貞茯菌膠囊對(duì)酒精性肝損傷模型小鼠的保護(hù)作用Δ

薛承斌，晏 瓊，韓定獻(xiàn)（.華中科技大學(xué)醫(yī)院，武漢 430074；.華中科技大學(xué)化學(xué)系藥物研究所，武漢 430074）

由于酗酒而產(chǎn)生的酒精性肝損傷現(xiàn)已成為一種常見、多發(fā)癥，嚴(yán)重影響人們的健康[1]。又因很多肝臟疾病的病因或發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全明了，臨床尚無特效藥物治療酒精性肝損傷，其損傷又呈不可逆性[2]，因此早期預(yù)防顯得尤為重要，而中醫(yī)藥對(duì)本病的治療有著明顯的優(yōu)勢(shì)。本課題組從具有護(hù)肝作用的原料女貞子、茯苓以及香菇多糖入手，對(duì)近年來國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行檢索和分析，再根據(jù)中醫(yī)藥有關(guān)理論進(jìn)行產(chǎn)品組方，采取科學(xué)的生產(chǎn)工藝加工得到貞茯菌膠囊。本研究旨在探討貞茯菌膠囊對(duì)酒精性肝損傷模型小鼠的輔助保護(hù)功能。

1 材料

1.1 儀器

7020型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)（日本日立公司）；XDS-200D型光學(xué)顯微鏡（上海蔡康光學(xué)儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

貞茯菌膠囊（華中科技大學(xué)藥物研究所，批號(hào)：20111201）；丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）測(cè)試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠60只，♀，體質(zhì)量（20±2）g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（鄂）2008-0014]。實(shí)驗(yàn)室溫度20～26 ℃，濕度40%～70%。

2 方法

2.1 復(fù)制模型與分組、給藥

60只KM小鼠隨機(jī)均分為5組，即正常對(duì)照（等容生理鹽水）組、模型（等容生理鹽水）組與貞茯菌膠囊高、中、低劑量（0.45、0.30、0.15 g/kg）組，ig給藥，每天1次，連續(xù)30 d。末次給藥后一次性ig 50%乙醇14 ml/kg以復(fù)制小鼠酒精性肝損傷模型[3]。

2.2 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠體質(zhì)量的影響

分別于ig貞茯菌膠囊0、1、2、3、4周后稱定小鼠體質(zhì)量。

2.3 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠肝勻漿MDA、GSH、甘油三酯（TG）水平的影響

模型復(fù)制成功后禁食16 h，頸椎脫臼處死小鼠，取0.5 g小鼠肝臟，制備肝勻漿后按試劑盒方法測(cè)定MDA、GSH水平，自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TG水平。

2.4 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠肝臟形態(tài)學(xué)的影響

將小鼠肝臟從肝左葉中部作橫切面取材，固定、脫水、浸蠟、包埋、切片、油紅O染色，觀察脂滴在肝臟的分布、范圍和面積，分別記錄每個(gè)視野中的各種病變所占視野的面積，累計(jì)所觀察視野的病變總分：肝細(xì)胞內(nèi)脂滴散在、稀少，0分；含脂滴的肝細(xì)胞不超過1/4，1分；含脂滴的肝細(xì)胞不超過1/2，且超過1/4，2分；含脂滴的肝細(xì)胞不超過3/4，且超過1/2，3分；肝組織幾乎被脂滴替代，4分。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠體質(zhì)量的影響

各組小鼠體質(zhì)量無明顯改變，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠體質(zhì)量的影響見表1。

表1 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠體質(zhì)量的影響（）Tab 1 Effects of Zhenfujun capsule on body weight of model mice（）

表1 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠體質(zhì)量的影響（）Tab 1 Effects of Zhenfujun capsule on body weight of model mice（）

3.2 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠肝勻漿MDA、GSH與TG含量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝勻漿MDA、TG含量增加，GSH含量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，貞茯菌膠囊高、中劑量組小鼠肝勻漿MDA水平降低，GSH水平升高；貞茯菌膠囊高、中、低劑量組小鼠肝勻漿TG水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠肝勻漿MDA、GSH和TG含量的影響見表2。

表2 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠MDA、GSH、TG含量的影響（）Tab 2 Effects of Zhenfujun capsule on the content of MDA，GSH and TG of model mice（）

