黃巖紫山藥炭疽病病原菌培養(yǎng)條件

趙永彬，王嬌陽，陳偉強，唐興國

（浙江省臺州市農(nóng)業(yè)科學研究院，浙江臨海 317000）

黃巖紫山藥炭疽病病原菌培養(yǎng)條件

趙永彬，王嬌陽，陳偉強，唐興國

（浙江省臺州市農(nóng)業(yè)科學研究院，浙江臨海 317000）

對自主分離的黃巖紫山藥炭疽病病原菌開展培養(yǎng)條件研究。結(jié)果表明，PYA培養(yǎng)基在28℃、pH值4條件下病原菌菌落生長最好，直徑為8.46cm，而PJJ培養(yǎng)基（PDA+山藥煎汁+酵母膏培養(yǎng)基）在28℃、pH值5.6條件下，產(chǎn)孢量達到最高水平，為34.5×106個·mL-1。通過綜合考慮，以PJJ培養(yǎng)基為首選培養(yǎng)基。

紫山藥；炭疽病；病原菌；培養(yǎng)條件

炭疽病是山藥主要病害［1］。黃巖紫山藥又稱紫蒔藥，為山藥地方品種，其肉質(zhì)深紫色，市場歡迎度高［2］。近年隨著生產(chǎn)面積不斷擴大，炭疽病已成為主產(chǎn)區(qū)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。以從黃巖紫山藥中分離的炭疽病菌為研究對象，通過對其培養(yǎng)條件進行研究，為進一步開展紫山藥炭疽病防控奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株從當?shù)攸S巖紫山藥中分離出來，經(jīng)柯赫法則驗證，為炭疽病病原菌。

1.2 處理設計

將病原菌在PDA培養(yǎng)基上28℃暗培養(yǎng)6d后，用直徑5mm的打孔器在菌落邊緣打取菌餅接種。

培養(yǎng)基篩選試驗。培養(yǎng)基共設10種，分別為PJ（PDA+山藥煎汁）、查氏、GM、PYA、MM、燕麥、PJJ（PDA+山藥煎汁+酵母膏0.5g）、PCA、SJ（山藥煎汁加每升20g瓊脂）及PDA培養(yǎng)基，以清水瓊脂培養(yǎng)基為對照（CK）。

山藥煎汁。將新鮮山藥莖葉200g用蒸餾水煮沸30min后，定容至1000mL。其他涉及山藥煎汁的培養(yǎng)基，均用該溶液配制。

培養(yǎng)溫度篩選試驗，設4個溫度處理，分別為20℃，25℃，28℃，32℃。培養(yǎng)基采用前期試驗所篩選出的對菌落和孢子生長較好的培養(yǎng)基。

pH值試驗。設5個pH值梯度，分別為3，4， 7和9，以及原培養(yǎng)基pH值（即不作調(diào)整，pH值5.6）。

培養(yǎng)基種類同溫度試驗。培養(yǎng)條件為28℃暗培養(yǎng)。

接種后將培養(yǎng)皿密封倒置，于恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，逐日觀察菌落生長情況。6d后測量菌落生長情況，用十字交叉法測量菌落直徑；10d時用血球計數(shù)板對孢子進行計數(shù)，方法參照王洪波等［3-6］，并稍作改動。每處理重復3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對病原菌菌落生長和產(chǎn)孢的影響

檢測發(fā)現(xiàn)（表1），病原菌在PJJ培養(yǎng)基上生長最好，菌落直徑達8.4cm；其次是PYA培養(yǎng)基，而在燕麥培養(yǎng)基上生長最差（CK除外），且菌落最薄。而PJJ培養(yǎng)基在產(chǎn)孢方面也表現(xiàn)最好，為34.50×106個·mL-1。因此可考慮將PJJ做為該病原菌的生長和產(chǎn)孢培養(yǎng)基。結(jié)合各培養(yǎng)基成分與病原菌生長情況推斷，山藥莖葉中含某些有利于該病菌繁殖的成分，也是山藥易感染炭疽病的原因之一。

