歙白術(shù)與其他產(chǎn)地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯類成分含量比較

楊 潔，林 薔，李立華，孟 楣，方成武

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 國家中醫(yī)藥管理局中藥藥劑科研三級實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031；2.安徽省立兒童醫(yī)院，安徽合肥 230051；3.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽亳州 236000）

歙白術(shù)與其他產(chǎn)地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯類成分含量比較

楊 潔1，林 薔2，李立華1，孟 楣1，方成武3

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 國家中醫(yī)藥管理局中藥藥劑科研三級實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031；2.安徽省立兒童醫(yī)院，安徽合肥 230051；3.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽亳州 236000）

目的 以白術(shù)內(nèi)酯類成分為評價(jià)指標(biāo)，比較歙白術(shù)與其他產(chǎn)地白術(shù)的質(zhì)量差異。方法 采用高效液相色譜法同時(shí)測定安徽、浙江5個產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。色譜柱：Agilent TC－C18（4.6 mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇－水（70∶30）；檢測波長：白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ的檢測波長為220nm，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的檢測波長為276nm；流速：1.0ml／min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μl。結(jié)果 歙白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量顯著高于其他產(chǎn)地白術(shù)。結(jié)論 白術(shù)內(nèi)酯類成分可作為不同產(chǎn)地白術(shù)質(zhì)量的評價(jià)指標(biāo)。

歙白術(shù)；高效液相色譜法；白術(shù)內(nèi)酯；含量測定

白術(shù)為菊科蒼術(shù)屬植物白術(shù)（Atractylodes macrocephala Koidz.）的干燥根莖，素有“十方九用”“南術(shù)北參”之稱［1］，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎之功效［2］。白術(shù)內(nèi)酯類成分是白術(shù)中重要的活性成分，主要包括白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅳ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅴ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅵ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅶ以及雙白術(shù)內(nèi)酯等［3］?，F(xiàn)代藥理研究表明，白術(shù)內(nèi)酯類成分是白術(shù)抗炎、抗癌的有效成分，還具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收的功能［4］。白術(shù)的道地藥材有于術(shù)、浙東術(shù)、歙術(shù)、祁術(shù)、舒州術(shù)、江西術(shù)和平江術(shù)［5］，其中安徽歙縣產(chǎn)白術(shù)，歷史悠久，是安徽著名的藥材之一。《本草蒙筌》記載：“歙術(shù)，產(chǎn)深谷……仍覓歙為優(yōu)?！惫糯t(yī)家普遍認(rèn)為歙白術(shù)品質(zhì)優(yōu)于浙白術(shù)［6］。目前，對于白術(shù)的化學(xué)成分、藥理、臨床應(yīng)用等方面已有深入研究和大量報(bào)道［7－13］，但有關(guān)歙白術(shù)的質(zhì)量評價(jià)研究甚少。本研究應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測定安徽、浙江5個產(chǎn)地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量，比較歙白術(shù)與其他產(chǎn)地白術(shù)之間3種白術(shù)內(nèi)酯的差異，為歙白術(shù)質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 600高效液相色譜系統(tǒng)：美國產(chǎn)，包括Waters 2487型紫外檢測器、Millennium 32色譜工作站；WL－100型高速中草藥粉碎機(jī)：浙江省瑞安市威力制藥機(jī)械廠；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器：江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；SYZ－B型石英亞沸高純水蒸餾器：江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；賽多利斯BS200S電子天平：德國Sartorious公司；80－Z離心沉淀器：上海手術(shù)器械廠；GZX－9240 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.2 試藥 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品由中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心提供，批號分別為1017－080819、1018－081209、1019－080820，純度≥98％；藥材樣品采于安徽歙縣、亳州、寧國、霍山和浙江于潛等地，見表1。藥材經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與中藥學(xué)教研室劉守金教授鑒定為白術(shù)Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖。甲醇為色譜純，水為重蒸水（自制），其余試劑為分析純。

表1 白術(shù)藥材樣品采集信息

2 方法

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇－水（70∶30）；檢測波長：白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ檢測波長為220nm，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ檢測波長為276nm；流速：1.0ml／min；進(jìn)樣量：20μl；柱溫：室溫。

按照上述色譜條件分別注入白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的混合對照品溶液及樣品進(jìn)行測定，結(jié)果表明，在該色譜條件下，理論板數(shù)以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000，主峰與相鄰其他色譜峰的分離度均不小于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。對照品與樣品的高效液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌罚ˋ）及歙白術(shù)樣品（B）的高效液相色譜圖（276nm，峰1為白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ）

圖2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ對照品（C）及歙白術(shù)樣品（D）的高效液相色譜圖（220nm，峰2為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ，峰3為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ）

2.2 對照品溶液的制備 分別稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品適量，加甲醇稀釋至刻度，制成含有白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品分別為2.56、3.22、3.24 mg／ml的混標(biāo)儲備液。

