宮頸癌組織P16、P15蛋白檢測的臨床價值研究

蔡麗梅，朱珍珍，虞如芬

宮頸癌組織P16、P15蛋白檢測的臨床價值研究

蔡麗梅，朱珍珍，虞如芬

目的研究P16、P15在宮頸癌組織中的表達(dá)與組織學(xué)分級和臨床分期的關(guān)系。方法選擇宮頸癌標(biāo)本82份為宮頸癌組，并選擇50份正常宮頸組織為正常組，用免疫組化法檢測兩組組織P15和P16的表達(dá)，分析宮頸癌組P15和P16表達(dá)與病理組織學(xué)分級、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和癌栓的關(guān)系。結(jié)果P15、P16在正常組和宮頸癌組中的陽性表達(dá)率分別為98.00%和50.00%、96.00%和51.22%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；腫瘤組織P15和P16蛋白的陽性表達(dá)率與組織學(xué)分級、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無癌栓有關(guān)，其中組織學(xué)分級Ⅲ級＜Ⅱ級＜Ⅰ級（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者＜無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05），有癌栓者＜無癌栓者（P＜0.05）。結(jié)論P16、P15在宮頸癌組織中表達(dá)的陽性率明顯低于正常組織，缺失越嚴(yán)重其組織學(xué)分級和臨床分期越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和癌栓的可能性增大；因此宮頸癌組織進(jìn)行P15、P16蛋白檢測對宮頸癌預(yù)后的判斷可能具有一定的臨床價值。

宮頸腫瘤；癌；蛋白

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個涉及多因素、多基因的復(fù)雜過程[1]。P16和P15缺失或突變導(dǎo)致P16和P15蛋白的表達(dá)降低，P16和P15抑癌功能喪失，造成細(xì)胞異常增殖[2]。目前，通過分子標(biāo)志物檢測對腫瘤進(jìn)行診斷是國際上熱門的課題，但關(guān)于P15、P16蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)與病理分級、臨床分期間關(guān)系的臨床研究報道較少，2003年12月至2013年12月收集浙江省瑞安市人民醫(yī)院存檔的宮頸癌石蠟包埋病理標(biāo)本82份（82例患者），用免疫組化法分析組織中P15、P16蛋白表達(dá)，并與50例子宮肌瘤手術(shù)切除的正常宮頸組織比較?，F(xiàn)總結(jié)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料82例患者術(shù)前未經(jīng)放療、化療治療；年齡33～72歲，平均（51.2±11.3）歲；病理組織學(xué)分級按WHO（2006年出版）的分級標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ級28例，Ⅲ級35例，Ⅲ級19例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例；脈管癌栓39例，無脈管癌栓43例。對照組50例，組織來源于本院同期子宮肌瘤手術(shù)切除的宮頸標(biāo)本；所選組織均經(jīng)過10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)HE切片，經(jīng)二位中級職稱以上病理學(xué)?？漆t(yī)生確診，連續(xù)4 m切片備用。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色用免疫組化SP法，P15、P16克隆抗體購自上海麥莎公司，SP試劑盒購于武漢博士德公司；免疫組織化學(xué)SP試劑盒購自福州邁新公司。入選組織標(biāo)本均用10.0%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋備用；抗原修復(fù)用微波和抗原修復(fù)液，DAB顯色，蘇木精復(fù)染；以TBS緩沖液替代一抗作為陰性對照，已知的陽性組織作為陽性對照，所用的P15、P16單克隆抗體稀釋度為1∶100。

1.2.2 免疫組化染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

P16、P15蛋白分布于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)，陽性結(jié)果呈黃色或棕黃色顆粒狀。切片在400倍油鏡下觀察，陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性（－）；＜25%為弱陽性（+）；25%～50%為明顯陽性（2+）；＞50%為強陽性（3+）[3]。1.3統(tǒng)計方法用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料采用X2檢驗分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P16與P15在宮頸癌組織和正常組織中的表達(dá)比較P15、P16在正常組和宮頸癌組中的陽性表達(dá)率分別為98.00%和50.00%、96.00%和51.22%，兩組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（X2=32.987、 28.711，均P＜0.05）。見表1。

