益母草不同提取物調(diào)經(jīng)作用研究

李丹，謝曉芳，彭成，熊亮，趙小梅

·藥理毒理·

益母草不同提取物調(diào)經(jīng)作用研究

李丹，謝曉芳，彭成，熊亮，趙小梅

目的：探討益母草不同提取物對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮功能的影響，尋找調(diào)經(jīng)活性部位。方法：從益母草中提取分離3個(gè)不同提取物，分別為益母草水部位（W1）、乙酸乙酯部位（Et）和正丁醇部位（Bu）；采用未孕大鼠離體子宮模型觀察3種提取物對(duì)子宮收縮的活動(dòng)力、張力和頻率的影響，用BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)記錄子宮收縮曲線。結(jié)果：W1、Bu均使子宮活動(dòng)力、收縮張力均值和最小值明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），且呈一定量效關(guān)系；3種提取物均可抑制縮宮素對(duì)子宮的收縮作用，使子宮活動(dòng)力、收縮張力的均值和最大值顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：提取物對(duì)未孕大鼠正常子宮具有興奮作用，而對(duì)縮宮素所致痙攣?zhàn)訉m具有舒張作用；提示益母草對(duì)子宮活動(dòng)具有雙向調(diào)節(jié)作用，活性物質(zhì)主要是益母草水部位和正丁醇部位。

益母草；離體子宮；活性部位；雙向調(diào)節(jié)

益母草為唇形科一年生或二年生草本植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的地上部分，具有活血調(diào)經(jīng)、利水消腫的功效，臨床主要用于治療月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后腹痛、小便不利、水腫等[1]。目前臨床使用的益母草制劑品種較多，大多采用水煎醇提為基礎(chǔ)的制備工藝[2]。本實(shí)驗(yàn)從益母草藥材中提取乙酸乙酯部位（Et）、正丁醇部位（Bu）、水部位（W1），采用離體子宮模型觀察3種不同提取物對(duì)子宮活動(dòng)的影響，明確益母草的調(diào)經(jīng)作用及活性物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 提取物制備

取益母草藥材2 kg，加入10倍量95%乙醇回流提取3次，合并過(guò)濾，濾液濃縮得到浸膏500 g，將浸膏用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位提取物（Et，每g相當(dāng)于40 g生藥），再將萃取后浸膏加入正丁醇萃取得到正丁醇部位提取物（Bu，每g相當(dāng)于100 g生藥），剩余的為水部位提取物（W1，每g相當(dāng)于25 g生藥）。試驗(yàn)前將3種提取物用蒸餾水配成6 g生藥/ mL，備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，普通級(jí)，全雌，體重180～220 g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（川）2008-11，檢疫后用。

1.3 主要試劑及儀器

縮宮素注射液（河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，批號(hào)1204021），苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)1005051）；NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖試劑，均由成都市科龍化工試劑公司生產(chǎn)，采用去離子水配置洛氏液（配置方法：1000 mL含NaCl 9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g)；BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)，JH-2型張力換能器，HW-400E型恒溫水浴平滑肌槽，均由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 離體子宮的制備[3]

取健康、成年雌性未孕大鼠，實(shí)驗(yàn)前2 d每日肌肉注射苯甲酸雌二醇1 mg﹒kg-1造成動(dòng)情期。于第3 d頸椎脫臼處死動(dòng)物，迅速剪開腹腔剖取子宮置于盛有洛氏液的玻璃皿中，輕輕剝離子宮上附有的結(jié)締組織和脂肪組織。取子宮中間段2～3 cm，一端固定于盛有洛氏液20 mL的浴槽，另一端連接張力換能器，浴槽中營(yíng)養(yǎng)液保持（37±0.5）℃，并通以（95% O2+5% CO2）的混合氣體，速度1～2個(gè)小氣泡/s，前負(fù)荷1 g。用BL-420E生物機(jī)能系統(tǒng)記錄子宮收縮曲線。

2.2 給藥方法

待曲線穩(wěn)定30 min，采用累積加藥方式給藥，加入提取物W1、Et、Bu藥液，采用累加給藥方式（劑量均為5、5、10 μL，相當(dāng)于生藥量0.0015、0.003、0.006 g﹒mL-1），每次加藥后記錄10 min離體子宮收縮活動(dòng)，三次加完后用洛氏液沖洗3次，再加入等量的洛氏液，待曲線穩(wěn)定后，用同樣的加藥方式加入下一組藥物；加入1 U﹒mL-1縮宮素160 μL，記錄曲線10 min后再加入高劑量的藥液記錄10 min，觀察離體子宮肌收縮活動(dòng)的變化。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析給藥前后的變化，以（）表示，P ＜ 0.05 為顯著性差異，P＜0.01為極顯著性差異。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)正常大鼠離體子宮活動(dòng)的影響

