(biāo)卡尺測(cè)量。馬蘭分枝數(shù)和葉片的鋸齒數(shù)采用直接計(jì)數(shù)法。每次實(shí)驗(yàn)測(cè)量結(jié)果以3～6次重復(fù)的平均值表示。

1.3.2 生理指標(biāo)的測(cè)定 所有數(shù)據(jù)吸光值用UV－3802型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果以3次重復(fù)的平均值表示。

葉綠素含量（mg/g）測(cè)定采用丙酮浸提法［23］；丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量（mmol/g）測(cè)定采用硫代巴比妥酸比色法［23］；過(guò)氧化物酶（peroxidase，POD）活性的測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法［23］，將每 min OD（optical density，光密度）增加0.01定義為1個(gè)活力單位，單位U/（g·min）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性的測(cè)定采用氮藍(lán)四唑（NBT）光還原法［23］，將每min OD增加0.01定義為1個(gè)活力單位，單位U/（g·min）；過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）活性測(cè)定采用陳利鋒等［24］的方法，將每min OD減少0.01定義為1個(gè)活力單位，單位U/（g·min）；超氧陰離子自由基（O2－·）含量的測(cè)定參考Elstner和Heupel［25］的方法；黃酮提取和測(cè)定參照鄭和權(quán)等［22］的方法。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2007和SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。用One－way ANOVA和差異顯著性檢驗(yàn)（S－N－K檢驗(yàn)，P＜0.05）判定試驗(yàn)效應(yīng)顯著與否。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（means±SD）”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭地上部分形態(tài)特征的影響

2.1.1 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭節(jié)間長(zhǎng)的影響 由圖1可知，3個(gè)處理組馬蘭節(jié)間長(zhǎng)隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，CK處理下各時(shí)間段節(jié)間長(zhǎng)始終都高于其他處理下的節(jié)間長(zhǎng)，且在30d達(dá)到最大，另外兩組仍在生長(zhǎng)，直至50dT2處理組節(jié)間長(zhǎng)稍微小于CK，但差異不顯著（P＜0.05）。方差分析表明，T1處理組與CK始終具有顯著差異（P＜0.05）。光照處理至30，40d時(shí)，T1和T2處理與對(duì)照相比均存在顯著差異（P＜0.05）。

2.1.2 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭分枝數(shù)的影響 由圖2可知，在遮陰處理至第30天馬蘭出現(xiàn)分枝現(xiàn)象，各組隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)出分枝數(shù)增加的趨勢(shì)；T2處理的分枝數(shù)始終大于另外兩組。方差分析結(jié)果表明，光照處理至30d，T2處理與CK存在顯著差異（P＜0.05），之后差異不顯著；T1處理與CK一直差異不顯著（P＞0.05）。說(shuō)明透光率為62.29%時(shí)對(duì)馬蘭的分枝能力作用不明顯，而透光率為35.17%時(shí)能在一定程度上促進(jìn)馬蘭的分枝能力。

圖1 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭節(jié)間長(zhǎng)的影響Fig.1 Effect of light intensity on internode－length of K.indica

圖2 光強(qiáng)對(duì)馬蘭分枝數(shù)的影響Fig.2 Effect of light intensity on branches No.of K.indica

2.1.3 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭株高的影響 由圖3表明，馬蘭在不同的光照強(qiáng)度處理下，隨著時(shí)間的變化，不同處理組大體上呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)，但CK一直高于另外兩組。方差分析表明，T1處理一直低于CK，且差異顯著（P＜0.05）。T2處理低于CK，但直到處理50d與CK差異才顯著（P＜0.05），說(shuō)明遮光抑制了植株的生長(zhǎng)，透光率為62.29%時(shí)對(duì)馬蘭株高抑制更明顯（P＜0.05）。

