毛云芝子實(shí)體抗氧化活性研究

摘 要：毛云芝子實(shí)體分別用石油醚、乙酸乙酯、乙醇及水提取其中的活性物質(zhì)，并對(duì)所有提取物從DPPH自由基的清除、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化力及金屬離子螯合力，這三個(gè)方面進(jìn)行體外抗氧化活性的測(cè)定。結(jié)果表明：毛云芝子實(shí)體的各提取物在清除DPPH自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、金屬離子鰲合力的抗氧化活性實(shí)驗(yàn)中，均表現(xiàn)出不同程度的抗氧化活性，且隨濃度的增加活性越強(qiáng)，其中乙酸乙酯提取物的抗氧化活性最高。

關(guān)鍵詞：毛云芝；抗氧化活性；有機(jī)溶劑提取物；多糖

毛云芝（CorioLus hirsutus）又名毛栓菌，隸屬于非褶菌目多孔菌科云芝屬，它是一種藥用真菌，民間常用于除風(fēng)濕、療肺疾、化膿止咳等，也具有一定的抗腫瘤效果[1]。大型真菌的抗氧化活性，越來(lái)越受到關(guān)注，野生毛云芝產(chǎn)量較大，易于采集，而且現(xiàn)在已能人工栽培，所以對(duì)毛云芝抗氧化活性的研究具有一定的意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

毛云芝子實(shí)體采自承德圍場(chǎng)縣。石油醚、乙酸乙酯、乙醇等為國(guó)產(chǎn)分析純，DPPH、BHA等購(gòu)自sigma公司，F(xiàn)errozine等購(gòu)自生工生物工程（上海）有限公司。

1.2 毛云芝子實(shí)體活性物質(zhì)的制備

將子實(shí)體干粉，按1：10的比例，依次用石油醚、乙酸乙酯，乙醇浸提。浸提物濃縮干燥，得到的干燥品為各有機(jī)相。用有機(jī)溶劑萃取后，往干燥的子實(shí)體干粉加入蒸餾水，80℃浸提，將提取液濃縮，加入2倍體積的95%乙醇過(guò)夜沉淀，離心得沉淀即子實(shí)體多糖。

1.3 毛云芝子實(shí)體提取物抗氧化活性測(cè)定

（1）清除DPPH·的測(cè)定方法

參考Brand-Williams W等（1995）實(shí)驗(yàn)方法 [2]。以Vc和BHA作為陽(yáng)性對(duì)照。

（2）抑制脂質(zhì)過(guò)氧化活性實(shí)驗(yàn)方法

參考Joao C·M·Barreira等（2008）的實(shí)驗(yàn)方法[3]。以Vc和BHA作為陽(yáng)性對(duì)照。

（3）金屬離子螯合能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法

參考DinisT·C·P等（1994）實(shí)驗(yàn)方法[4]。以EDTA作為陽(yáng)性對(duì)照。

2 結(jié)果與分析

2.1 毛云芝提取物清除DPPH的測(cè)定結(jié)果

清除DPPH自由基法是一種簡(jiǎn)單快速的驗(yàn)證提取物對(duì)自由基清除能力的方法，常用來(lái)評(píng)估抗氧化物的供氫能力[5]，毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖清除DPPH自由基的測(cè)定結(jié)果：除了毛云芝石油醚相在0.5mg/mL時(shí)不具有清除DPPH自由基的作用外，其它提取物在不同濃度下均具有不同程度的清除作用。而毛云芝石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖清除率的IC50值分別是12.23mg/mL、1.25mg/mL、1.31mg/mL、7.24mg/mL，可見乙酸乙酯提取物清除自由基的能力最強(qiáng)。

