參麥注射液細菌內(nèi)毒素檢查方法的探討

褚奇星

參麥注射液細菌內(nèi)毒素檢查方法的探討

褚奇星①

目的：考察參麥注射液細菌內(nèi)毒素檢查方法的可行性，加強對參麥注射液的質(zhì)量監(jiān)控。方法：采用細菌內(nèi)毒素檢查法，考察參麥注射液對鱟試劑的干擾試驗，并檢測供試品細菌內(nèi)毒素的限度。結(jié)果：對樣品進行1∶4稀釋，用0.125 EU/mL鱟試劑無干擾，與家兔熱源檢查法結(jié)果一致。結(jié)論：與家兔法檢查本品熱原相比，細菌內(nèi)毒素法可行性高，此方法避免了家兔熱源檢查法操作的復雜性，且靈敏度高、方便快捷。

鱟試劑； 參麥注射液； 細菌內(nèi)毒素檢查法

參麥注射液為紅參和麥冬提取有效成分制成的純中藥注射液制劑，其中主要成分人參皂苷，是紅參生理活性的物質(zhì)，還含有機酸、甾醇、酯類和維生素類等[1]。從保健功能上講，紅參具有大補元氣、益血、抗氧化、抗衰老、增強免疫力的作用。在藥用功能方面，可以祛濕、治療氣虛、體寒癥，如多汗、胃下垂、胸悶、心絞痛、冠心病、心血管等疾??；再如陽氣不足、冬季畏寒、老人早衰、婦女內(nèi)分泌紊亂等。麥冬的化學成分為甾體皂苷、異黃酮類、多糖、氨基酸等，具有抗心肌缺血、抗血栓形成、耐缺氧、抗衰老、降血糖等功效[2-4]。

參麥注射液具有益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈的作用。臨床上用于治療氣陰兩虛型休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒細胞減少癥。能提高腫瘤患者的免疫機能，與化療藥物合用時，有一定的增效作用，并能減少化療藥物所引起的毒副作用[5-6]。參麥注射液標準熱源檢查法為家兔法，但操作繁瑣，靈敏度低，對細菌內(nèi)毒素的含量不能準確檢測。本文參照《中國藥典》2005版附錄動態(tài)比濁發(fā)建立參麥注射液細菌內(nèi)毒素檢查法的實驗設(shè)計，以此法取代家兔法，用以檢測參麥注射液細菌內(nèi)毒素的限度，同時對其可行性分析并進行相關(guān)研究[7-10]。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器 動態(tài)濁度鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司，標示靈敏度0.125 EU/mL，批號130119，1.25 mL/支），細菌內(nèi)毒素檢查用水（中國藥品生物制品檢定所，批號130209，5 mL/支）；細菌內(nèi)毒素工作標準品（湛江安度斯生物有限公司，批號121227，100 EU/支）；參麥注射液（雅安三九藥業(yè)有限公司，批號121209，121217，130122；規(guī)格10 mL/支）BET-72細菌內(nèi)毒素測定儀（上海昨非實驗室設(shè)備有限公司），QL-901渦旋混合器（北京恒奧生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細菌內(nèi)毒素限值（L）的確定 按照細菌內(nèi)毒素限值（L）公式L=K/M[1]，K為依照規(guī)定給藥途徑，每人每公斤每小時最大可接受的細菌內(nèi)毒素劑量，即致熱閾。2010版中國藥典規(guī)定我國內(nèi)毒素標準品對人或家兔的致熱閾為5.0 EU/（kg·h），M為人每千克體重每小時給藥最大劑量（藥品致熱原檢查劑量），參麥注射液熱原檢查劑量為10 mL/kg。細菌內(nèi)毒素理論值（L）計算出為：L=0.5 EU/mL，本研究即采用0.5 EU/mL為細菌內(nèi)毒素熱源反應(yīng)閾值。

1.2.2 鱟試劑靈敏度復核 按照2010年版中國藥典附錄細菌內(nèi)毒素檢查法的要求，進行鱟試劑靈敏度的復核[3]。以細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解稀釋細菌內(nèi)毒素標準品工作溶液，混合渦旋混合15 min，后以1∶2分別稀釋制備成以標示靈敏度為中間值的稀釋液4份，每一步稀釋后均混合渦旋30 min。每一濃度平行4支。

1.2.3 樣品最大有效稀釋倍數(shù)（MVD） 最大有效稀釋倍數(shù)即在實驗中供試品溶液被允許稀釋的最大倍數(shù)，在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度下進行內(nèi)毒素限值的檢測。依照公式MVD=cL/λ求算[2]，其中L即參麥注射液供試品細菌內(nèi)毒素限值，λ為鱟試劑標示靈敏度，即最低內(nèi)毒素濃度，本動態(tài)比濁鱟試劑標示靈敏度為0.125 EU/mL，參麥注射液的最大有效稀釋倍數(shù)根據(jù)L值即可求出為MVD=0.5/0.125=4。

