大麻素受體2對(duì)肥胖小鼠空腹血糖、胰島素的影響

陳 彥 許桂平 陳 剛 余惠珍 吳 冰

1.福建省立醫(yī)院干部特診二科，福建福州 350001；2.福建省立醫(yī)院內(nèi)分泌科，福建福州 350001

大麻素受體2對(duì)肥胖小鼠空腹血糖、胰島素的影響

陳 彥1許桂平1陳 剛2余惠珍1吳 冰1

1.福建省立醫(yī)院干部特診二科，福建福州 350001；2.福建省立醫(yī)院內(nèi)分泌科，福建福州 350001

目的 研究大麻素受體2（type 2 cannabinoid receptor,CB2受體）對(duì)肥胖小鼠空腹血糖（fasting blood-glucose,FBS）和空腹胰島素的影響（fasting insulin,FINS）。方法 在2012年6—9月期間，把20只雄性小鼠隨機(jī)分為正常組（N=4）、肥胖組（N= 16），分別給予普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)6周，成功制作肥胖小鼠模型。再將肥胖小鼠隨機(jī)分為4組：模型組（S組、N=4）、CB2激動(dòng)劑JWH-133干預(yù)組（J組、N=4）、CB2拮抗劑AM-630干預(yù)組（A組、N=4）、JWH-133+AM-630干預(yù)組（AJ組、N= 4）。N組、S組腹腔內(nèi)注射生理鹽水,10mg/kg；J、A、AJ組分別腹腔內(nèi)注射JWH-133、AM-630、JWH-133+AM-630，10mg/kg；均1次/d，共28 d。藥物干預(yù)前后測(cè)定小鼠的FBS、FINS。結(jié)果 給藥第4周J組小鼠水平FBS、FINS明顯高于S組，A組小鼠上述指標(biāo)明顯低于S組（P<0.05），AJ組指標(biāo)與S組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 CB2受體在肥胖、胰島素抵抗發(fā)病機(jī)制中起重要作用，激活CB2受體會(huì)增加肥胖小鼠FBS、FINS水平，抑制CB2受體會(huì)減低肥胖小鼠FBS、FINS水平。

大麻素受體2；肥胖小鼠；空腹血糖；空腹胰島素

內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)（endocannabinoid，EC）與肥胖和胰島素抵抗的發(fā)生關(guān)系密切[1]。分離出的胰島β細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)了CB1和CB2受體，文獻(xiàn)表明通過(guò)刺激鼠與人胰島素上的CB1受體，鼠與人的胰島素與胰高血糖素分泌增加[2-4]。CB2受體主要存在于生物體的外周免疫系統(tǒng)中，還有少部分在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有很好的神經(jīng)保護(hù)及鎮(zhèn)痛的作用[5]。目前國(guó)際對(duì)CB2在肥胖中的發(fā)病機(jī)制還沒(méi)有定論，該研究于2012年6—9月通過(guò)CB2受體激動(dòng)劑及拮抗劑的干預(yù)，觀察CB2受體對(duì)肥胖小鼠FBG、FINS的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

胰島素放射免疫試劑盒（羅氏公司），JWH-133、AM-630(Sigma公司)，7200型全自動(dòng)分析儀(津島公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

20只野生型C57Bl/6J小鼠，2月齡，雄性，平均體重(21±2)g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分組。正常組(N=4)飼以普通鼠料，脂肪占總熱量10%。其余大鼠飼以高脂飼料，脂肪占總熱量65%,制備肥胖小鼠模型。肥胖小鼠造模成功標(biāo)準(zhǔn)參照如下：小鼠體重高于正常組,空腹血糖、TG水平高于正常組。16只小鼠飼養(yǎng)6周時(shí),均造模成功。將肥胖小鼠隨機(jī)分為4組：模型組（S組，N=4）、CB2激動(dòng)劑JWH-133干預(yù)組（J組，N=4）、CB2拮抗劑AM-630干預(yù)組（A組，N=4）、JWH-133+AM-630干預(yù)組（AJ組，N=4）。N組、S組腹腔內(nèi)注射生理鹽水,10 mg/kg；J、A、AJ組分別腹腔內(nèi)注射JWH-133、AM-630、JWH-133+AM-630，10 mg/kg；均1次/d，共28 d。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)

