• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黑鯛不同組織的9種同工酶譜

    2014-03-25 06:32:12楊從戎李明云
    生物學雜志 2014年3期
    關(guān)鍵詞:同工酶脫氫酶條帶

    楊從戎, 苗 亮, 李明云

    (寧波大學 應(yīng)用海洋生物技術(shù)教育部重點實驗室, 浙江 寧波 315211)

    黑鯛(Sparusmacrocephalus)屬鱸形目(Perciformes)、鯛科(Sparidae)、鯛屬(Sparus),俗稱黑加吉、黑鰍、黑立,多棲息于泥沙底質(zhì)或巖礁聚集的淺海岸邊,屬暖水性底層魚,分布于中國、日本沿海及朝鮮半島。黑鯛食性雜、生長迅速、抗病力和適應(yīng)性強,適合沿海網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖,加上其肉質(zhì)與口感極佳、營養(yǎng)豐富、適宜垂釣,深受廣大消費者的喜愛,因此具有很高的經(jīng)濟價值。20世紀末,由于黑鯛育苗試驗的成功,在中國沿海各地,黑鯛養(yǎng)殖得到了快速發(fā)展,逐漸成為國內(nèi)一種重要的海水養(yǎng)殖品種[1]。目前,有關(guān)黑鯛的研究主要集中在繁育和養(yǎng)殖等方面[2-5],而有關(guān)黑鯛同工酶方面的研究僅見王可玲等[6]對黑鯛等5種海水魚同工酶表達的簡單分析,但未對黑鯛同工酶的組織表達差異做詳盡描述。

    同工酶(isozyme)是指由一個或多個基因座位編碼、催化同一生化反應(yīng)、在電場中的運動存在多種可分離形式的酶[7],同工酶分析是研究生物生化遺傳特征的主要方法之一。目前已對多種魚類進行了同工酶分析[8],研究的同工酶種類也較多,其中在生理學和組織特異性研究方面,多使用乳酸脫氫酶(LDH)、醇脫氫酶(ADH)、蘋果酸脫氫酶(MDH)、蘋果酸酶(ME)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、半乳糖脫氫酶(GAD)、甲酸脫氫酶(FDH)等同工酶進行分析和比較[9, 10]。

    筆者分析了上述9種同工酶在黑鯛不同組織中的表達情況,以期為黑鯛的生化遺傳分析、種質(zhì)資源保護等研究提供基礎(chǔ)資料。

    1 材料與方法

    1.1 材料與樣品制備

    實驗用黑鯛購自浙江省寧波市路林水產(chǎn)市場,共10尾,平均體重482 g,斷尾放血后立即在冰上解剖,取眼睛、鰓、腦、心、腎、脾、肝、腸和肌肉等9種組織,按1∶ 3的比例(W/V)加入pH值7.0,0.1 mol/L的PBS,冰浴條件下充分勻漿后以15 000 r/min低溫(4℃)離心30 min(部分組織須多次離心至酶液澄清)。吸取上清酶液,加入等體積的40%甘油及1/10體積的0.1%溴酚藍電泳指示劑后電泳分析。

    1.2 電泳、染色

    實驗采用不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳法,其中濃縮膠pH值為6.8,濃度為3.6%;分離膠pH值為8.8,濃度為8.2%。電極緩沖液為pH值8.3的Tris-甘氨酸緩沖溶液。電泳在冰浴中進行,起始電壓為150 V。當溴酚藍指示帶進入分離膠后,將電壓升高至350 V。約2 h后,待指示帶至玻璃板底部2~3 cm處,結(jié)束電泳,立即進行染色。染色參考王中仁[11]的方法進行,略加修改,之后用7.5%冰醋酸溶液終止染色并固定,掃描儀掃描、記錄。

    1.3 結(jié)果記錄

    染色后的凝膠經(jīng)7.5%冰乙酸溶液脫色固定后凝膠成像,記錄酶帶的遷移距離和顏色深度。同工酶的縮寫、命名采用胡能書等[12]的方法,從陰極到陽極依次命名為1,2,3…。

