外周血CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞亞群與胃癌的相關(guān)研究

張保國

外周血CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞亞群與胃癌的相關(guān)研究

張保國

目的探討Ⅳ期胃癌患者外周血CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞表達(dá)狀態(tài)與疾病臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。方法采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測40例胃癌患者外周血CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞數(shù)目及二者之間的比值；收集胃癌患者臨床病理資料并進(jìn)行隨訪，分析CD4＋T和CD8＋T表達(dá)狀態(tài)與臨床病理特征及無疾病進(jìn)展生存時間（PFS）之間的關(guān)系。結(jié)果CD4＋T細(xì)胞與胃癌患者年齡、腫瘤分化程度、KPS評分及PFS無明顯相關(guān)性，與性別有相關(guān)性（P＜0.05）。CD8＋T細(xì)胞與性別、腫瘤分化程度有相關(guān)性（P＜0.05），與年齡、Karnofsky功能狀態(tài)評分（KPS評分）、PFS無明顯相關(guān)性。CD4＋／CD8＋比值與性別、年齡、腫瘤分化程度均無相關(guān)性，與KPS評分顯著相關(guān)（P＜0.05）。生存分析發(fā)現(xiàn)，CD4＋／CD8＋比值與PFS有明顯相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)論CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞在胃癌抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用，檢測其比值對于判斷胃癌的預(yù)后具有一定價值。

CD4＋T細(xì)胞；CD8＋T細(xì)胞；胃癌；預(yù)后

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈上升趨勢。機(jī)體免疫功能抑制和免疫狀態(tài)異常是介導(dǎo)腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因。Ho等［1］認(rèn)為在機(jī)體免疫失衡狀態(tài)下，腫瘤細(xì)胞可以逃避免疫細(xì)胞的監(jiān)控，發(fā)生免疫逃逸，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展。T細(xì)胞亞群是抗腫瘤免疫中重要的一類淋巴細(xì)胞［2］，主要包括CD4＋T細(xì)胞與CD8＋T細(xì)胞。CD4＋T細(xì)胞作為輔助性T細(xì)胞能產(chǎn)生淋巴因子，增強(qiáng)CD8＋T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞功能，具有輔助細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答作用，CD8＋T細(xì)胞作為抑制性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞，是重要的效應(yīng)細(xì)胞，二者之間的平衡維持著機(jī)體正常的免疫應(yīng)答［3?4］。本研究通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測Ⅳ期胃癌患者外周血中CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞的表達(dá)情況，分析其與一系列臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性及與患者預(yù)后之間的關(guān)系，為臨床診療提供新的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 研究對象均來自南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院腫瘤內(nèi)科。所有對象為2010年12月至2012年12月期間住院的Ⅳ期胃癌患者，接受晚期一線化療，共40例。其中男30例，女10例，年齡25～85歲，中位年齡64歲。對所有患者均進(jìn)行Karnofsky功能狀態(tài)評分（KPS評分）［5］。所有患者均在化療前2 d清晨抽取空腹血檢測。所有研究對象在近期內(nèi)均無急、慢性細(xì)菌性感染及病毒性感染，均無自身免疫性疾病或使用過免疫抑制劑。所有患者隨訪至2013年3月，隨訪內(nèi)容包括腫瘤指標(biāo)、CT、胃鏡等。

1.2 試驗方法 所有研究對象均于化療前2 d抽取清晨空腹靜脈血2ml，肝素抗凝。取50μl抗凝血于流式專用試管中，加入Beckman Coulter公司提供的CD45 FITC（異硫氰酸熒光素）、CD4 RD1（藻紅蛋白）、CD8 ECD（藻紅蛋白?德州紅?X）、CD3 PC5（藻紅蛋白?花青苷5）四標(biāo)記單克隆熒光抗體20μl，混勻，室溫避光反應(yīng)20min，加入500μl紅細(xì)胞裂解液，溶解紅細(xì)胞5～10 min，1000×g離心5min，棄上清，再加入1ml PBS，1000× g離心5min，棄上清，補(bǔ)足500μl磷酸鹽緩沖液，混勻后上Beckman Coulter公司CYTOMICS FC500型流式細(xì)胞儀檢測并使用CXP軟件獲取10 000個細(xì)胞，以SSC（側(cè)向角散射）／CD45設(shè)門，記錄輔助／誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞（CD45＋CD3＋CD4＋CD8－）、抑制／細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CD45＋CD3＋CD4－CD8＋）百分?jǐn)?shù)并計算輔助／抑制T淋巴細(xì)胞比值（CD4＋／CD8＋）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間數(shù)據(jù)分析采用t檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗，生存分析采用Kaplan?Meier分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌患者外周血CD4＋細(xì)胞、CD8＋細(xì)胞的表達(dá)狀態(tài) 40例胃癌患者外周血CD4＋T值為33.41±10.30，CD8＋T值為27.51±10.59，CD4＋／CD8＋在正常范圍內(nèi)的均值為1.33±0.30，CD4＋／CD8＋異常的均值為1.67 ±1.30。