與給藥前相比，W1高劑量使子宮活動(dòng)力、收縮頻率、收縮張力均值和最小值均明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），中劑量組使子宮收縮張力均值和最小值均明顯增大（P＜0.05或P＜0.01）；Et中、高劑量使子宮收縮張力最小值增大（P＜0.05或P＜0.01）；Bu低、中、高劑量均可使子宮活動(dòng)力、收縮張力平均值和最小值均明顯增加（P＜0.01），其中高劑量組收縮張力最大值下降（P＜0.05）。由此可見，在三個(gè)提取部位中以W1、Bu具有興奮正常子宮平滑肌活動(dòng)的作用，Et作用不顯著。結(jié)果見表1～表5，圖1。

表1 益母草藥材不同部位對(duì)正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

表1 益母草藥材不同部位對(duì)正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 N 給藥前 低劑量 中劑量 高劑量空白對(duì)照 10 1682.90±358.30 1653.70±271.38 1702.50±284.26 1710.10±233.53 W1 9 1264.33±389.97 1281.78±351.32 1331.11±339.09 1373.44±362.78** Et 8 1697.00±376.97 1696.13±361.25 1717.75±352.87 1744.50±346.35 Bu 10 1604.70±318.69 1794.40±375.73** 1819.60±316.31** 1910.80±359.38**

表2 益母草藥材不同部位對(duì)正常大鼠離體子宮收縮頻率的影響（x ±s）

表3 益母草藥材不同部位對(duì)正常大鼠離體子宮收縮平均值的影響（）

表3 益母草藥材不同部位對(duì)正常大鼠離體子宮收縮平均值的影響（）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 N 給藥前 低劑量 中劑量 高劑量空白對(duì)照 10 2.80±0.59 2.75±0.45 2.83±0.47 2.85±0.39 W1 9 2.10±0.65 2.13±0.58 2.21±0.57* 2.28±0.60** Et 8 2.92±0.73 2.82±0.61 2.85±0.59 2.78±0.75 Bu 10 2.67±0.53 2.98±0.62** 3.01±0.54** 3.18±0.59**

表5 益母草藥材不同部位對(duì)正常大鼠離體子宮收縮最小值的影響（）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 N 給藥前 低劑量 中劑量 高劑量空白對(duì)照 10 1.66±0.37 1.67±0.34 1.68±0.36 1.69±0.37 W1 9 1.48±0.45 1.54±0.44* 1.62±0.47** 1.69±0.51** Et 8 1.73±0.56 1.78±0.55 1.77±0.56* 1.81±0.58** Bu 10 1.80±0.46 1.89±0.45** 1.98±0.44** 2.14±0.51**

圖1 益母草不同提物對(duì)大鼠子宮收縮的影響

3.2 對(duì)縮宮素致子宮痙攣的影響

與造模前比較，給予縮宮素后大鼠離體子宮平滑肌條強(qiáng)烈收縮，活動(dòng)力明顯增加，收縮張力均值和最小值明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。給予益母草藥材不同提取物后，3個(gè)提取物均使子宮活動(dòng)力和收縮張力的均值、最大值降低，表現(xiàn)為抑制縮宮素對(duì)子宮的興奮作用。結(jié)果詳見表6～表10、圖2。

表6 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

表6 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

注：與造模前比較， **P＜0.01；與造模后比較，▲▲P＜0.01

劑量組別 N 造模前 造模后 給藥后（g﹒mL-1）空白對(duì)照 8 — 1668.75±320.07 2714.88±411.84** 2661.38±421.18 W1 8 0.006 1671.25±532.25 2380.25±378.61** 2101.25±452.86▲▲Et 8 0.006 1925.25±247.24 2574.50±346.96** 2279.38±330.48▲▲Bu 8 0.006 1721.75±319.69 2360.25±533.98** 2122.00±418.33▲▲

表7 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮頻率的影響（）

表7 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮頻率的影響（）

劑量組別 N 造模前 造模后 給藥后（g﹒mL-1）空白對(duì)照 8 — 8.00±2.51 8.13±4.09 9.13±3.76 W1 8 0.006 6.38±1.60 5.75±3.06 7.00±3.25 Et 8 0.006 5.88±1.13 4.88±3.87 4.88±3.27 Bu 8 0.006 5.88±1.73 4.63±3.11 4.50±3.46

表8 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力均值的影響（）

表8 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力均值的影響（）

注：與造模前比較，**P＜0.01；與造模后比較，▲▲P＜0.01

N 劑量造   （次）（g﹒mL-1）空白對(duì)照 8 — 2.78±0.53 4.52±0.69** 4.43±0.70 W1 8 0.006 2.77±0.88 3.96±0.63** 3.50±0.76▲▲Et 8 0.006 3.20±0.42 4.28±0.58** 3.79±0.55▲▲Bu 8 0.006 2.86±0.53 3.93±0.89** 3.53±0.70▲▲組別 模前 造模后 給藥后