    2 結(jié)果

    2.1 乳酸脫氫酶(LDH E.C.1.1.1.27)

    由圖1可見,黑鯛的9種組織中均有LDH表達,共檢測到15條酶帶。其中眼和腦條帶復雜,有多條特異表達的條帶;肌肉有3條帶,其余組織均為1條帶;心臟中LDH活性最高,肝臟中活性最低(圖1)。

    圖1 黑鯛不同組織LDH圖譜

    2.2 醇脫氫酶(ADH E.C.1.1.1.1)

    ADH是一種催化醇脫氫形成醛或酮的酶,一般為二聚體酶,在黑鯛各組織中共表現(xiàn)出4個條帶。Adh-1在各組織中均有檢出,為基礎(chǔ)性表達;Adh-2,Adh-3在眼、鰓、腎、脾、肝和腸道6個組織中表達,表現(xiàn)出二聚體特性;Adh-4只在眼睛中特異表達(圖2)。

    2.3 蘋果酸脫氫酶(MDH E.C.1.1.1.37)

    在黑鯛組織中可以檢測到上清液型(s-MDH)和線粒體型(m-MDH)兩種類型的蘋果酸脫氫酶。m-MDH更靠近陰極,主要在鰓、腦、心、腎和肝中表達,但活性較弱。s-MDH靠近陽極,其中 s-Mdh-1在9個組織中都有表達,肝和腸中活性最強;s-Mdh-2只在肌肉和心臟中表達。9種組織中, s-MDh的活性高于m-MDh(圖3)。

    圖2 黑鯛不同組織ADH圖譜

    圖3 黑鯛不同組織MDH圖譜

    2.4 蘋果酸酶(ME E.C.1.1.1.40)

    ME在黑鯛9種組織中共檢測到4個條帶。其中Me-1和Me-2只在腎、肝、腸中特異性表達,活性較弱;而Me-3和Me-4在各組織中都有表達,肝臟中活性最強,眼中活性最弱(圖4)。

    圖4 黑鯛不同組織ME圖譜

    2.5 超氧化物歧化酶(SOD E.C.1.15.1.1)

    黑鯛的9個組織中SOD均有4條酶帶,分為上清液型(s-SOD)和線粒體型(m-SOD)兩種。 m-SOD為一條酶帶;s-SOD為二聚體酶,由3個基因座位編碼,表現(xiàn)為3條靠得很近的酶帶(圖5)。

    2.6 過氧化物酶(POD E.C.1.11.1.7)

    黑鯛眼、腦、肌肉和腸中均未檢測到POD條帶。其余5個組織中共出現(xiàn)5個條帶,為單體或二聚體;其中Pod-1—Pod-4在這5個組織中都有表達,但活性差異較大;脾中活性最強,肝中活性最低;而Pod-5只在心臟中表達(圖6)。

    圖6 黑鯛不同組織POD圖譜

    2.7 酯酶(EST E.C.3.2.1.1)

    黑鯛的EST表型較復雜:心臟和肌肉組織中未檢測到條帶;在眼、鰓、腦中出現(xiàn)2~3個微弱條帶;在腎、脾、肝、腸4個組織各有5~10個條帶,其中腎和腸中條帶最多;活性也是腎和腸中明顯強于其他組織。(圖7)。

    圖7 黑鯛不同組織EST圖譜

    2.8 半乳糖脫氫酶(GAD E.C.1.1.1.48)

    黑鯛9種組織中均有GAD表達,共出現(xiàn)4條酶帶。其中Gad-1、Gad-3、Gad-4在各組織中都有表達;Gad-2條帶僅在肝臟中表達;肌肉中GAD活力明顯弱于其他組織(圖8)。

    2.9 甲酸脫氫酶(FDH E.C.1.2.1.2)

    黑鯛的FDH為二聚體酶,9個組織共有6條酶帶,其中僅Fdh-2為基礎(chǔ)表達,在9個組織中都有條帶且活性差異不大;其余均為組織特異表達:Fdh-1僅在肝中表達,F(xiàn)dh-3在腎和腸中表達,F(xiàn)dh-4僅在腎中表達;Fdh-5、Fdh-6僅在眼中表達(圖9)。