2.2 CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞與臨床參數(shù)之間的關(guān)系 CD4＋T細(xì)胞計數(shù)與年齡、分化程度、KPS評分無關(guān)，與性別相關(guān)（P＜0.05），女性患者CD4＋T細(xì)胞較男性患者高；CD8＋T細(xì)胞與性別、分化相關(guān)（P＜0.05），男性患者CD8＋T細(xì)胞較女性患者高；分化程度越差，CD8＋T細(xì)胞越低。CD4＋／CD8＋與性別、年齡、分化程度均無相關(guān)性，而與KPS評分相關(guān)（P＝0.039），KPS評分越高，CD4＋／CD8＋在正常范圍內(nèi)的比例越高。見表1。

表1 CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞與臨床參數(shù)之間的關(guān)系

2.3 各臨床參數(shù)與患者生存期之間的關(guān)系 采用Kaplan?Meier生存分析發(fā)現(xiàn)，CD4＋／CD8＋比值與PFS有明顯相關(guān)性，CD4＋／CD8＋比值在正常范圍內(nèi)的患者PFS顯著高于異常者（P＝0.012）（圖1）。而性別、年齡、分化程度、KPS評分、CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞與PFS無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討論

胃癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，居全世界惡性腫瘤死因第4位，我國是胃癌高發(fā)區(qū)，其發(fā)病率和死亡率遠(yuǎn)超世界的平均水平。機(jī)體的免疫狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［6］，當(dāng)機(jī)體的免疫功能受到抑制，腫瘤的生長速度明顯增快，快速發(fā)展的腫瘤又反饋性加劇機(jī)體免疫功能的破壞。T細(xì)胞是抗癌免疫的核心細(xì)胞，包括CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞。CD4＋T細(xì)胞不僅可以分泌大量的細(xì)胞因子輔助CD8＋T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，而且在腫瘤免疫中具有免疫記憶和直接殺傷腫瘤細(xì)胞功能，CD8＋T細(xì)胞除行使殺傷效應(yīng)外，亦具有強(qiáng)烈的調(diào)節(jié)效應(yīng)［7?8］。惡性腫瘤患者多數(shù)處于免疫抑制狀態(tài)，由于免疫功能下降而出現(xiàn)T細(xì)胞亞群的紊亂，其中主要一個表現(xiàn)就是CD4＋／CD8＋比值異常。

圖1 CD4＋／CD8＋與胃癌患者PFS的關(guān)系

CD4＋T細(xì)胞并不是一種單一的淋巴細(xì)胞，而是一系列具有不同功能的細(xì)胞群。近年來，隨著對CD4＋T細(xì)胞研究的深入，目前已經(jīng)證實活化的CD4＋T細(xì)胞可以分為CD4＋的輔助性T細(xì)胞和CD4＋CD25＋的調(diào)節(jié)性／抑制性T細(xì)胞（regulatory／suppressor T cell）兩大類。其中，輔助性T細(xì)胞主要包括Th1、Th2和Th17。這些不同的亞群具有抗腫瘤或抑制免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤生長等截然相反的功能［9］。長期以來，人們認(rèn)為Th1和Th2細(xì)胞具有抗腫瘤免疫功能。作為輔助性T細(xì)胞，CD4＋T細(xì)胞通過分泌干擾素（IFN）等細(xì)胞因子和CD8＋T細(xì)胞共刺激分子輔助細(xì)胞毒T細(xì)胞特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。近來，Muranski等［10］已經(jīng)證實Th17細(xì)胞同樣具有抗腫瘤效應(yīng)。CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞具有免疫無能性和免疫抑制性兩大特點。其免疫無能性表現(xiàn)在接受抗原刺激后既不增生也無白介素?2分泌等T細(xì)胞活化的現(xiàn)象；免疫抑制性是指其自身活化后能夠抑制T淋巴細(xì)胞的活化和增殖，進(jìn)而抑制機(jī)體的免疫功能。以往多項研究表明，CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞在多種惡性腫瘤，如肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌等患者體內(nèi)存在增高的現(xiàn)象，而且增高水平與腫瘤分期晚、病程進(jìn)展快及預(yù)后差具有顯著相關(guān)性［11?12］。CD8＋T細(xì)胞又叫CD8＋的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（cytotoxic T cell，CTL），通過穿孔素／顆粒酶途徑和Fas／FasL途徑能夠高效、特異性地殺傷靶細(xì)胞，而不損害正常組織［13］。然而，CTL細(xì)胞的活化部分依賴于Th細(xì)胞，二者的平衡在維持機(jī)體免疫功能中發(fā)揮著重要作用。

