高試劑空白測(cè)定值對(duì)稀釋法測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶結(jié)果的影響及對(duì)策

李術(shù)惠 王曉燕 曲本祥 蘭 彥 劉 怡 崔 勇

1.山東省威海市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東威海264200；2.山東省威海市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東威海264200；3.山東省威海市海大醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東威海264200

高試劑空白測(cè)定值對(duì)稀釋法測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶結(jié)果的影響及對(duì)策

李術(shù)惠1王曉燕1曲本祥2蘭 彥1劉 怡1崔 勇3

1.山東省威海市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東威海264200；2.山東省威海市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東威海264200；3.山東省威海市海大醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東威海264200

目的了解常用項(xiàng)目在不同生化檢測(cè)系統(tǒng)上的試劑空白測(cè)定值情況，探討用稀釋法檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）時(shí)，高空白測(cè)定值對(duì)其結(jié)果的影響及糾正辦法。方法在邁瑞B(yǎng)S-820、西門子Dimension Rxl Max全自動(dòng)生化系統(tǒng)上共觀察了ALT、三酰甘油（TG）、堿性磷酸酶（ALP）、轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、乳酸脫氫酶（LDH）、磷（Phos）、鈣（Ca）7種生化項(xiàng)目的空白測(cè)定值。在Dimension Rxl Max生化系統(tǒng)上，對(duì)3份血清標(biāo)本分別按1∶2、1∶4及1∶8稀釋后再測(cè)ALT，所得結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，并進(jìn)行了糾正。結(jié)果在邁瑞B(yǎng)S-820生化系統(tǒng)上，ALT、TG、ALP、GGT、LDH、Phos、Ca 7種項(xiàng)目的空白測(cè)定值分別是：1.0 U/L、0.0mmol/L、3.0 U/L、1.0 U/L、-1.0 U/L、0.0mmol/L、0.0mmol/L；在西門子Dimension RxlMax系統(tǒng)上，依次為18.0 U/L、0.0mmol/L、10.0 U/L、2.0 U/L、0.0 U/L、0.0 mmol/L、0.0mmol/L。在Dimension RxlMax系統(tǒng)上，3份血清標(biāo)本經(jīng)系列稀釋測(cè)得的ALT結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)后，分別是64、104、176 U/L；108、144、224 U/L；246、292、360 U/L。經(jīng)糾正后，則為46、50、50 U/L；90、90、98 U/L；228、238、234 U/L。結(jié)論在不同的系統(tǒng)上，這些生化項(xiàng)目的空白測(cè)定值會(huì)存在差異，應(yīng)加以重視。在Dimension Rxl Max生化系統(tǒng)上，由于高空白測(cè)定值的存在，血清標(biāo)本經(jīng)稀釋后再測(cè)ALT時(shí)，結(jié)果僅乘以稀釋倍數(shù)是不準(zhǔn)確的。經(jīng)合理校準(zhǔn)后的結(jié)果才是可靠的。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；空白測(cè)定值；稀釋；影響；糾正

空白測(cè)定值，是指用蒸餾水代替血清，測(cè)得的某一試劑的活力單位或者濃度值[1]。筆者在工作中發(fā)現(xiàn)，有的檢驗(yàn)項(xiàng)目如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），在不同的生化檢測(cè)系統(tǒng)上，其空白測(cè)定值會(huì)存在較大差異。另?yè)?jù)文獻(xiàn)[2-4]報(bào)道，高脂濁血清標(biāo)本尤其是高濃度三酰甘油（TG）存在時(shí)，會(huì)對(duì)ALT等檢驗(yàn)項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果造成嚴(yán)重干擾，致使ALT結(jié)果嚴(yán)重失真；而采用稀釋法降低TG濃度至合理水平后再重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)是獲得ALT準(zhǔn)確結(jié)果的簡(jiǎn)便、易行的有效方法[5-6]。本文主要探討了高空白測(cè)定值存在時(shí)，對(duì)稀釋法測(cè)ALT造成的影響及解決辦法?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

西門子醫(yī)學(xué)診斷公司的Dimension Rxl Max全自動(dòng)生化分析儀（原德靈公司產(chǎn)品）及與其配套的試劑和定標(biāo)液；深圳邁瑞公司的BS-820全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑；日立7080全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑。

1.2 稀釋液

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的稀釋液是我室用杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司的RO-MB-40A超純水器自制的純凈水；另一種是山東威高藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的注射用生理鹽水（批號(hào)：313062403，有效期至2015年5月）。

1.3 方法

在上述3種檢測(cè)系統(tǒng)上，分別測(cè)定了部分項(xiàng)目的空白測(cè)定值。觀察含有高TG的血清等標(biāo)本經(jīng)1∶2、1∶4及1∶8系列稀釋后，高空白測(cè)定值的存在對(duì)ALT結(jié)果的影響，并探討其解決對(duì)策。