    圖8 黑鯛不同組織GAD圖譜

    圖9 黑鯛不同組織FDH圖譜

    3 討論

    3.1 黑鯛同工酶表達的組織特異性

    本文研究結(jié)果顯示黑鯛具有較為完善的同工酶系統(tǒng),這使得黑鯛對各種生存條件具有較好的適應(yīng)性。機體在發(fā)育過程中各組織分化,導致了不同組織同工酶的特異性表達,從而能滿足不同組織特定的生理功能。9種同工酶在不同組織中的表達差異詳見表1。由表1可見9種同工酶按其生理功能在不同組織中表達活性和條帶數(shù)量各有所不同。

    LDH是一種糖酵解酶,主要與乳酸的產(chǎn)生和利用有關(guān)。肌肉是機體無氧代謝較為旺盛的組織,黑鯛肌肉中LDH表現(xiàn)出3條酶活較強的條帶,主要作用是催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸,參與無氧代謝;心臟中LDH酶活最高,這是因為LDH還能催化乳酸氧化形成丙酮酸,參與有氧代謝。LDH在肌肉和心臟中大量表達的情況與金春華等[13]對大彈涂魚LDH研究結(jié)果相一致。一般認為C基因控制的LDH表型在部分魚類的眼和肝臟中表達[9],而這與黑鯛眼組織中特異的Ldh-15條帶對應(yīng)。同時在黑鯛腦組織中,存在數(shù)量較多且活性較弱的大量條帶,可能是由于有副帶或?qū)嶒炚`差的原因,需要進一步實驗進行驗證。ADH也是種無氧代謝相關(guān)的酶,在缺氧的情況下可將體內(nèi)多余的丙酮酸轉(zhuǎn)化成乙醇,從而避免機體因丙酮酸積累而中毒死亡。在黑鯛各組織中,心臟ADH酶活最強,這與黑鯛較強的耐低氧能力相一致。

    表1 黑鯛9種組織9種同工酶活力與條帶數(shù)量比較

    注:“+++”:活性強;“++”:活性較強;“+”:有活性條帶不清晰;“***”:條帶數(shù)量多;“**”:條帶數(shù)量較多;“*”:較少或一個條帶;“-”:無條帶或無活性。

    MDH和ME是生物氧化的重要酶類,分別負責草酰乙酸和蘋果酸的相互轉(zhuǎn)化以及蘋果酸轉(zhuǎn)化成丙酮酸過程。黑鯛的MDH為二聚體,分為上清液型和線粒體型,兩種類型的酶分別由兩種基因座位編碼,在臟和腸組織中活性最高。ME是四聚體酶,由4個基因座位編碼,同樣也在肝和腸組織中活力最強。

    SOD、POD、EST這3種酶與機體的免疫解毒功能密切相關(guān)。黑鯛SOD同工酶表型特征為在各組織中皆有表達,且酶活較強。李明云等[14]在香魚的研究中發(fā)現(xiàn)SOD在脾臟和肝臟的活性較強,而肌肉等組織中未見表達,這種表達差異可能和兩者生存環(huán)境以及生物學特性有關(guān)。POD能利用過氧化氫氧化嘌呤、酚類和胺類等有毒物質(zhì),以減輕這類物質(zhì)對機體的毒害作用[15],黑鯛的POD在脾中有大量表達,預示著脾組織中存在著較強的和過氧化氫氧化相關(guān)的免疫代謝。EST是一種水解酶,主要作用催化脂類水解。黑鯛的腎臟和腸道中存在大量EST的表達,與酯酶主要參與解毒與消化功能相關(guān)。GAD與FDH在黑鯛各組織中表現(xiàn)出各組織中皆有表達且活性較弱的特性,這可能與這2種同工酶所控制的甲酸代謝和半乳糖代謝在黑鯛體內(nèi)代謝水平較低有關(guān)。