2.1.4 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉形態(tài)的影響 由圖4～5可知，馬蘭的葉長(zhǎng)和葉寬因光照強(qiáng)度的變化而改變。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，葉片的長(zhǎng)度與寬度呈增加趨勢(shì)，處理至第30天后，長(zhǎng)度與寬度基本保持穩(wěn)定。T2處理的長(zhǎng)度和寬度一直大于另外兩組。方差分析表明，T1與CK差異不顯著（P＞0.05），T2與CK在處理20d后差異顯著（P＜0.05），透光率為35.17%時(shí)顯著促進(jìn)了馬蘭葉片長(zhǎng)度和寬度的增加（P＜0.05），透光率為62.29%時(shí)對(duì)馬蘭葉片長(zhǎng)度和寬度的促進(jìn)作用不明顯（P＞0.05）。

圖3 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭株高的影響Fig.3 Effect of light intensity on height of K.indica

圖4 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片長(zhǎng)度的影響Fig.4 Effect of light intensity on leaf－length of K.indica

由圖6可知，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)3個(gè)處理組的葉片鋸齒數(shù)增加，T2在處理至第20天鋸齒數(shù)達(dá)到穩(wěn)定，另外兩組則在處理至第30天后達(dá)到穩(wěn)定，比T2處理要晚，且T2處理的鋸齒數(shù)一直大于另外兩組。方差分析表明，T1組在處理至第10，20天時(shí)葉片鋸齒數(shù)顯著低于CK（P＜0.05），之后鋸齒數(shù)與CK差別不顯著（P＞0.05）。T2組在處理至第30，40，50天與CK差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明透光率為35.17%時(shí)顯著促進(jìn)了馬蘭葉片鋸齒數(shù)的增加（P＜0.05），在前期透光率為62.29%時(shí)抑制了馬蘭葉片鋸齒數(shù)的增加（P＜0.05），后期抑制作用不明顯（P＞0.05）。

綜上，透光率為35.17%時(shí)更有利于馬蘭葉的長(zhǎng)度、寬度和鋸齒數(shù)的增加，透光率為62.29%時(shí)對(duì)馬蘭作用不顯著。

圖5 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片寬度的影響Fig.5 Effect of light intensity on leaf－width of K.indica

圖6 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片鋸齒數(shù)的影響Fig.6 Effect of light intensity on sawtooth No.of K.indica

2.2 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭生理指標(biāo)的影響

2.2.1 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片葉綠素的影響 如圖7所示，在遮陰處理至30d之后，T1處理和CK處理的葉綠素a含量達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，且T1和CK處理葉綠素a含量基本相同，但大于T2處理組。方差分析表明，T2處理一直顯著小于對(duì)照（P＜0.05）。T1組在處理至第10，20天顯著低于對(duì)照（P＜0.05）。

由圖8所示，3個(gè)處理組葉片葉綠素b隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)大體上呈現(xiàn)出先降后升的趨勢(shì)，CK和T1處理組葉綠素b含量均在處理至第50天達(dá)到最大，T2在處理至第20天達(dá)到最大。方差分析表明，T2處理組除了在處理至第40天與CK無(wú)明顯差異外，其他處理時(shí)間均明顯低于對(duì)照（P＜0.05）。T1處理組在處理至10，20天時(shí)與對(duì)照存在顯著差異（P＜0.05）。

如圖9所示，3個(gè)處理組葉片葉綠素總含量隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)大體上呈現(xiàn)出先降后升的趨勢(shì)，CK組在處理至第20天葉綠素總含量達(dá)到最大，另外兩組均是處理至第50天葉綠素總含量才達(dá)到最大。方差分析表明，T2組在處理至第20，30，40，50天與另外兩組存在顯著差異（P＜0.05）。T1組在處理至第10，20天時(shí)顯著低于對(duì)照（P＜0.05）。

綜上，透光率為35.17%時(shí)顯著抑制葉片葉綠素a、b和葉綠素總含量（P＜0.05）；在透光率為62.29%時(shí)，遮光處理前期顯著抑制（P＜0.05），之后抑制作用不顯著（P＞0.05）。