本研究結(jié)果顯示，CD4＋／CD8＋比值在正常范圍內(nèi)的患者PSF較CD4＋／CD8＋比值異常者延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＝0.012），而將CD4＋T、CD8＋T細(xì)胞分別進(jìn)行生存分析時卻得到陰性結(jié)果。Shah等［14］在宮頸癌的研究中也得出相似結(jié)果，進(jìn)一步證實以上2種T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。這表明機(jī)體的免疫狀態(tài)不是由單一的一類細(xì)胞調(diào)控，只有各類免疫細(xì)胞維持在一定穩(wěn)態(tài)時才能發(fā)揮最佳的免疫功能。

本研究結(jié)果還顯示CD8＋T細(xì)胞與腫瘤分化程度具有相關(guān)性（P＝0.03），腫瘤分化越差，CD8＋T值越低。CD8＋T具有特異性直接殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，分化越差的腫瘤往往惡性程度越高，越容易產(chǎn)生免疫耐受，導(dǎo)致CD8＋T細(xì)胞表達(dá)降低。另外，KPS評分與CD4＋／CD8＋比值相關(guān)，評分越高，CD4＋／CD8＋比值在正常范圍內(nèi)的例數(shù)越多。KPS評分即功能狀態(tài)評分標(biāo)準(zhǔn)，是用來判斷患者臨床狀態(tài)的一種指標(biāo)，評分越高，健康狀態(tài)越好。本研究結(jié)果顯示，KPS評分高的患者抗腫瘤免疫越強(qiáng)。薛鋒杰等［15］研究68例乳腺癌患者免疫狀態(tài)與生存質(zhì)量之間的關(guān)系，也得到了相同的結(jié)果。本研究結(jié)果還顯示，CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞數(shù)與性別有相關(guān)性，女性患者比男性患者CD4＋T細(xì)胞數(shù)高，而CD8＋T細(xì)胞數(shù)卻相對較低，由于本研究樣本量較小，結(jié)果可能具有偶然性，需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，晚期胃癌外周血CD4＋／CD8＋比值與患者臨床生存質(zhì)量及預(yù)后密切相關(guān)，但是本研究樣本量小，技術(shù)路線相對簡單，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量來證實CD4＋／CD8＋比值是否可成為胃癌預(yù)后指標(biāo)和免疫治療靶標(biāo)。

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Relationship between CD4＋and CD8＋T cells in peripheral blood and gastric cancer

ZHANGBao?guo．Department of Oncology，Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing Medical University，Nanjing 210006，China

ObjectiveTo investigate the relationship of the presence of CD4＋，CD8＋T cells in peripheralblood with the pathologic characteristics and prognosis of gastric cancer.M ethodsFlowcytometry was used to analyze the number and proportion of CD4＋，CD8＋T cells in periphreral blood from 40 patientswith gastric cancer.The clinical data of the pa?tients were collected.The relationship of the proportion and number of CD4＋，CD8＋T cells with the pathologic data and prognosiswere statistically analyzed.ResultsThe number of CD4＋T cells had no correlation with age，differentiation and KPSscore.A higher number of CD4＋Twas detected in female patients（P＜0.05）.The number of CD8＋T cellswas sig?nificantly associated with gender and differentiation（P＜0.05），and notassociated with age and KPSscore（P＝0.15）.Both CD4＋and CD8＋Twere not associated with the prognosis of gastric cancer.The ratio of CD4＋／CD8＋was significantly associa?ted with KPS score，while not associated with age，gender and differentiation.Those patients with normal ratio of CD4＋／CD8＋had a higher KPS score（P＜0.05）and longer progression?free survival time（P＜0.05）.ConclusionsCD4＋and CD8＋T cellsmay have an important role in anti?tumor immune of gastric cancer.Detection of these two kinds of cells has clinical value on evaluating the prognosis of gastric cancer.

CD4＋T cell；CD8＋T cell；gastric cancer；prognosis

R 735.2

A

10.3969／j.issn.1003?9198.2014.03.011

210006江蘇省南京市，南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院（南京市第一醫(yī)院）腫瘤科