    3.2 眼和腸組織中的同工酶表達特性及生理意義

    眼是魚類視覺的感覺器官,雖然不參與體內(nèi)其他生命活動,但對生物體意義重大;在同工酶表達上,也存在一定的特異表達,例如在大部分魚的眼組織中存在特異的C基因控制的LDH表型[9]。黑鯛眼組織同工酶表達特征是同一種同工酶具有多種表達,但活性不高,例如ADH和LDH圖譜中,眼都是條帶數(shù)量最多的組織,但酶活不是最強。分析其原因,可能因為眼是暴露在體表的器官,增加了外界病原體侵襲和環(huán)境刺激的機會,且眼組織比較敏感,因此這種同工酶表達特性,有助于眼組織及時處理各種應(yīng)激,確保眼功能的穩(wěn)定。

    硬骨魚類腸組織主要負責消化功能,但由于本身沒有腸腺,只有依靠腸本身的上皮細胞分泌酶類參與消化,因此腸道中自身分泌著大量消化酶參與食物的消化和吸收。此外,腸組織還具有免疫功能,例如免疫屏障(免疫活性細胞、抗體系統(tǒng)等)、生物屏障(正常菌群共生)、化學屏障(胃酸及糖蛋白等)、物理屏障(粘液、吸附、再生、運動),因此實際上腸組織是硬骨魚類最大最復雜的免疫器官[16]。在同工酶研究中,一般以眼睛、肌肉、鰓、心臟、肝臟、腎臟和脾等組織作為研究對象[6,13],對腸組織的同工酶研究鮮有報道。管丹東[17]和董旭輝[18]對大黃魚和鬼鮋進行同工酶研究時對腸組織進行過取樣檢測,但未系統(tǒng)分析腸組織同工酶表達特性。本實驗對黑鯛腸組織的同工酶表達模式作了較為詳細的研究。結(jié)果顯示在所詳細研究的9種同工酶中,除了POD外,其他8種同工酶在腸組織中都有表達,且活性很強。腸組織相比其他組織,具有更為完善的同工酶系統(tǒng),這正和腸組織消化吸收以及免疫等重要的生理功能相適應(yīng),說明腸組織中存在著較為旺盛的代謝活動。該研究結(jié)果可為黑鯛等魚類腸組織功能及其相關(guān)的研究提供參考。

    參考文獻:

    [1]朱德芳. 黑鯛生物學特性及增養(yǎng)殖概況[J]. 水產(chǎn)養(yǎng)殖, 1996(1): 30-31.

    [2]官曙光, 劉洪軍, 李祥東, 等. 黑棘鯛胚胎發(fā)育過程及特殊結(jié)構(gòu)觀察[J]. 海洋科學, 2011, 35(9): 68-72.

    [3]劉祖毅, 王志錚, 呂敢堂, 等. 3種有機磷農(nóng)藥對黑鯛幼魚的急性毒性研究[J]. 浙江海洋學院學報:自然科學版, 2010, 29(1): 20-24.

    [4]方富永, 苗艷麗, 梁文莉, 等. 野生與養(yǎng)殖黑鯛肌肉營養(yǎng)成分及品質(zhì)的比較[J]. 營養(yǎng)學報, 2012, 34(3): 286-288.

    [5]劉鏡恪. 黑鯛的營養(yǎng)需要及配合飼料研究[J]. 海洋湖沼通報, 1996, (3): 49-53.

    [6]王可玲, 尤 鋒, 徐 成, 等. 5種海水魚同工酶表達的組織特性及其電泳的初步分析[J]. 海洋與湖沼, 1996, 27(6): 626-631.

    [7]Markert C, Moller F. Multiple forms of enzymes; tissue, ontogenetie and species specific patterns[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 1959, 45(5): 753-763.

    [8]吳艷麗, 邵德田. 魚類同工酶研究進展、趨勢[J]. 黑龍江水產(chǎn), 2007(6): 29-37.