2 結(jié)果

2.1 不同生化項(xiàng)目在2套檢測(cè)系統(tǒng)上的試劑空白測(cè)定值觀察

分別對(duì)ALT、TG、堿性磷酸酶、轉(zhuǎn)肽酶、乳酸脫氫酶、鈣、磷共7種常用生化項(xiàng)目在Dimension Rxl Max及邁瑞B(yǎng)S-820系統(tǒng)上，用自制純凈水進(jìn)行了試劑空白測(cè)定值檢測(cè)，3次測(cè)量取均值。結(jié)果見表1。

表1 7種常用生化項(xiàng)目在不同檢測(cè)系統(tǒng)上的試劑空白測(cè)定值

2.2 使用不同稀釋液時(shí)ALT試劑的空白測(cè)定值觀察

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，又以威高藥業(yè)生產(chǎn)的注射用生理鹽水在西門子系統(tǒng)上觀察了ALT的空白測(cè)定值，3次測(cè)量取均值為19 U/L。結(jié)果與“2.1”項(xiàng)下的純凈水類似。

2.3 其他3家實(shí)驗(yàn)室所用生化分析系統(tǒng)上ALT試劑的空白測(cè)定值情況

其他3家實(shí)驗(yàn)室所用生化分析系統(tǒng)上ALT試劑的空白測(cè)定值情況見表2（選用了純凈水）。

表2 其他3家不同單位的分析系統(tǒng)上ALT試劑的空白測(cè)定值（U/L）

2.4 標(biāo)本經(jīng)系列稀釋后再測(cè)定的ALT及TG結(jié)果觀察

隨機(jī)選取了無(wú)溶血、無(wú)黃疸的1例高脂濁標(biāo)本、1例高ALT標(biāo)本及1例基本正常的血清標(biāo)本，在西門子系統(tǒng)上先測(cè)得其ALT及TG結(jié)果；再用純凈水分別稀釋為1/2、1/4、1/8后重測(cè)，并對(duì)稀釋后的結(jié)果用公式y(tǒng)=[x-（n/N）×x0]×N=Nx-nx0進(jìn)行了糾正。其中，x0指每單位體積試劑的空白測(cè)定值；x指血清被稀釋后每單位體積混合液中的實(shí)際測(cè)定結(jié)果；y指校準(zhǔn)后最終應(yīng)報(bào)告的結(jié)果；N指血清被稀釋后在每單位體積混合液中各組分總的份額；即被測(cè)血清為1份時(shí)，稀釋液為n份；N=n+1。3例血清標(biāo)本在系列稀釋前后的ALT、TG測(cè)定值及糾正結(jié)果見表3。

2.5 正常血清標(biāo)本在2種生化系統(tǒng)上的ALT檢測(cè)結(jié)果比較

隨機(jī)選取了10例健康查體者的無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)脂濁的血清標(biāo)本，同時(shí)在邁瑞及西門子檢測(cè)系統(tǒng)上測(cè)定了其ALT活力單位；其結(jié)果分別為（21.7±8.9）、（39.5±9.6）U/L，均值相差17.8 U/L。

3 討論

由表1、2可見，同一生化項(xiàng)目在不同的生化檢測(cè)系統(tǒng)上，其試劑的空白測(cè)定值會(huì)存在較大差異。被觀察的7種項(xiàng)目，在邁瑞B(yǎng)s-820系統(tǒng)上其空白測(cè)定值均較低，多接近零水平；在日立7080系統(tǒng)上，ALT的空白測(cè)定值同樣較低，僅為1.0 U/L；在西門子Dimension RxlMax系統(tǒng)上，ALP的空白測(cè)定值較高為10.0U/L，而ALT的空白測(cè)定值可高達(dá)18.0~20.0 U/L。生理鹽水也是臨床實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)常選用的稀釋液[6]；在西門子系統(tǒng)上，生理鹽水與去離子水所測(cè)得的ALT空白測(cè)定值結(jié)果相當(dāng)。

表3 3例血清標(biāo)本在系列稀釋前后的ALT、TG測(cè)定值及糾正結(jié)果（U/L）

ALT試劑高空白測(cè)定值的存在，產(chǎn)生了多種影響；值得加以重視。據(jù)文獻(xiàn)[7]報(bào)道，北京市47家醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室，其ALT參考區(qū)間低值介于0~10 U/L之間，高值介于40~46 U/L之間；世界上4個(gè)地區(qū)（意大利米蘭，中國(guó)北京，土耳其布爾薩和北歐國(guó)家）多中心研究表明[8]，不同地區(qū)間ALT的參考區(qū)間差異不大，成年男性為9~59 U/L，女性8~41 U/L。而西門子ALT試劑說(shuō)明書中提供的參考值范圍為30~65 U/L，顯然高于文獻(xiàn)[7-8]報(bào)道的參考值；尤其是參考值下限差別更明顯。10例健康查體者在西門子及邁瑞系統(tǒng)上同時(shí)測(cè)定ALT的結(jié)果顯示，西門子系統(tǒng)的ALT結(jié)果要比邁瑞系統(tǒng)的平均高17.8 U/L。參考區(qū)間的不同、同一批查體者在不同系統(tǒng)上測(cè)得的ALT結(jié)果的差異，均應(yīng)與西門子系統(tǒng)上ALT試劑的高空白測(cè)定值存在有關(guān)。