2.2.2 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片O2－·含量的影響 圖10表明，各處理水平O2－·的含量均隨遮光時(shí)間的延長(zhǎng)呈先降后升再降的趨勢(shì)；各組O2－·的含量在處理至第40天達(dá)到最大，且T1組大于另外兩組。T1和T2組在處理至第20天時(shí)O2－·的含量最少，CK在處理至第30天最少，比另外兩組晚。方差分析表明，各組之間一直存在顯著差異（P＜0.05）。T1組在處理至第10，20，30，50天時(shí)O2－·含量顯著低于對(duì)照（P＜0.05），在處理至第40天顯著高于對(duì)照（P＜0.05）。T2組在處理至10，20，30，40d時(shí) O2－·含量顯著高于對(duì)照（P＜0.05），在第50天顯著低于對(duì)照（P＜0.05）。

2.2.3 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片SOD活性的影響 由圖11可知，各處理組SOD活性呈先降后升趨勢(shì)。各組在處理至第30天時(shí)SOD活性最低，之后活性開(kāi)始升高。T1和CK組在處理至第10天時(shí)SOD活性最高，而T2是在處理至第50天活性最高。方差分析表明，T1組SOD活性一直顯著低于CK組（P＜0.05）。T2組在處理至第30天和CK無(wú)顯著差異（P＞0.05），之后活性升高，并顯著高于CK（P＜0.05）。

圖7 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片葉綠素a含量的影響Fig.7 Effect of light intensity on chlorophyll a content of K.indica

圖8 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片葉綠素b含量的影響Fig.8 Effect of light intensity on chlorophyll b content of K.indica

圖9 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片葉綠素總含量的影響Fig.9 Effect of light intensity on total chlorophyll content of K.indica

圖10 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片O2－·含量的影響Fig.10 Effect of light intensity on O2－·content of K.indica

圖11 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片SOD活性的影響Fig.11 Effect of light intensity on SOD activity of K.indica

圖12 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片POD活性的影響Fig.12 Effect of light intensity on POD activity of K.indica

2.2.4 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片POD活性的影響 由圖12表明，各處理組POD活性呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。T1和CK組在處理至第40天時(shí)POD活性升高到最大，T2組則在處理至第30天時(shí)達(dá)到最大，比另外兩組出現(xiàn)最大值早，CK組POD活性最大值高于另外兩組。T1和CK組在處理至第10天時(shí)POD活性最低，T2組則在處理至第50天時(shí)POD活性達(dá)到最低。方差分析表明，T1組在處理至第30，40天時(shí)POD活性顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。T2組在處理至第20，30，40，50天時(shí)POD活性顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2.5 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片CAT活性的影響 由圖13表明，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)CK組的CAT活性呈先升后降的趨勢(shì)，T1組呈現(xiàn)先降后升的趨勢(shì)，T2組呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。CK組在處理至第20天時(shí)CAT活性升高至最大，T1和T2組在處理至第10天時(shí)CAT活性最高，此后活性降低。CK組CAT活性在處理至第50天最低，T1和T2組在處理至第40天時(shí)CAT活性最低。方差分析表明，3組處理之間差異顯著（P＜0.05）。T1組在處理至第10，50天時(shí)顯著高于CK（P＜0.05），處理至第20，30，40天時(shí)顯著低于CK（P＜0.05）。T2組在處理至第20，30，40，50天顯著低于CK（P＜0.05）。

2.2.6 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片MDA含量的影響 由圖14可知，各處理組MDA含量隨時(shí)間變化呈先降后升的趨勢(shì)。各組在處理至第20天時(shí)MDA含量最低，且T2組含量低于另外兩組。之后各組MDA含量升高，CK組在處理至第50天時(shí)MDA含量升至最高，T1組則是在處理至第10天含量最高，T2組在處理至第40天含量最高。方差分析表明，T2組MDA含量一直顯著低于對(duì)照（P＜0.05），T1則在處理至第40，50天時(shí)顯著低于對(duì)照（P＜0.05）。

圖13 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片CAT活性的影響Fig.13 Effect of light intensity on CAT activity of K.indica

圖14 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭葉片MDA含量的影響Fig.14 Effect of light intensity on MDA content of K.indica