    [9]劉鴻艷, 謝從新. 魚類同工酶應(yīng)用及研究進展[J]. 水利漁業(yè), 2006, 26(5): 1-3.

    [10]雷世勇, 丁理法, 黃福勇, 等. 可口革囊星蟲不同組織同工酶的比較[J]. 生物學雜志, 2013, 30(4): 11-14.

    [11]胡能書, 萬賢國. 同工酶技術(shù)及其應(yīng)用[M]. 長沙: 湖南科學技術(shù)出版社, 1985.

    [12]王中仁. 植物等位酶分析[M]. 北京: 科學出版社, 1996.

    [13]金春華, 鐘愛華, 張海琪, 等. 大彈涂魚不同組織器官的同工酶研究[J]. 海洋科學, 2004, 28(3): 35-40.

    [14]李明云, 黃福勇. 香魚肌肉與免疫器官6種同工酶的表達[J]. 動物學雜志, 2005, 40(2): 18-22.

    [15]Kirpichnikov V S. Genetic bases of fish selection[M]. Berlin: SpringerVerlag, 1981. 319-395.

    [16]涂永鋒, 宋代軍. 魚類腸道組織結(jié)構(gòu)及其功能適應(yīng)性[J]. 江西飼料, 2004(4): 16-19.

    [17]管丹冬, 李明云, 葉帥東, 等.岱衢族大黃魚不同組織的同工酶譜[J]. 寧波大學學報:理工版, 2008, 21(1): 34-38.

    [18]董徐輝, 李明云. 日本鬼鲉不同組織的8種同工酶譜[J]. 海洋科學, 2010, 34(10): 18-23.