另外，由表3可見，由于高空白測(cè)定值的存在，血清樣本被稀釋后再測(cè)ALT時(shí)，結(jié)果不能簡(jiǎn)單的乘以稀釋倍數(shù)，否則隨著稀釋比例的增大誤差越來(lái)越大，會(huì)誤導(dǎo)臨床；必須采用公式y(tǒng)=[x-（n/N）×x0]×N=Nx-nx0加以糾正，除去高空白測(cè)定值的影響后，才能獲得可靠的結(jié)果。而對(duì)于無(wú)空白測(cè)定值存在的TG而言，樣本被稀釋后所測(cè)得的結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)或用糾正公式計(jì)算，結(jié)果是一樣的。比如樣本1，被稀釋為1/2、1/4、1/8后所測(cè)的結(jié)果，經(jīng)公式糾正后分別為46、50、50 U/L，加上未稀釋時(shí)所測(cè)結(jié)果45 U/L，它們最大值與最小值相比僅相差（50-45）/45=11.1%，完全符合ALT的可接受范圍是“靶值±16.0%”質(zhì)量控制要求[9]；但若簡(jiǎn)單的乘以稀釋倍數(shù)，結(jié)果依次為64、104、176 U/L，最大值與原始值相差巨大：（176-45）/45=291.1%。樣本3與此類似。樣本2較為特殊，高TG的存在嚴(yán)重干擾了用未稀釋血清所測(cè)得的ALT結(jié)果，僅為5 U/L；樣本被依次稀釋后經(jīng)計(jì)算糾正，結(jié)果分別為90、90、98 U/L，三個(gè)結(jié)果最大相差8.9%，符合質(zhì)量控制要求[9]；可見，在西門子系統(tǒng)上高TG存在時(shí)稀釋后再測(cè)ALT也是非常必要的。還有一種情況，當(dāng)標(biāo)本中ALT太高時(shí)，由于底物迅速耗盡也會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確[10]；應(yīng)當(dāng)稀釋后再重測(cè)，結(jié)果也同樣需要加以糾正。

ALT的測(cè)定，是判斷肝細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)之一；監(jiān)測(cè)ALT可以觀察肝病患者病情的發(fā)展變化，并作出預(yù)后判斷[11-12]。因此，實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)當(dāng)充分了解自己所用儀器及試劑的性能、特點(diǎn)，能夠排除各種干擾、準(zhǔn)確報(bào)告出患者真實(shí)的ALT水平，對(duì)于指導(dǎo)臨床更好地診治疾病具有重要意義。

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Effect of high measured value of alanine am inotransferase reagent blank when serum specimenswere detected after being diluted

LIShuhui1WANG Xiaoyan1QU Benxiang2LAN Yan1LIU Yi1CUIYong3
1.Departmentof Laboratory Medicine,Weihai Infectious Disease Hospital,Shandong Province,Weihai 264200,China; 2.Department of Laboratory Medicine,Weihai Traditional Chinese Medicine Hospital,Shandong Province,Weihai 264200,China;3.Department of Laboratory Medicine,Weihai Haida Hospital,Shandong Province,Weihai 264200, China

Ob jective To investigate the measured values of some test items'reagent blanks in different biochemical detection systems;and to explore the effect of high measured value of alanine aminotransferase(ALT)reagent blank on the detected results of ALT when serum samples were detected after being diluted,as well as the corrective methods. Methods The blank measurement values of seven different test items were observed in both Mindray BS-820 and Siemens Dimension Rxl Max automatic biochemical systems,including ALT,triacylglycerol(TG),alkaline phosphatase (ALP),γ-glutamyl transferase(GGT),lactate dehydrogenase(LDH),phosphorus(Phos)and calcium(Ca).In Dimension Rxl Max system,the ALT activities in three serum sampleswere detected after being diluted by 1∶2,1∶4,1∶8.The results weremultiplied by the dilution factors,and corrected.Results The blank measurement values of ALT,TG,ALP, GGT,LDH,Phos and Ca were 1.0 U/L,0.0 mmol/L,3.0 U/L,1.0 U/L,-1.0 U/L,0.0 mmol/L,0.0 mmol/L in Mindray BS-820 system;and they were 18.0 U/L,0.0mmol/L,10.0 U/L,2.0 U/L,0.0 U/L,0.0mmol/L,0.0 mmol/L in Dimension Rxl Max system.In Dimension Rxl Max system,the ALT results in three samples after beingmultiplied by the dilution factorswere 64,104,176 U/L;108,144,224 U/L;246,292,360 U/L.However,they were 46,50,50 U/L;90,90,98 U/L; 228,238,234 U/L after being corrected.Conclusion Themeasured values of these reagent blanks are various in different biochemical detection systems,and we should paymore attention to it.Themeasurement results of ALTmust be corrected when serum specimens are detected in Siemens Dimension Rxl Max system after being diluted,because of the existence of highmeasured value of ALT reagent blank.

Alanine aminotransferase;Measured value of reagent blank;Dilution;Effect;Correction

R446.11

C

1673-7210（2014）02（c）-0149-03

2013-10-20本文編輯：衛(wèi)軻）