2.2 P15蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)與組織學(xué)特征及臨床分期的關(guān)系組織學(xué)分級越高，P15蛋白的表達(dá)越低（P＜0.05），臨床分Ⅲ期者明顯低于Ⅰ期+Ⅱ期（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05），有癌栓者低于無癌栓者（P＜0.05）。見表2。

2.3 P16蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)與組織學(xué)特征及臨床分期的關(guān)系組織學(xué)分級越高，P16蛋白的表達(dá)越低（P＜0.05），臨床分Ⅲ期者明顯低于Ⅰ期+Ⅱ期（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05），有癌栓者低于無癌栓者（P＜0.05）。見表3。

3 討論

P15、Pl6基因又稱細(xì)胞周期依賴性激酶抑制基因(CDKN2B)，是兩個高度同源的同一個家族的多腫瘤抑制基因(MTS)，可與cyclin D競爭性結(jié)合CDK 4/ CDK6，使細(xì)胞停止生長。細(xì)胞周期的調(diào)控異常與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶(CDK)抑制因子細(xì)胞周期引擎抑制劑分子(CDI)已經(jīng)被確認(rèn)[4]。本研究顯示P15、P16在正常組和宮頸癌組中的陽性表達(dá)率分別為98.00%和50.00%、96.00%和51.22%，兩者差異有統(tǒng)計意義（均P＜0.05）。由此可見P15、P16蛋白在正常宮頸組織中的

陽性表達(dá)率明顯高于宮頸癌組織，參與宮頸癌組織細(xì)胞生長周期的調(diào)控。

當(dāng)P15基因發(fā)生突變或功能缺失，在腫瘤組織中表達(dá)異常時則有可能導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，促進(jìn)細(xì)胞無限增值和腫瘤發(fā)生、進(jìn)展[5]。P15基因的失活機制主要有缺失、重排、突變和過度甲基化[6]。P15基因在轉(zhuǎn)錄啟動子區(qū)域5'-CpG島多位點過度甲基化，是P15基因失活的另一形式[7]。P15基因的異常與免疫功能的失調(diào)之間可能有某種聯(lián)系[8]。目前已公認(rèn)Pl6缺失導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，但如果再有P15的缺失則更易導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[9]。Pl6基因作為一個重要的腫瘤抑制基因，參與腫瘤發(fā)生的周期調(diào)控，P16缺失可使細(xì)胞無限制由G1期進(jìn)入S期，并在細(xì)胞未成熟時即開始分裂，最終導(dǎo)致細(xì)胞永生化[10]。本組資料發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中的P15、Pl6蛋白隨著腫瘤組織學(xué)分級、臨床分期的升高其陽性表達(dá)率逐漸下降（P＜0.05）,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者P15、Pl6蛋白陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05），有癌栓者P15、Pl6蛋白陽性表達(dá)率低于無癌栓者（P＜0.05）。由此可見P15、Pl6蛋白參與宮頸癌組織細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，P15、Pl6蛋白表達(dá)缺失越嚴(yán)重，其組織學(xué)分級、臨床分期就越高，發(fā)生淋巴系統(tǒng)和血行轉(zhuǎn)移的可能性增大，并影響病情的進(jìn)展。因此筆者認(rèn)為對宮頸癌組織進(jìn)行P15、P16蛋白檢測對宮頸癌不同階段診斷、生物學(xué)行、預(yù)后的判斷可能具有一定的臨床價值。

表1 P16和P15在宮頸癌組織和正常組織中的表達(dá)比較例（%）

表2 P15蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)與組織學(xué)特征及臨床分期的關(guān)系例（%）

表3 P16蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)與組織學(xué)特征及臨床分期的關(guān)系例（%）

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.06.025

R737.33

A

1671-0800(2014)06-0689-02

325200 浙江省瑞安，瑞安市人民醫(yī)院（蔡麗梅、虞如芬）；瑞安市中醫(yī)院（朱珍珍）

蔡麗梅，Email：992327395@ qq.com。