1.2.4 干擾試驗 按2010年版中國藥典附錄進行干擾試驗[3]。將參麥注射液（批號121209）制備成原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16五個系列濃度，每個濃度分別取0.1 mL樣品進行干擾試驗檢查。分別制備兩只陰性對照管（細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品溶液），以1：T（T為稀釋倍數(shù)）稀釋倍數(shù)樣品分別對兩批鱟試劑作干擾試驗。

2 結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復核結(jié)果 實驗結(jié)果為兩批鱟試劑反應(yīng)相同，靈敏度均為0.125 EU/mL。結(jié)果如表1，符合規(guī)定。

表1 鱟試劑靈敏度復核結(jié)果

2.2 參麥注射液干擾試驗結(jié)果 結(jié)果見表2。

表2 參麥注射液干擾試驗結(jié)果

2.3 樣品的動態(tài)比濁法鱉實驗細菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果 本供試品以細菌內(nèi)毒素檢查用水1∶4稀釋，分別對其采用兩批鱟試劑檢測分析，結(jié)果如表3所示，所得結(jié)果一致。

表3 兩批樣品的細菌內(nèi)毒素鱟試劑檢測結(jié)果

2.4 家兔法熱原檢查 按2010年版中國藥典操作[3]，所測3批樣品的細菌內(nèi)毒素鱟試劑檢測結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

對于中藥注射劑參麥注射液而言，考慮到其作為中草藥的成分復雜性，以及來源、工藝等相關(guān)原因，干擾因子的變化性不可避免，因此細菌內(nèi)毒素限值必須嚴格控制。課題研究中，將本供試品采用多倍稀釋的方法進而提高實驗的穩(wěn)定性與可靠性。以細菌內(nèi)毒素檢查用水1∶4稀釋本供試品，結(jié)果表明，對標示靈敏度為0.125 EU/mL的不同廠家鱟試劑均無明顯干擾作用，參麥注射液熱源的控制可用細菌內(nèi)毒素檢測法來進行。以1∶4稀釋本品后，再以標示靈敏度為0.125 EU/mL的鱟試劑用以檢測參麥注射液的細菌內(nèi)毒素，所得結(jié)果與家兔法熱原檢查一致。

因此，以動態(tài)濁度法進行細菌內(nèi)毒素測定可取代家兔法檢查參麥注射液熱原，且方法靈敏度高、準確、快捷，在醫(yī)院臨床快速檢查熱原時，有參考應(yīng)用價值。

[1]王芳芳，趙亮，高燕軍，等.參麥注射液藥理作用與臨床[J].承德醫(yī)學院學報，2007，24（2）：189-191.

[2]周漢良，陳季強.呼吸藥理學與治療學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：67-36，524-537.

[3]張莉，王保和，胡晶，等.參麥注射液治療小兒病毒性心肌炎的系統(tǒng)評價[J].中國循證醫(yī)學雜志，2010，15（6）：70-76.

[4]葉篤筠，吳萍，牛汝楫，等.參麥注射液改善疲勞膈肌舒縮功能的實驗研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，20（9）：679-681.

[5]衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準中成方制劑[S].第18分冊：169-171.

[6]高寧，羅志琴，謝廣茹，等.參麥注射液上市后安全性再評價研究[J].醫(yī)藥導報，2011，16（7）：131-132.

[7]細菌內(nèi)毒素檢查法.中國藥典2010年版二部：附錄.

[8]王紅鑫，張志明，鄭有維，等.比色法測定腦復康片的含量[J].藥物分析雜志，1996，15（2）：127-128.

[9]陳華龍，王莉蓓，姜麗君.參麥注射液細菌內(nèi)毒素檢測方法的研究[J].海峽藥學，2010，22（10）：58-59.

[10]黃清泉，夏振民.藥品細菌內(nèi)毒素檢查的實驗設(shè)計[J].中國藥學雜志，1997，6（2）：10-12.

Study on the Bacterial Endotoxins Test of Shenmai Injection

/Chu Qi-xing.//Medical Innovation of China，2014，11（08）：120-121

Objective：To investigate the feasibility of bacterial endotoxin test and enhance the quality control for Shenmai Injection.Method：The bacterial endotoxin inspection method was used for the interference test of Shenmai injection to limulus reagent and the LOQ of bacterial endotoxin was tested.Result：The 1：4 diluted sample was test with 0.125 EU/mL tachypleus amebocyte lysate. No interference was found and the result consistent with the rabbit test results.Conclusion：The bacterial endotoxin test is much more feasible， sensitive and fast than rabbit test method for the pyrogen test of Shenmai Injection.

Limulus lysate reagent； Shenmai Injection； Bacterial endotoxin test

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.08.052

2014-01-03） （本文編輯：蔡元元）

①河南省平頂山市第一人民醫(yī)院 河南 平頂山 467000

褚奇星

First-author’s address：The First Peoples’Hospital of Pingdingshan City，Pingdingshan 467000 China