藥物干預(yù)前后檢測(cè)各組小鼠FBG、FINS水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（）表示，其中多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Bonferroni檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠的FBG

J組小鼠給藥第1、2周FBG較S組稍增高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；給藥第3、4周FBG明顯高于S組、高于同組給藥第1周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A組小鼠給藥第1、2、3周FBG均較S組稍減低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；給藥第4周FBG明顯低于S組、低于同組給藥第1、2、3周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。AJ組小鼠給藥后FBG與S組對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠的FBG（mmol/l）（）

表1 各組小鼠的FBG（mmol/l）（）

注：①P<0.05，與N組對(duì)比；②P<0.05，與S組對(duì)比；③P<0.05，與給藥第1周對(duì)比；④P<0.05,與給藥第2周對(duì)比；⑤P<0.05,與給藥第2周對(duì)比。

組別 給藥第1周 給藥第2周 給藥第3周 給藥第4周N組S組J組A組AJ組4.1±0.1（4.5±0.2）①（4.9±0.1）①4.5±0.1 4.6±0.2 4.2±0.2（4.6±0.3）①（5.2±0.2）①4.5±0.2 4.5±0.1 4.3±0.2（4.6±0.2）①（5.6±0.2）①②③4.4±0.1 4.6±0.3 4.2±0.1（4.7±0.3）①（5.8±0.1）①②③④（4.4±0.1）②③④⑤4.7±0.2

2.2 各組小鼠的FINS

J組小鼠給藥第1、2周FINS水平較S組稍增高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；給藥第3、4周FINS水平明顯高于S組，給藥第4周FINS水平明顯高于同組給藥第1、2周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A組小鼠給藥第1周FINS水平均較S組稍減低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；給藥第2、3、4周FINS水平明顯低于S組，給藥第3、4周FINS水平明顯高于N組，給藥第4周FINS水平明顯低于同組給藥第1周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。AJ組小鼠給藥后FINS水平與S組對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P> 0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠的FINS（IU/L）（）

表2 各組小鼠的FINS（IU/L）（）

注：①P<0.05，與N組對(duì)比；②P<0.05，與S組對(duì)比；③P<0.05，與給藥第1周對(duì)比；④P<0.05,與給藥第2周對(duì)比。

組別 給藥第1周 給藥第2周 給藥第3周 給藥第4周N組S組J組 A組AJ組6.4±1.4（10.9±0.9）①11.1±3.5 10.7±3.5 11.5±1.2 6.5±1.4（11.1±0.8）①11.5±3.6（10.0±3.0）②11.2±0.9 6.3±1.3（11.0±0.7）①（12.0±3.9）②③（8.0±2.6）①②11.3±1.0 6.4±1.3（10.7±0.7）①（19.7±3.7）②③④（7.5±1.4）①②③11.0±0.8

3 討論

該研究發(fā)現(xiàn)與普通飼料喂養(yǎng)的小鼠對(duì)比，肥胖小鼠FBG、FINS水平明顯升高。給予CB2受體拮抗劑干預(yù)后,肥胖小鼠的FBG、FINS水平明顯下降,與模型組比較有明顯差異，且隨著干預(yù)的時(shí)間增加，下降的程度加大；相反，給予CB2受體激動(dòng)劑干預(yù)后，肥胖小鼠的FBG、FINS水平亦明顯增高,與模型組比較有明顯差異，且隨著干預(yù)的時(shí)間增加，增高的程度加大。表明CB2受體和CB1受體相似，也在肥胖、胰島素抵抗的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，導(dǎo)致血糖升高。該研究同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，雖然給予CB2拮抗劑干預(yù)，但肥胖小鼠的FINS水平仍明顯高于N組，提示未能使高胰島素血癥完全恢復(fù)正常，考慮可能與藥物干預(yù)時(shí)間較短有關(guān)，仍需進(jìn)一步增加藥物干預(yù)時(shí)間后進(jìn)一步觀察。

