苦參中黃酮類化合物的液質(zhì)聯(lián)用研究*

李 琳，海麗娜，秦文杰，姚梅芬，白水朋，厲博文，張思巨，李安平

(1.北京振東光明藥物研究院有限公司，北京100120;2.中國中醫(yī)科學院中藥研究所，北京100700)

中藥苦參系豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的根，具有清熱燥濕、殺蟲、利尿等功效。苦參中主要含有生物堿類和黃酮類成分，其中黃酮類成分就有80 多種。隨著研究方法和科研水平的不斷提高，人們發(fā)現(xiàn)黃酮類成分具有明確的藥理活性［1］。隨著液質(zhì)聯(lián)用技術和化學鑒定手段的廣泛應用，中藥有效成分快速、簡便的分析得以實現(xiàn)。本文采用HPLC/MS/MS(負離子模式)的方法，對苦參中主要的黃酮類化合物進行了指認和推斷，為苦參總黃酮物質(zhì)基礎研究提供依據(jù)，并對其相關研究提供參考。

1 藥品、試劑與儀器

苦參采自山西省長治市，經(jīng)山西振東道地藥材有限公司高級農(nóng)藝師關扎根鑒定為苦參Sophora flavescens Ait.的根。三葉豆紫檀苷、苦參酮、降苦參酮為自制，含量在90% ～98%。Agilent 1200 高效液相色譜儀、Agilent 6410 質(zhì)譜儀，均為Agilent 公司產(chǎn)品，含在線真空脫氣機、二極管陣列檢測器、四元梯度泵、柱溫箱、自動進樣器、電噴霧(ESI)離子源。色譜數(shù)據(jù)處理由Agilent 化學工作站完成。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

苦參經(jīng)粗粉后，用乙醇提取，經(jīng)聚酰胺柱層析，不同梯度洗脫液洗脫，得到數(shù)個部分，其中C 部分HCl-Mg 反應陽性，經(jīng)TLC 和HPLC 分析，確認為總黃酮部分，供實驗用。

2.2 色譜條件

Agilent Eclipse XDB C18色譜柱(2.1 mm×150 mm，5 μm)。流動相A 為乙腈，B 為1 g/L 冰醋酸;0—30 min，6% ～32%A;30—70 min，32% ～70%A。柱溫35 ℃。流速1 mL/min。載氣溫度300 ℃;載氣流速10 L/min;霧化器壓力15 psi;毛細管電壓3 500 v。

2.3 結(jié) 果

2.3.1 總離子流圖及液相圖見圖1、圖2。

2.3.2 結(jié)果分析

液相圖和總離子流圖中，各峰的分離度較好。對總離子流圖中的12 個峰進行指認和推斷(見圖3、圖4)，具體分析結(jié)果如下。

圖1 總離子流圖(負離子模式)

圖2 HPLC 圖

圖3 總離子流圖(負離子模式)

圖4 化合物結(jié)構(gòu)式

化合物1:M =446，m/z 491。與三葉豆紫檀苷(trifolirhizin)對照品液相色譜保留時間及質(zhì)譜行為一致。負離子模式中，491 為［M +甲酸］-，二級質(zhì)譜中283 為［M-葡萄糖基］-。正離子模式中，m/z 447 為［M+H］+。

化合物2:M =456，m/z 455。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參醇(kurarinol)，其結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 293，235，161，137。在二級質(zhì)譜中，C 環(huán)斷裂(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 293 的碎片。由于8 位的取代基容易失去H2O 而變成薰衣草基，因此二級質(zhì)譜中會有m/z 137 的碎片。

化合物3:M =370，m/z 369。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為(2S)-8 -異戊烯基-5 -甲氧基- 7，2＇，4＇ - 三羥基- 5 - 甲氧基二氫黃酮〔(2S)-8 - prenyl -5 - methoxy -7，2＇，4＇ - trihydroxy-5 - methoxy - flavanone〕，其結(jié)構(gòu)式如圖4所示。在二級質(zhì)譜中，m/z 207 為C 環(huán)斷裂得到的碎片，其裂解規(guī)律與化合物2 相似。

化合物4:M =442，m/z 441。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，分子量為442 的已知化合物只有苦參新醇Q(kushenol Q)，因此推斷其中有一個峰應該是苦參新醇Q，其結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。在二級質(zhì)譜中，m/z 279 為C 環(huán)斷裂得到的碎片(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，其裂解規(guī)律與化合物2 相似。