表9 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最大值的影響（）

表9 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最大值的影響（）

注：與造模后比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

N 劑量造   （次）（g﹒mL-1）空白對(duì)照 8 — 5.66±0.97 5.94±0.52 5.80±0.59 W1 8 0.006 5.52±1.23 5.51±0.99 5.06±1.34▲Et 8 0.006 5.48±0.52 5.54±0.73 4.97±0.67▲▲Bu 8 0.006 5.21±1.15 5.30±1.12 4.76±0.92▲組別 模前 造模后 給藥后

表10 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最小值的影響（）

表10 益母草藥材不同部位對(duì)縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最小值的影響（）

注：與造模前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

N 劑量造   （次）（g﹒mL-1）空白對(duì)照 8 — 1.69±0.33 2.00±0.35* 2.38±0.74 W1 8 0.006 1.71±0.58 2.57±0.67* 2.33±0.61 Et 8 0.006 1.93±0.23 2.38±0.53** 2.75±0.59 Bu 8 0.006 1.79±0.42 2.26±0.72* 2.50±0.69組別 模前 造模后 給藥后

圖2 益母草不同提取物對(duì)縮宮素所致痙攣?zhàn)訉m收縮的影響

4 討論

現(xiàn)代研究表明，益母草藥理作用相當(dāng)廣泛，其對(duì)子宮有雙向調(diào)節(jié)作用，即當(dāng)子宮在正常狀態(tài)下用藥引起子宮興奮收縮，而當(dāng)子宮在痙攣狀態(tài)時(shí)用藥則引起松弛[4～6]。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，益母草的3種不同提取物中W1、Bu均具有一定興奮大鼠離體子宮平滑肌的作用，其中以W1、Bu較為明顯，均使子宮活動(dòng)力、收縮張力均值和最小值明顯增加，并呈一定的量效關(guān)系?？s宮素又名催產(chǎn)素，是垂體后葉素的主要成分，其主要作用為促進(jìn)子宮平滑肌收縮[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明縮宮素對(duì)大鼠離體子宮平滑肌有興奮作用，主要體現(xiàn)在增加子宮活動(dòng)力、收縮張力均值和最小值。此興奮作用可以被3種提取物對(duì)抗，均使子宮活動(dòng)力和收縮張力的均值、最大值降低。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果與相關(guān)報(bào)道[2,8～9]一致。據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果可知，益母草對(duì)子宮的調(diào)節(jié)作用與子宮狀態(tài)有關(guān)，對(duì)正常子宮主要表現(xiàn)為興奮作用，其中以正丁醇部位最明顯；對(duì)縮宮素所致痙攣離體子宮主要表現(xiàn)為舒張作用，以乙酸乙酯部位作用較為明顯。結(jié)果提示益母草水部位和正丁醇部位為其縮宮的主要活性物質(zhì)，而乙酸乙酯部位可作為研發(fā)治療痛經(jīng)藥物的潛在活性部位。

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（責(zé)任編輯：陳思敏）

Effects of different extracts from Leonurus japonicus Houtt. on isolated smooth muscle of uterus

LI Dan, XIE Xiaofang, PENG Cheng, XIONG Liang, ZHAO Xiao-mei//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective:To investigate the effects of extracts from Leonurus japonicus Houtt. on uterine smooth muscle in rats and to fnd the active extract.Method:There were three different extracts from Leonurus japonicus Houtt. including the water part(W1), ethyl acetate part(Et) and n-butano part( Bu). The effects of different extracts decoction on the spontaneous activity of uterine smooth muscle was observed with BL-420E biological signaling system and the activities of isolated uterus smooth muscle were recorded. The indexes included the amplitude, frequency and mobility in rat’s uterine smooth muscle movement track.Result:W1 and Bu had effect on rat uterus, and the activity, average and minimum values of uterus were signifcantly increased (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01). And all three kinds of extract could inhibit oxytocin effect on the contraction of the uterus, which could signifcantly decrease uterine activity, average and maximum (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01).Conclusion:Leonurus japonicus Houtt. has a two-way adjustment function of uterine activity. It stimulates the normal uterus of rats and inhibits the convulsive uterus. The water extraction part and n-butanol part may have the main active components.

Leonurus japonicus Houtt.；isolated uterus；active extract；dual-directional regulation

R 285.5

A

1674-926X(2014)03-008-04

國(guó)家“十一五”重點(diǎn)科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2009BAI84B00）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

李丹，在讀碩士研究生，主要從事中藥復(fù)方藥理毒理研究Tel:13558661832 Email:fdqlidan@163.com

彭成，教授，博導(dǎo)，主要從事中藥復(fù)方藥理與疾病動(dòng)物模型研究Tel:028-61800018 Email:pengchengchengdu@126.com

2013-09-04