2.3 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭不同部位黃酮類化合物含量的影響

由表1可知，同一部位隨著光強(qiáng)的減弱，葉中黃酮含量呈下降趨勢(shì)；莖中含量在T1水平最多，為0.06968 g/g，CK次之，T2含量?jī)H占總量的31.11%；根中黃酮含量卻呈上升趨勢(shì)，T2處理下含量達(dá)到最高。在同一光強(qiáng)下，CK組各部位黃酮含量存在明顯差異（P＜0.05），以葉中含量最多；T1組葉和莖含量無(wú)明顯差異，但與根中含量差異顯著（P＜0.05）；T2組中各部位黃酮含量均存在顯著差異（P＜0.05），以根中含量最多，莖次之，葉最少。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)遮陰實(shí)驗(yàn)，馬蘭的形態(tài)、生理及黃酮類化合物含量發(fā)生了明顯變化，表明光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭的形態(tài)、生理指標(biāo)和次生代謝產(chǎn)物的合成產(chǎn)生了影響。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，馬蘭節(jié)間長(zhǎng)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，但弱光抑制了馬蘭節(jié)間長(zhǎng)，在透光率62.29%的遮光處理下顯著抑制了馬蘭節(jié)間長(zhǎng)度。說(shuō)明透光率為62.29%時(shí)對(duì)馬蘭的分枝能力作用不明顯，而透光率為35.17%時(shí)能在一定程度上促進(jìn)馬蘭的分枝能力，誘導(dǎo)馬蘭產(chǎn)生更多的分枝。遮光處理抑制了馬蘭植株的直立生長(zhǎng)，在透光率62.29%的遮光處理下對(duì)馬蘭株高產(chǎn)生抑制更明顯。透光率35.17%的遮光處理下更有利于馬蘭葉的長(zhǎng)度、寬度和葉鋸齒個(gè)數(shù)的增加，透光率為62.29%時(shí)作用不顯著。

表1 光照強(qiáng)度對(duì)馬蘭不同部位黃酮類化合物含量的影響Table 1 Effect of light intensity on flavone content of K.indica’s different parts

植物的葉綠素直接影響光合作用的強(qiáng)弱，光的強(qiáng)弱對(duì)葉綠體光合膜上色素的形成、含量和分布均能產(chǎn)生間接或直接的影響［26－27］。有研究報(bào)道，遮光提高了草本植物葉片的葉綠素含量，一定程度上增加了綠色景觀效果，隨著遮光程度的加大，葉綠素含量呈現(xiàn)顯著上升的趨勢(shì)［28－29］。也有研究表明葉綠素a、葉綠素b和葉綠素含量在不同遮陰條件下均表現(xiàn)為隨著遮陰強(qiáng)度的提高逐漸降低［30］。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻顯示了在實(shí)驗(yàn)前期，遮光使得葉綠素a，葉綠素b，葉綠素總量的含量下降，并且CK＞T2＞T1，與一些研究報(bào)道不一致，其原因可能是在實(shí)驗(yàn)前期陰雨天氣較多，濕度較大，溫度較低，導(dǎo)致了自然光照更有利于馬蘭葉綠素的合成。而在實(shí)驗(yàn)后期，隨著氣溫升高，以晴熱天氣為主，可以看到在透光率62.29%遮光處理下的葉綠素含量顯著上升達(dá)到對(duì)照水平，透光率35.17%的遮光處理下葉片的葉綠素含量也上升，但顯著低于另外兩組，說(shuō)明透光率35.17%的遮光處理不利于葉綠素含量的提高。