    猜你喜歡
    同工酶脫氫酶條帶
    菌源同工酶分析揭示菌源DPP4同工酶是潛在的抗2型糖尿病靶點
    遺傳(2023年8期)2023-08-25 06:59:00
    缺糖基轉(zhuǎn)鐵蛋白與線粒體同工酶在酒精性肝病中的臨床應(yīng)用
    人11β-羥基類固醇脫氫酶基因克隆與表達的實驗研究
    基于條帶模式GEOSAR-TOPS模式UAVSAR的雙基成像算法
    乙醇脫氫酶的克隆表達及酶活優(yōu)化
    基于 Savitzky-Golay 加權(quán)擬合的紅外圖像非均勻性條帶校正方法
    中國光學(2015年1期)2015-06-06 18:30:20
    急性白血病患者乳酸脫氫酶水平的臨床觀察
    一種基于MATLAB的聲吶條帶圖像自動拼接算法
    海岸工程(2014年4期)2014-02-27 12:51:28
    茶葉多酚氧化酶及其同工酶的研究進展
    茶葉通訊(2014年2期)2014-02-27 07:55:39
    鴨心蘋果酸脫氫酶的分離純化及酶學性質(zhì)
    食品科學(2013年23期)2013-03-11 18:30:10
    国产黄色视频一区二区在线观看| 美女内射精品一级片tv| 欧美一区二区亚洲| 美女福利国产在线 | 国产精品一区www在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 中文字幕久久专区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 欧美日韩综合久久久久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩国内少妇激情av| 国产免费又黄又爽又色| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美成人午夜免费资源| 青春草国产在线视频| 国产精品一区www在线观看| 免费观看的影片在线观看| 91精品国产国语对白视频| 免费观看无遮挡的男女| 久久97久久精品| 国产精品久久久久久av不卡| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲精品一二三| av福利片在线观看| 亚洲精品视频女| av国产免费在线观看| 深夜a级毛片| 精品一区二区免费观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美日本视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产熟女欧美一区二区| 岛国毛片在线播放| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 看非洲黑人一级黄片| 又大又黄又爽视频免费| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 美女内射精品一级片tv| 午夜精品国产一区二区电影| 久久婷婷青草| 国产av精品麻豆| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 最黄视频免费看| 精华霜和精华液先用哪个| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 九色成人免费人妻av| 99久国产av精品国产电影| 男人狂女人下面高潮的视频| 晚上一个人看的免费电影| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美bdsm另类| 一级毛片电影观看| 国产亚洲精品久久久com| 性色av一级| 国产91av在线免费观看| 国产成人a区在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲av二区三区四区| 熟女电影av网| 精华霜和精华液先用哪个| 久久精品久久精品一区二区三区| 一级av片app| 日韩国内少妇激情av| 精品久久久久久久久亚洲| av国产精品久久久久影院| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 十八禁网站网址无遮挡 | 七月丁香在线播放| 一本久久精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 全区人妻精品视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 在线观看人妻少妇| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 插阴视频在线观看视频| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲第一区二区三区不卡| xxx大片免费视频| 五月天丁香电影| 久久久a久久爽久久v久久| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 色婷婷久久久亚洲欧美| 免费少妇av软件| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 2018国产大陆天天弄谢| 国产美女午夜福利| 国产成人午夜福利电影在线观看| av播播在线观看一区| 综合色丁香网| 亚洲国产成人一精品久久久| 看十八女毛片水多多多| www.色视频.com| 大香蕉97超碰在线| 黄色欧美视频在线观看| 午夜福利高清视频| 精品一区在线观看国产| 国产亚洲一区二区精品| 十八禁网站网址无遮挡 | 男男h啪啪无遮挡| 久久精品国产a三级三级三级| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久成人免费电影| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲人成网站高清观看| 成人毛片60女人毛片免费| 国产精品三级大全| 秋霞在线观看毛片| 内射极品少妇av片p| 欧美bdsm另类| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲av成人精品一区久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日韩强制内射视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 99久久精品热视频| 免费观看的影片在线观看| 久久婷婷青草| av在线观看视频网站免费| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 观看美女的网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 在线天堂最新版资源| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 免费黄色在线免费观看| 人妻一区二区av| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产最新在线播放| 日本欧美视频一区| freevideosex欧美| 校园人妻丝袜中文字幕| 伊人久久国产一区二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人特级av手机在线观看| 亚洲成人手机| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美激情国产日韩精品一区| 午夜福利高清视频| 成人漫画全彩无遮挡| 久久久久久久国产电影| 欧美三级亚洲精品| av一本久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 插逼视频在线观看| 97在线视频观看| 久久久久性生活片| 亚洲精品一区蜜桃| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜福利影视在线免费观看| 特大巨黑吊av在线直播| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清午夜精品一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产成人aa在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品一区二区在线观看99| 日本av免费视频播放| 午夜激情久久久久久久| 久久午夜福利片| 婷婷色av中文字幕| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品国产三级专区第一集| 五月玫瑰六月丁香| 精品少妇久久久久久888优播| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品亚洲成a人片在线观看 | 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产高清有码在线观看视频| 