2.2 不同溫度對病原菌菌落生長和產(chǎn)孢的影響

從上述試驗中篩選出3種培養(yǎng)基，分別為PYA，PJJ，PDA培養(yǎng)基，以此進行溫度試驗。

表2顯示，病原菌接種到3種培養(yǎng)基上后，在4種溫度條件下，28℃表現(xiàn)最好，是該病原菌的最適生長溫度。

表1 不同培養(yǎng)基對菌絲生長和孢子形成的影響

表2 不同溫度對菌絲生長和孢子形成的影響

2.3 不同pH值對病原菌菌落生長和產(chǎn)孢的影響

表3表明，該菌在不同培養(yǎng)基上，隨pH值變化，有不同的表現(xiàn)。

表3 不同pH值對菌絲生長和孢子形成的影響

當pH值為3時，在PDA培養(yǎng)基上不能生長，在PYA和PJJ培養(yǎng)基上雖能生長，但不能產(chǎn)孢。當pH值為4時，菌落直徑以PYA表現(xiàn)最好，達8.46cm；但從產(chǎn)孢角度看，PJJ培養(yǎng)基在不對pH進行調(diào)整情況下，產(chǎn)孢量最好，達34.5×106· mL-1。綜合考慮，不進行pH值調(diào)整，即各培養(yǎng)基pH值5.3～5.6，均有利于菌落的生長及產(chǎn)孢。

3 小結(jié)和討論

通過對本地的幾個紫山藥種質(zhì)資源調(diào)查發(fā)現(xiàn)，本地紫山藥中沒有抗病品種，均表現(xiàn)為感病，但抗病性與果肉顏色存在一定的關(guān)系，即隨著果肉顏色變深，抗病性越弱［4］。對從不同品種上分離的病原菌研究發(fā)現(xiàn)均屬于同一生理小種。

綜合試驗結(jié)果認為，菌落的生長及產(chǎn)孢量均以PJJ培養(yǎng)基表現(xiàn)最好，其最適溫度為28℃，pH值5.5左右。

另有研究表明，孢子萌發(fā)適溫為20～30℃［5］。而該病主要發(fā)于8月份左右，此時溫度正處于菌絲及孢子生長萌發(fā)適宜范圍。

由此可見，該病的實驗室生物學特性與其田間發(fā)生期的環(huán)境相一致。另外，部分作物炭疽病菌可產(chǎn)生有致病能力的外毒素可引起類似病原菌侵染形成的癥狀［6］。因此，進一步開展紫山藥炭疽病病原菌侵染機理研究，對選育抗病新品種具有重要意義。

［1］ 黃云，王洪波，李慶，等.山藥炭疽病研究［J］.西南農(nóng)業(yè)大學學報，2004（2）：44-46.

［2］ 甘建平，李麗，羅君琴，等.保健功能蔬菜紫蒔藥利用價值分析及高產(chǎn)栽培技術(shù)［J］.現(xiàn)代園藝，2009（5）：17-18.

［3］ 王洪波.山藥炭疽病病原鑒定、生物學特性、病害循環(huán)及藥劑篩選研究［D］.雅安：四川農(nóng)業(yè)大學，2003.

［4］ 趙永彬，盧秀友，江景勇.5個紫山藥地方品種比較試驗［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學，2013（11）：1544-1545.

［5］ 王洪波，黃云，李慶，等.山藥炭疽病研究：病原菌生物學特性［J］.西南農(nóng)業(yè)大學學報，2004（6）：52-56.

［6］ 李延浩.開封地區(qū)桂花炭疽病菌的生物學特性及病菌毒素性質(zhì)的研究［D］.開封：河南大學，2010.

（責任編輯：張瑞麟）

S436.3文獻標志碼：B文章編號：0528-9017（2014）07-1065-02

文獻著錄格式：趙永彬，王嬌陽，陳偉強，等.黃巖紫山藥炭疽病病原菌培養(yǎng)條件［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學，2014（7）：1065-1066.

2014-03-04

趙永彬（1978-），男，農(nóng)藝師，從事蔬菜栽培及新品種選育工作。E-mail：zyb1305@126.com。