大羅傘鮮品根、莖、葉揮發(fā)油成分的GC-MS分析

秦慶芳，許蓉蓉，李勇文，楊新平，李 麗，楊成芳，谷立勍（.柳州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006；.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林 54004；.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，南寧 500）

大羅傘即茜草科植物九節(jié)Psychotria rubra（Lour.）Poir.[1]，以根、葉入藥，別名九節(jié)木、山大刀等，在我國廣西境內(nèi)有較廣泛的分布，為壯族民間用藥，具有清熱解毒、消腫拔毒的功效，臨床可用于治療白喉、扁桃體炎、咽喉炎、痢疾、腸傷寒、胃痛和風(fēng)濕骨痛；其葉可外用于治療跌打腫痛、外傷出血、毒蛇咬傷、瘡瘍腫毒、下肢潰瘍。目前，關(guān)于大羅傘根、莖、葉揮發(fā)油成分的研究尚未見報(bào)道。為此，筆者嘗試采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)對(duì)其揮發(fā)油進(jìn)行分析，以期為大羅傘藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

7890A-5975C 型GC-MS 儀（美國安捷倫公司）；全玻璃揮發(fā)油測(cè)定器（天津玻璃儀器廠）；AE240型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；粉碎機(jī)（浙江省溫嶺市大鵬機(jī)械有限公司）；DHG-9123A 型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 藥材

大羅傘于2013年10月采摘自廣西桂平太平山動(dòng)植物保護(hù)區(qū)，經(jīng)桂林食品藥品檢驗(yàn)所饒偉文主任中藥師鑒定為茜草科植物九節(jié)P.rubra（Lour.）Poir.。

1.3 試劑

正構(gòu)烷烴C8～C40（質(zhì)量濃度：500μg/ml，美國AccuSandard公司）。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取

將采摘12h 內(nèi)的大羅傘藥材根、莖、葉分別粉碎成細(xì)粉，各精密稱取約100g，置于揮發(fā)油測(cè)定器中，分別加水500ml，按2010年版《中國藥典》（一部）附錄“揮發(fā)油測(cè)定”項(xiàng)下甲法提取揮發(fā)油[2]，取揮發(fā)油層，用乙醚溶解并定容至1ml，用無水硫酸鈉干燥，再經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2 GC條件

色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱（30m×250μm，0.25μm）；流速：1ml/min；進(jìn)樣口溫度：250℃；不分流進(jìn)樣；程序升溫：起始溫度80℃，然后以10℃/min的速率升至190℃，保持5 min，再以5℃/min的速率升至230℃，再以10℃/min的速率升至300℃，保持20min；傳輸線溫度：280℃。

2.3 MS條件

離子源：電轟擊電離（EI）源；四極桿溫度：150℃；離子源溫度：230℃；溶劑延遲2min；增益系數(shù)1.00＝1306V；質(zhì)量掃描范圍（m/z）：20～500amu。

3 GC-MS分析[3-10]

取“2.1”項(xiàng)下溶液，按上述GC-MS條件對(duì)大羅傘根、莖、葉的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，總離子流圖見圖1。

圖1 總離子流圖A.根；B.莖；C.葉Fig 1 TIC of volatile oilA.root；B.stem；C.leave

對(duì)圖1中的各峰進(jìn)行峰純度檢查，再將各成分的質(zhì)譜圖與NIST08標(biāo)準(zhǔn)譜庫進(jìn)行比對(duì)。以圖1C 中的t＝23.874峰為例，其質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜庫中的同分異構(gòu)體Isophytol（3，7，11，15-Tetramethyl-1-hexadecen-3-ol，編號(hào)：133809）和1-Hexadecen-3-ol，3，5，11，15-tetramethyl（編號(hào)：133817）的相似度均極高，見圖2。

經(jīng)分析，大羅傘的根、莖、葉揮發(fā)油分別分析出23、38、27個(gè)成分，扣除2個(gè)塑化劑峰及相對(duì)含量過低、碎片不完整的峰，根、莖、葉確定出7、12、5個(gè)成分，分別占各自揮發(fā)油總量的91.7%、83.6%、85.4%，均檢出肉豆蔻酸、十五烷酸、棕櫚酸等成分。使用面積歸一化法對(duì)各成分含量進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果表明棕櫚酸為主要檢出成分，分別占根、莖、葉中各自揮發(fā)油總量的66.0%、60.4%、71.8%。大羅傘根、莖、葉的揮發(fā)油化學(xué)成分分析結(jié)果分別見表1、表2、表3。