一本一本综合久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 精品人妻视频免费看| 一本久久精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 最新中文字幕久久久久| 日韩亚洲欧美综合| 91狼人影院| 99热网站在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 99九九线精品视频在线观看视频| 国产深夜福利视频在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 最近最新中文字幕大全电影3| 日日啪夜夜撸| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 在线观看免费视频网站a站| 深夜a级毛片| 久久国内精品自在自线图片| 日韩成人伦理影院| 99热网站在线观看| 久久人人爽人人片av| 亚洲av二区三区四区| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产精品一区二区在线观看99| 一级a做视频免费观看| 18禁动态无遮挡网站| 免费观看在线日韩| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 男女边摸边吃奶| av卡一久久| 赤兔流量卡办理| 一区二区av电影网| 免费黄色在线免费观看| 欧美最新免费一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久久人妻| 男的添女的下面高潮视频| 国产av国产精品国产| 男人添女人高潮全过程视频| 日韩中字成人| 国产人妻一区二区三区在| 色综合色国产| 欧美另类一区| 久久久久久久久久久丰满| 午夜福利在线在线| 最近手机中文字幕大全| 色5月婷婷丁香| 久久久久视频综合| 香蕉精品网在线| 三级国产精品欧美在线观看| 国产av国产精品国产| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 99热6这里只有精品| 插逼视频在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 国产色婷婷99| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品一区www在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一级毛片电影观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国内精品宾馆在线| 国产成人精品福利久久| 成人特级av手机在线观看| av黄色大香蕉| 男人舔奶头视频| 日韩欧美精品免费久久| 人妻一区二区av| 久久人人爽人人爽人人片va| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲av国产av综合av卡| 春色校园在线视频观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人freesex在线| 亚洲国产欧美人成| 中文在线观看免费www的网站| 中文欧美无线码| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲成人av在线免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 联通29元200g的流量卡| 日本wwww免费看| 欧美3d第一页| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 日韩免费高清中文字幕av| 日本黄色日本黄色录像| 免费av中文字幕在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 免费观看a级毛片全部| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日本免费在线观看一区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女中出高潮动态图| 久久99精品国语久久久| 国产视频首页在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久久久久伊人网av| 免费观看无遮挡的男女| 在线观看免费视频网站a站| 久久精品人妻少妇| 色吧在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 免费人成在线观看视频色| 亚洲av国产av综合av卡| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产高清三级在线| 日本午夜av视频| 丝袜脚勾引网站| 国产黄片美女视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲人成网站在线播| av.在线天堂| 伦理电影免费视频| 国产69精品久久久久777片| 伊人久久精品亚洲午夜| 日日撸夜夜添| 国产视频内射| 伦理电影大哥的女人| 国产成人91sexporn| 在线 av 中文字幕| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一级毛片电影观看| 久久久久久久久久久丰满| 在线观看免费日韩欧美大片 | 大陆偷拍与自拍| 视频中文字幕在线观看| 日日啪夜夜爽| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 91精品国产国语对白视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 最新中文字幕久久久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 伦理电影大哥的女人| 免费av中文字幕在线| 如何舔出高潮| av在线蜜桃| 观看美女的网站| 联通29元200g的流量卡| 婷婷色综合大香蕉| 久久久色成人| 麻豆成人av视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 韩国av在线不卡| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 成人影院久久| 国产在线一区二区三区精| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜免费观看性视频| 欧美bdsm另类| 日韩 亚洲 欧美在线| 看十八女毛片水多多多| 欧美国产精品一级二级三级 | 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲色图av天堂| 一级片'在线观看视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 大陆偷拍与自拍| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲久久久国产精品| 中国国产av一级| 久久久欧美国产精品| 高清av免费在线| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 国产日韩欧美亚洲二区| 美女国产视频在线观看| av线在线观看网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美日韩在线观看h| 久久99热6这里只有精品| 久久久午夜欧美精品| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲欧美精品专区久久| 色视频www国产| 久久99精品国语久久久| 青春草国产在线视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲国产色片| 日韩欧美 国产精品| 在线 av 中文字幕| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲电影在线观看av| 春色校园在线视频观看| 天堂中文最新版在线下载| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美三级亚洲精品| 在现免费观看毛片| 两个人的视频大全免费| 老司机影院成人| 亚洲精品aⅴ在线观看| 丝袜脚勾引网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品自拍成人| 麻豆乱淫一区二区| 国产黄频视频在线观看| 国产视频内射| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩中字成人| 亚洲图色成人| 国产精品一及| 亚洲人成网站高清观看| 久久久国产一区二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 