當(dāng)植物受脅迫時(shí)，體內(nèi)的活性氧產(chǎn)生和清除機(jī)制遭到破壞，從而加快活性氧的積累，SOD是一種誘導(dǎo)酶，不適宜的光照強(qiáng)度都能增加植株體內(nèi)的氧自由基，在遮光處理中期，3個(gè)處理組SOD活性表現(xiàn)為遮光明顯低于對(duì)照（P＜0.05），POD既能催化過(guò)氧化氫與其他底物進(jìn)行氧化反應(yīng)而被清除，也能催化氧自由基和過(guò)氧化氫反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u自由基而加重過(guò)氧化作用。在遮光實(shí)驗(yàn)中期，POD活性表現(xiàn)為遮光明顯低于對(duì)照（P＜0.05），又結(jié)合CAT在實(shí)驗(yàn)中期活性表現(xiàn)為遮光明顯低于對(duì)照（P＜0.05），可能導(dǎo)致過(guò)氧化氫增多，羥自由基增多，引起葉片膜脂過(guò)氧化加劇，使得MDA含量增加。從整個(gè)遮光處理期間還可以看出，植株敏感性最強(qiáng)的POD活性首先上升，和SOD協(xié)調(diào)一致應(yīng)對(duì)外界逆境，之后馬蘭葉片內(nèi)的氧自由基開(kāi)始下降處于較低水平，SOD活性也下降，但POD活性一直處于較高水平。至處理到40d可能由于氣溫上升，光照強(qiáng)烈，帶動(dòng)了抗氧化物酶體系，SOD活性上升，繼續(xù)清除馬蘭體內(nèi)的氧自由基。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在活性氧產(chǎn)生速率較低的情況下，保護(hù)酶活性也處于較低狀態(tài)。這與蘆站跟等［31］探討的不同光照下曼地亞紅豆杉（Taxusmediacv.Hicksii）保護(hù)酶SOD、POD、CAT和活性超氧陰離子產(chǎn)生的速率、MDA含量和細(xì)胞膜相對(duì)透性之間的關(guān)系相一致。

植物次生代謝產(chǎn)物的形成是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，光照強(qiáng)弱是影響植物次生代謝產(chǎn)物形成及形成量多少的因素之一。朱肖鋒等［4］經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)光照強(qiáng)度對(duì)馬蹄金（Dichondrarepens）葉中總黃酮的含量有一定影響，并且馬蹄金葉總黃酮含量不是隨著光照強(qiáng)度的增加而呈線性增加，而是存在一個(gè)最適光照強(qiáng)度，此光強(qiáng)下的馬蹄金葉總黃酮含量最高。本研究與上述研究結(jié)果基本一致，不同光強(qiáng)下馬蘭黃酮類化合物的含量不同，它也存在一個(gè)最適光照強(qiáng)度，輕度遮光馬蘭的總黃酮含量最高，而且光強(qiáng)顯著影響了馬蘭各個(gè)部位的黃酮合成量。本實(shí)驗(yàn)研究中CK與T2組各部位含量差異情況正好相反；光照越弱，地下部分比地上部分的相對(duì)含量就會(huì)越高。因此，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，為了保持持續(xù)的產(chǎn)量，采集馬蘭的地上部分進(jìn)行黃酮類化合物提取更為經(jīng)濟(jì)有效。

黃酮類化合物是一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基［32］。鄧斌等［33］對(duì)花生殼中黃酮類化合物研究得出，黃酮類化合物有較強(qiáng)的自由基清除能力和一定的抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力。李娟和馬占強(qiáng)［34］對(duì)茵陳蒿（Arte－misiacapillaris）的研究，也得出了與鄧斌等［34］一樣的結(jié)論，黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子（O2－·）和羥自由基（·OH）均有良好的清除作用，其半抑制率為20.23和80.40μg/mL。本研究可以推測(cè)馬蘭葉內(nèi)的黃酮類化合物、丙二醛與抗氧化酶防御系統(tǒng)一起產(chǎn)生作用來(lái)抵御活性氧的毒害，以維持馬蘭葉片中氧自由基含量的平衡。而馬蘭葉片的長(zhǎng)度，寬度以及鋸齒數(shù)卻隨著遮光程度的增加顯現(xiàn)出上升的態(tài)勢(shì)，可能是因?yàn)檎诠獬潭鹊奶岣呤沟弥仓杲⑵鸶鼮閺?qiáng)大的活性氧防御體系，抵抗損傷的能力增強(qiáng)，馬蘭生長(zhǎng)旺盛，遮光更有利于葉片的生長(zhǎng)和發(fā)育。

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