表2 貞茯菌膠囊對(duì)模型小鼠MDA、GSH、TG含量的影響（）Tab 2 Effects of Zhenfujun capsule on the content of MDA，GSH and TG of model mice（）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

3.3 貞茯菌膠囊對(duì)小鼠肝臟形態(tài)學(xué)的影響

正常對(duì)照組病變總分為（0.23±0.44）分，模型組病變總分為（3.60±0.45）分，貞茯菌膠囊高、中、低劑量組病變總分分別為（3.22±0.42）、（3.08±0.67）、（3.33±0.72）分。與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織細(xì)胞內(nèi)被染為紅色大脂滴，且分布范圍廣，肝細(xì)胞脂肪變性明顯，證明小鼠酒精性肝損傷模型復(fù)制成功；與模型組比較，貞茯菌膠囊高、中、低劑量組小鼠肝組織細(xì)胞紅色脂滴分布范圍變小，說明脂肪變性情況有所改善，其中以中劑量組效果最好，紅色脂滴分布范圍明顯減小，表明貞茯菌膠囊具有逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞脂肪變性和修復(fù)肝臟細(xì)胞的作用。小鼠肝臟形態(tài)學(xué)見圖1。

4 討論

過量酗酒導(dǎo)致的酒精性肝損傷已逐漸成為全球性公共衛(wèi)生問題。自由基和脂質(zhì)過氧化損傷是酒精性肝損傷的一個(gè)重要發(fā)病機(jī)制[3]。乙醇進(jìn)入體循環(huán)后在肝臟中代謝會(huì)產(chǎn)生自由基與活性氧，引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，氧自由基使脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致肝中還原型谷胱甘肽減少和過氧化脂質(zhì)增多，誘發(fā)肝臟組織損傷[4-5]。

貞茯菌膠囊的主要成分女貞子具有護(hù)肝、降血糖、降血脂、抗炎、抗衰老抗癌等藥理作用[6]。齊墩果酸是女貞子提取物的主要成分，它對(duì)肝臟的保護(hù)作用主要?dú)w因于其抗氧化、抗炎作用以及對(duì)藥物代謝酶的影響[7]；其化學(xué)結(jié)構(gòu)存在活性基團(tuán)，可阻止或減少M(fèi)DA的生成，活潑的雙鍵易與自由基發(fā)生加成反應(yīng)[3]，減輕自由基對(duì)肝臟的損害。

茯苓是藥食兩用真菌，為中藥“四君八珍”之一，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，茯苓具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能、保肝等多種藥理作用[8]。有研究表明，茯苓提取物可促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性肝硬變動(dòng)物肝臟膠原蛋白降解，使肝內(nèi)纖維組織重吸收[9]。

圖1 小鼠肝臟形態(tài)學(xué)（油紅O染色，400×）A.正常對(duì)照組；B.模型組；C.貞茯菌膠囊低劑量組；D.貞茯菌膠囊中劑量組；E.貞茯菌膠囊高劑量組Fig 1 Morphology of liver tissue in mice（oil red O stain，400×）A.normal control group；B.model group；C.Zhenfujun capsule low-dose group；D.Zhenfujun capsule medium-dose group；E.Zhenfujun capsule high-dose group

香菇多糖是香菇的重要功效成分，具有一定清除羥基自由基、清除超氧陰離子自由基的能力，可以減少小鼠肝勻漿MDA生成[10]，增加小鼠肝勻漿細(xì)胞色素P450[11]，有利于調(diào)節(jié)體內(nèi)某些活性物質(zhì)的代謝，從而對(duì)肝起到保護(hù)作用。

由本研究可知，與模型組比較，貞茯菌膠囊高、中劑量組小鼠肝勻漿MDA水平降低，GSH水平升高，貞茯菌膠囊高、中、低劑量組小鼠肝勻漿TG水平降低。肝臟病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，貞茯菌膠囊高、中劑量組小鼠肝臟損傷程度輕于模型組，肝細(xì)胞脂肪變性程度減輕。以上結(jié)果說明貞茯菌膠囊可能能清除肝臟中產(chǎn)生的自由基、降低過氧化脂質(zhì)，并能在一定程度上減輕肝細(xì)胞的脂肪變性程度，對(duì)酒精性肝損傷具有輔助保護(hù)作用。

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