成人特级av手机在线观看| 免费看不卡的av| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 在线观看美女被高潮喷水网站| 十八禁网站网址无遮挡 | 内地一区二区视频在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚州av有码| 国产淫语在线视频| 国产亚洲最大av| 人妻一区二区av| av在线播放精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一区二区三区免费毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲四区av| 成人毛片a级毛片在线播放| 少妇 在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产 一区 欧美 日韩| 国产男人的电影天堂91| 国产欧美日韩精品一区二区| 搡老乐熟女国产| 亚洲在久久综合| 午夜福利视频精品| 欧美区成人在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 久久99热6这里只有精品| 免费观看a级毛片全部| 欧美高清性xxxxhd video| 色吧在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 激情 狠狠 欧美| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲精品久久午夜乱码| 免费av不卡在线播放| 一本久久精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久久性生活片| 日韩中字成人| 涩涩av久久男人的天堂| 少妇的逼好多水| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品少妇久久久久久888优播| 三级经典国产精品| 一本一本综合久久| 这个男人来自地球电影免费观看 | 一级黄片播放器| 一区在线观看完整版| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 中国三级夫妇交换| 人妻 亚洲 视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 色综合色国产| 99久久精品国产国产毛片| 久久精品人妻少妇| 久热久热在线精品观看| 99久久精品热视频| 精品视频人人做人人爽| 青春草亚洲视频在线观看| 国产在线免费精品| 99久久精品国产国产毛片| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲av不卡在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产熟女欧美一区二区| 大片免费播放器 马上看| 欧美激情国产日韩精品一区| 少妇的逼好多水| 国产淫语在线视频| 高清av免费在线| 人妻 亚洲 视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美日韩在线观看h| 亚洲精品第二区| 中文欧美无线码| 亚洲国产精品国产精品| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲最大成人中文| 在现免费观看毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产色爽女视频免费观看| 国产视频首页在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 老司机影院成人| 欧美日韩在线观看h| videos熟女内射| 91久久精品国产一区二区三区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲图色成人| 欧美少妇被猛烈插入视频| 黄色配什么色好看| 一本一本综合久久| 欧美日韩视频精品一区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产高清国产精品国产三级 | 国精品久久久久久国模美| 永久网站在线| 干丝袜人妻中文字幕| 我的女老师完整版在线观看| kizo精华| 精品久久久精品久久久| 2022亚洲国产成人精品| av线在线观看网站| av一本久久久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 在线 av 中文字幕| 五月伊人婷婷丁香| 中文字幕久久专区| 国产av国产精品国产| 三级国产精品欧美在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 黑人高潮一二区| 国产精品99久久久久久久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久99蜜桃精品久久| 精品亚洲成国产av| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 韩国av在线不卡| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 天天躁日日操中文字幕| 国产永久视频网站| 高清毛片免费看| 国国产精品蜜臀av免费| 国产精品一区二区在线观看99| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久久成人免费电影| 国产成人午夜福利电影在线观看| 丰满少妇做爰视频| 日本与韩国留学比较| 中文在线观看免费www的网站| 中国国产av一级| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日本黄色片子视频| 亚洲精品色激情综合| 久久精品国产亚洲av涩爱| 在现免费观看毛片| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲丝袜综合中文字幕| 六月丁香七月| 亚洲真实伦在线观看| 丝袜喷水一区| 免费观看性生交大片5| 成人毛片60女人毛片免费| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美另类一区| 99精国产麻豆久久婷婷| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲自偷自拍三级| 九草在线视频观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品国产av在线观看| 一级毛片我不卡| 国产精品成人在线| 欧美97在线视频| 国产成人免费无遮挡视频| 久久热精品热| 极品少妇高潮喷水抽搐| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 大话2 男鬼变身卡| 国产91av在线免费观看| 国产视频首页在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 婷婷色av中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 中文欧美无线码| 国产免费又黄又爽又色| 在线观看免费高清a一片| 婷婷色麻豆天堂久久| 老女人水多毛片| 久久青草综合色| 在线观看av片永久免费下载| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久久久久精品精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 老熟女久久久| 青青草视频在线视频观看| 国产免费福利视频在线观看| 成年av动漫网址| 久久影院123| 男女免费视频国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 我要看日韩黄色一级片| 身体一侧抽搐| 老熟女久久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 边亲边吃奶的免费视频| 伊人久久国产一区二区| 天美传媒精品一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 老女人水多毛片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品自拍成人| 一级爰片在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 午夜福利在线在线| 国产免费又黄又爽又色| 六月丁香七月| 精品人妻视频免费看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲欧美清纯卡通| 精品国产乱码久久久久久小说| 蜜桃在线观看..| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久久久久久久成人| 最近2019中文字幕mv第一页|