CB1和CB2受體均存在于胰島β細(xì)胞上,研究發(fā)現(xiàn)CB1受體在胰島素抵抗發(fā)病機(jī)制中起重要作用，而CB2受體有良好的鎮(zhèn)痛和神經(jīng)保護(hù)作用、在胰島素抵抗發(fā)病機(jī)制中的研究很少。有動(dòng)物研究報(bào)道CB1受體激動(dòng)劑使糖耐量減低,而CB1受體抑制劑可逆轉(zhuǎn)此效應(yīng)；有臨床研究中報(bào)道，服用CB1受體拮抗劑可以減輕體重、降血脂，還改善肥胖患者胰島素抵抗的程度[6-9]。既往的研究發(fā)現(xiàn)CB1主要使食物攝入增多、外周能量消耗減少，通過(guò)肝細(xì)胞中的CB1使肝細(xì)胞的脂肪生成增多；其機(jī)制可能是激活CB1可使肝臟脂肪合成轉(zhuǎn)錄因子固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2lc、乙酰輔酶A羧化酶-1和脂肪酸合成酶基因表達(dá)增高,引起小鼠肥胖[10-11]。目前已經(jīng)已經(jīng)研發(fā)出CB1拮抗劑如雷蒙那班(rimonabant)和泰倫那班(taranabant)以治療肥胖并可顯著改善胰島素抵抗。

該研究發(fā)現(xiàn)CB2受體和CB1受體一樣，在胰島素抵抗發(fā)病機(jī)制中起重要作用，對(duì)肥胖小鼠FBG和FINS產(chǎn)生影響。但激動(dòng)或抑制CB2受體后產(chǎn)生上述效應(yīng)的具體分子機(jī)制尚不明確，今后仍需進(jìn)一步的分子水平的研究闡述詳細(xì)作用機(jī)制。

[1]閆曉潔,秦貴軍,樊大貝,等.內(nèi)源性大麻素受體1在肥胖大鼠胰腺表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2009,25(6):638-641.

[2]樊大貝,秦貴軍,余勤,等.大麻素受體1激動(dòng)劑和抑制劑對(duì)肥胖大鼠胰島β細(xì)胞功能的影響[J].中華糖尿病雜志,2009,1(6):450-453.

[3]閆曉潔,陸澤元,柳嵐,等.免疫組化及原位雜交的方法檢測(cè)內(nèi)源性大麻素受體1在肥胖大鼠胰腺的表達(dá)[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010，9(22): 1684-1686.

[4]郭慶畬.內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在2型糖尿病與肥胖中生化機(jī)制[J].醫(yī)學(xué)綜述,2009,15(10):1458-1461.

[5]吳永濤,冷少華,劉宏亮,等.中樞神經(jīng)大麻素受體分布的細(xì)胞類(lèi)型研究[J].局解手術(shù)學(xué)雜志,2014,23(4):336-338.

[6]薛妮娜.新型CB1R拮抗劑/反向激動(dòng)劑MJ08對(duì)小鼠糖脂代謝的影響[D].西安：第四軍醫(yī)大學(xué),2011.

[7]趙艷.大麻素系統(tǒng)抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究進(jìn)展[J].心血管病學(xué)進(jìn)展,2010,31(3):449-451.

[8]肖玲,陳彥,張晉源,等.內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)對(duì)慢性間歇低氧大鼠糖代謝的影響機(jī)制[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2014,94(20):1581-1583.

[9]周廣海,金松南,文今福,等.內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)對(duì)心血管功能的調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2011,27(7):903-906.

[10]楊莉,趙連英,劉彥超,等.大麻素受體1和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶在肝纖維化小鼠肝組織中的表達(dá)及意義[J].臨床肝膽病雜志,2012,28(9): 681-684.

[11]張晉源,陳彥,肖玲,等.內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在慢性間歇低氧大鼠心肌肥厚病理過(guò)程中的作用[J].中國(guó)循環(huán)雜志,2014(7):545.

R4

A

1674-0742（2014）12（b）－0047-02

2014-09-14）

項(xiàng)目或攻關(guān)課題

論文若系部、省級(jí)以上基金資助項(xiàng)目或攻關(guān)課題（作者應(yīng)附證書(shū)或文件復(fù)印件，并按期編號(hào)保存），或者曾在重要國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議上報(bào)告，可在題名頁(yè)標(biāo)注腳注（左下角）。曾在國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議上報(bào)告的論文一般不必注明。

[基金項(xiàng)目]福建省衛(wèi)生廳青年科研課題（2010-1-4）。

[作者簡(jiǎn)歷]陳彥（1977.11-），女，福建福州人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：內(nèi)分泌與代謝性疾病。

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