圖2 t＝23.874 min峰與標(biāo)準(zhǔn)譜庫編號(hào)133809、133817的MS圖A.t＝23.874min峰；B.標(biāo)準(zhǔn)譜庫編號(hào) 133809；C.標(biāo)準(zhǔn)譜庫編號(hào)133817Fig 2 MS of peak（t＝23.874 min）from TIC of volatile oil in leavesA.t＝23.874min peak；B.No. 133809；C.No.133817

表1 大羅傘根的揮發(fā)油化學(xué)成分分析Tab 1 Chemical constituents and relative content of volatile oil in roots of P.rubra

表2 大羅傘莖的揮發(fā)油化學(xué)成分分析Tab 2 Chemical constituents and relative content of volatile oil in stems of P.rubra

4 討論

KI 是氣相色譜定性指標(biāo)的一種參數(shù)。試驗(yàn)中計(jì)算KI 所用保留時(shí)間均為扣除背景后的保留時(shí)間，考慮到峰面積較大的成分存在保留時(shí)間漂移，例如根的揮發(fā)油中棕櫚酸峰保留時(shí)間為24.393min，而使用分流比20∶1進(jìn)樣后的保留時(shí)間為24.078min，故本試驗(yàn)使用分流比計(jì)算KI。

表3 大羅傘葉的揮發(fā)油化學(xué)成分分析Tab 3 Chemical constituents and relative content of volatile oil in leavesof P.rubra

由于貯存時(shí)間對(duì)植物揮發(fā)油的含量有顯著影響[11]，故本試驗(yàn)選用采摘12h內(nèi)的大羅傘作為樣品。

綜上所述，本試驗(yàn)采用GC-MS 聯(lián)用技術(shù)分析大羅傘根、莖、葉的揮發(fā)油，方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性均良好，可作為大羅傘質(zhì)量分析和鑒別的科學(xué)依據(jù)。

[1]謝宗萬.全國中草藥匯編[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：100、810.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄63.

[3]蘇越，劉素紅，王呈仲，等.譜圖相似度分析結(jié)合保留指數(shù)對(duì)單萜烯同分異構(gòu)體的GC-MS 定性分析[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28（5）：525.

[4]尹昌海，魏遠(yuǎn)隆，左海根，等.GC-MS 結(jié)合保留指數(shù)分析南豐蜜桔揮發(fā)性成分[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2012，11（31）：58.

[5]楊帥，楊文文，胡金芳，等.GC-MS 結(jié)合保留指數(shù)分析白花蛇舌草揮發(fā)性成分[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（9）：93.

[6]楊帥，楊文文，呂青濤，等.GC-MS 結(jié)合保留指數(shù)分析半枝蓮揮發(fā)性成分[J].現(xiàn)代儀器，2012，3（18）：47.

[7]劉朋，徐琳琳，呂青濤，等.頂空進(jìn)樣GC-MS 結(jié)合保留指數(shù)分析補(bǔ)骨脂揮發(fā)性成分[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，10（17）：74.

[8]吳彩霞，劉廣河，康文藝.檉柳花揮發(fā)性成分研究[J].中國藥房，2010，21（15）：1406.

[9]劉朋，張瑩，呂青濤，等.氣-質(zhì)聯(lián)用結(jié)合保留指數(shù)分析厚樸揮發(fā)性成分[J].食品與藥品，2011，13（1）：39.

[10]張瑩，劉朋，容榮，等.頂空進(jìn)樣GC-MS 結(jié)合保留指數(shù)分析墨旱蓮揮發(fā)性成分[J].化學(xué)分析計(jì)量，2010，19（5）：32.

[11]吳宇鋒，呂圭源，張志茹，等.貯存時(shí)間對(duì)柳葉蠟梅揮發(fā)油及桉油精含量的影響[J].中國中藥雜志，2013，28（17）：2803.