化合物5:M =454，m/z 453。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇I(kushenol I)、苦參醇N(kushenol N)或5 - 甲氧基苦參新醇C(5 -methylkushenol C)，其結(jié)構(gòu)如圖4 所示。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 275，177，149，139，137。在二級質(zhì)譜中，C 環(huán)斷裂(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 275，137(薰衣草基)兩個特征碎片。

化合物6:M =438，m/z 437。與苦參酮(kurarinone)對照品液相色譜保留時間及質(zhì)譜行為一致。在二級質(zhì)譜中，C 環(huán)斷裂(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 275 的碎片，其裂解規(guī)律與化合物2 相似。

化合物7:M =440，m/z 439。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇C(kushenol C)或者苦參新醇X(kushenol X)，其結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 261，217，193，177，137。在二級質(zhì)譜中，C 環(huán)斷裂(1-2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 261，193，137 的碎片峰。其裂解規(guī)律與化合物8 相似。因為有137 的碎片峰，所以排除苦參醇L。

化合物8:M = 424，m/z 423。與降苦參酮(norkurarinone)對照品液相色譜保留時間及質(zhì)譜行為一致。其裂解規(guī)律與文獻［2］報道一致。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 261，193，161，137，125。

化合物9:M =440，m/z 439。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇L(kushenol L)，結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 261，193，177，149，124。二級質(zhì)譜中，C 環(huán)斷裂，得到m/z 261，193 的碎片峰，未見m/z 137 的碎片峰，推斷不含有薰衣草基，因此排除苦參新醇C 和苦參新醇X。

化合物10:M=424，m/z 423。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇E(kushenol E)，結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 261，193，192，161，124。二級質(zhì)譜中，得到m/z 261、193 的特征峰，未見137 的碎片峰，可能不含有薰衣草基，由此推斷，化合物為苦參醇新E。其裂解規(guī)律與化合物9 相似。

化合物11:M =438，m/z 437。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參啶(kuraridin)，結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。二級質(zhì)譜碎片峰:m/z 275，191，161，139，137。二級質(zhì)譜中，得到m/z 275、137 的特征峰。

化合物12:M=408，m/z 407。根據(jù)苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇A(kushenol A)，結(jié)構(gòu)式如圖4 所示。二級質(zhì)譜中，得到m/z 261，193，137，125 的碎片峰，其裂解規(guī)律與化合物8 一致。

3 討 論

本研究結(jié)果顯示:苦參黃酮類成分大多含有薰衣草基側(cè)鏈，在電噴霧二級質(zhì)譜中容易得到m/z137 的碎片峰。大多數(shù)黃酮類化合物ESI 質(zhì)譜，容易在C 環(huán)斷裂(1—2 位、4—10 位斷裂)，得到A 環(huán)的特征峰。

因為對照品種類有限，本研究只初步推斷了二氫黃酮類成分和二氫異黃酮類成分的裂解規(guī)律，沒有得到苦參中黃酮醇類、查耳酮類、二氫黃酮醇類的單體化合物，所以此類型化合物的裂解規(guī)律及特征峰有待在以后的工作中驗證和完善。

對黃酮類化合物，筆者分別做了正、負離子兩種模式下的檢測，發(fā)現(xiàn)對于苦參中的黃酮類化合物在兩種離子模式下均能得到較好的結(jié)果［3-4］。筆者對正離子模式下得到的二級質(zhì)譜與負離子模式進行了比較，兩者具有良好的一致性。

如果筆者推斷的化合物是正確的，那么二氫黃酮和二氫黃酮醇的裂解規(guī)律與文獻［2］所述有較大差異，文獻中二氫黃酮和二氫黃酮醇在裂解上有明顯的區(qū)別，有待得到二氫黃酮醇類的單體化合物加以驗證。化合物11 為查耳酮類化合物，初步推斷了查耳酮類化合物的裂解規(guī)律。

［1］趙慧娟，孫文基. 苦參中黃酮類化合物的化學成分及藥理研究進展［J］.中藥材，2005，28(3):247 -250.

［2］白玉，郭明全，宋鳳瑞，等. 苦參中黃酮類化合物的電噴霧質(zhì)譜研究［J］. 高等學?；瘜W學報，2004，25(2):284 -288.

［3］張瑞菊. 苦參中黃酮類有效成分的提取、檢測及相關性質(zhì)的研究［D］.濟南:山東大學，2008:44 -57.

［4］朱麗君. 苦參有效部位化學研究［D］.北京:北京中醫(yī)藥大學，2007:67 -93.