2.2 毛云芝提取物抑制脂質(zhì)過(guò)氧化活性測(cè)定結(jié)果

脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物MDA，使細(xì)胞的新陳代謝紊亂、免疫能力減低、結(jié)構(gòu)和功能的改變等，而脂類是構(gòu)成生物膜的重要成分[6]。因此，抑制脂類的過(guò)氧化具有重要的生物學(xué)意義。毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖的抑制脂質(zhì)過(guò)氧化活性測(cè)定結(jié)果：毛云芝各有機(jī)相的提取物在不同濃度下均具有不同程度的抑制肝脂質(zhì)過(guò)氧化作用。在不同濃度下，乙酸乙酯提取物的抑制過(guò)氧化作用均高于其它提取物。其石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖IC50值分別是5.02mg/mL、0.26mg/mL、1.17mg/mL和10.54mg/mL，也表明乙酸乙酯提取物抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用最強(qiáng)。

2.3 毛云芝提取物金屬離子鰲合力測(cè)定結(jié)果

抗氧化機(jī)制中螯合過(guò)渡金屬離子也是判定某物質(zhì)抗氧化能力的重要指標(biāo)，螯合Fe2+不僅能終止Fe2+參與的自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，還能抑制高攻擊性O(shè)H的釋放，從而中斷脂質(zhì)氧化的反應(yīng)鏈，對(duì)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化非常重要[7]。另外，對(duì)Fe2+的絡(luò)合可以抑制含F(xiàn)e2+脂肪酶的活性，延緩氧化進(jìn)程。毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖的金屬離子螯合力測(cè)定結(jié)果：毛云芝各提取物在不同濃度下均有不同程度的金屬離子螯合能力。其石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖IC50值分別是118.24mg/mL，4.32mg/mL，7.88mg/mL和9.16mg/mL，可見乙酸乙酯提取物螯合金屬離子的能力最強(qiáng)。

3 結(jié)束語(yǔ)

通過(guò)對(duì)毛云芝子實(shí)體的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和多糖的抗氧化力的測(cè)定，表明幾種提取物均具有不同程度的抗氧化活性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所計(jì)算出的IC50值，得到乙酸乙酯提取物在清除DPPH自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和螯合金屬離子方面具有較高活性，隨提取物濃度的增加抗氧化活性增加顯著，優(yōu)于或接近于陽(yáng)性對(duì)照。雖然對(duì)多糖的抗氧化性研究的較早也較成熟，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示毛云芝多糖的抗氧化性不高。研究較多的抗氧化物質(zhì)有酚類、三萜類、黃酮類等，但乙酸乙酯提取物中的抗氧化物質(zhì)有幾種、是哪種物質(zhì)，就需要做進(jìn)一步的分離純化才能得出結(jié)論。

參考文獻(xiàn)

[1]卯曉嵐.中國(guó)大型真菌[M].鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000.

[2]Brand-WiLLiams W.， CuveLier M. E.， Berset C.. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity[J]. Food Science and Technology， 1995， 28： 25-30.

[3] Joao C.M. Barreira ， Isabel C.F.R. Ferreira ， M. Beatriz P.P. OLiveir ，et al. Antioxidant activities of the extracts from chestnut flower，leaf， skins and fruit[J]. Food Chemistry， 2008， 107： 1106-1113.

[4] Dinis T.C.P.， Madeira V.M.C.， ALmeida L.M.. Action of phenolic derivates （acetoaminophen， salycilate， and 5-aminosalycilate） as inhibitors of membrane lipid peroxidation and as peroxyl radical scavengers[J]. Archive Biochemistry Biophysics， 1994， 315： 161-169.

[5]彭長(zhǎng)連，陳少薇，林植芳，等. 用清除有機(jī)自由基DPPH法評(píng)價(jià)植物抗氧化能力[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展， 2000.

[6]李燕，蔡?hào)|聯(lián)，胡同杰，等. 銀耳多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性衰老小鼠的保護(hù)作用[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004.

[7]BraughLer J.M.，Chase R.L.，Pregenzer J.F. Oxidation of ferrous ion during peroxidation of various lipid substrates[J]. Biochimica Biophysica Acta， 1987， 921： 457-464.

作者簡(jiǎn)介：李潔（1984，4-），女，籍貫：河北省定州市，學(xué)位：碩士，職稱：助理工程師，研究方向：真菌生化與分子生物學(xué)。