2.3 供試品溶液制備 稱取藥材粉末（過40目篩）約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液10ml，超聲處理30min，3 000r／min離心10 min，靜置，取上清液，置于容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，溶液過0.45μm微孔濾膜，制得供試品溶液。2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察：分別精密吸取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品儲備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于10ml容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下進(jìn)行分析，分別以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（x），色譜峰面積為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的回歸方程分別為：y1＝69 890 x1＋257 610，r1＝0.999 3；y2＝629 96 x2＋264 427，r2＝0.999 6；y3＝100 435 x3＋333 372，r3＝0.999 6。結(jié)果表明，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別在25.6～128.0μg／ml、32.2～161.0μg／ml、32.4～162μg／ml的濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn)：精密吸取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品溶液，濃度分別為2.56、3.22、3.24mg／ml，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的精密度，RSD分別為1.033％、1.498％、0.953 1％。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10、24h在上述色譜條件下進(jìn)行分析。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的RSD分別為1.368％、1.443％、1.859％。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批藥材樣品粉末5份各1.0g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，測定，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的RSD分別為1.189％、1.171％、0.358 2％。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)：稱取已測定含量的樣品粉末0.5g，共6份，精密稱定，分別加入白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混標(biāo)溶液，其中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（0.120mg／ml）0.55 ml、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ（0.090mg／ml）0.60ml、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ（0.120mg／ml）0.55ml，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的平均回收率分別為98.52％、97.88％、98.28％，RSD分別為0.732 9％、0.701 4％、0.576 8％。

2.5 含量測定 按上述方法分別測定不同產(chǎn)地白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。方差分析結(jié)果顯示，其他4種產(chǎn)地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量顯著低于歙縣產(chǎn)白術(shù)（P＜0.05）。見表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法同時(shí)測定白術(shù)藥材中這3種成分的含量，方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可為進(jìn)一步有效控制白術(shù)質(zhì)量提供依據(jù)。

結(jié)果表明，安徽、浙江5個產(chǎn)地白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以歙縣產(chǎn)白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量最高。另外，歙白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量與其他產(chǎn)地差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量比較（±s）

表2 白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量比較（±s）

注：與安徽省歙縣長陔鄉(xiāng)白術(shù)比較，＊P＜0.05。

白術(shù)產(chǎn)地n白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ／（mg／g）白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ／（mg／g）白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ／（mg／g）安徽省歙縣長陔鄉(xiāng)10 0.096±0.031 0.152±0.022 0.122±0.018安徽省亳州市譙城區(qū)觀堂鎮(zhèn)李糊村10 0.123±0.037 0.091±0.008＊0.104±0.013安徽省寧國市云梯鄉(xiāng)10 0.083±0.015 0.087±0.011＊0.145±0.028浙江省臨安市于潛鎮(zhèn)西天目鄉(xiāng)后院村10 0.072±0.026 0.064±0.009＊0.139±0.021安徽省霍山縣太平畈鄉(xiāng)王家店村10 0.091±0.004 0.075±0.008＊0.128±0.008

安徽歙縣一直是白術(shù)的地道產(chǎn)區(qū)之一，在實(shí)地采樣中發(fā)現(xiàn)，歙白術(shù)多種植在海拔500m以上的陰坡上，且坡較陡（坡角＞30°），根狀莖大，其頂端有較為明顯的鶴頸，下端膨大形似如意，栽培多年者根莖不腐爛。歙白術(shù)的栽培方式與其他產(chǎn)地白術(shù)有所不同，現(xiàn)在大部分白術(shù)栽培種植都是用種子直播，先育苗，然后移栽1年后采收，而歙縣則采用芽頭繁殖，一般3～5年后采收，藥農(nóng)在采收白術(shù)的同時(shí)直接將同一地點(diǎn)白術(shù)根莖上的芽頭切下埋在地里種植。李偉等［14］報(bào)道，歙白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量明顯高于浙江、四川及安徽其他產(chǎn)地所產(chǎn)白術(shù)。這是否與當(dāng)?shù)氐纳鷳B(tài)環(huán)境、栽培方式密切相關(guān)？不同年限的歙白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量有何變化規(guī)律？歙白術(shù)與其他產(chǎn)地白術(shù)的質(zhì)量差異對臨床療效有何影響？這些問題還有待于今后深入研究與探討。

（在本課題研究中，得到了安徽省“115”產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)——新安醫(yī)藥研究與開發(fā)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)成員的大力支持與幫助，特此致謝。）

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Content of Atractylenolides in AtractylodesmacrocephalaKoidz.from She County and Other Places：A Comparative Study

YANG Jie1，LIN Qiang2，LI Li－h(huán)ua1，MENG Mei1，F(xiàn)ANG Cheng－wu3
（1.The First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine ＆The Third Grade Lab for Scientific Research of Chinese Drugs Agentia，State Administration of Traditional Chinese Medicine，Anhui Hefei 230031，China；2.Anhui Provincial Children's Hospital，Anhui Hefei 230051，China；3.Bozhou Vocational and Technical College，Anhui Bozhou 236000，China）

Objective To compare the quality between Atractylodes macrocephala Koidz.from She County and those from other places based on the content of atractylenolides.Methods The content of atractylenolidesⅠ，Ⅱ，andⅢin Atractylodes macrocephala Koidz.from five places in Anhui and Zhejiang provinces，China was determined by high－performance liquid chromatography（HPLC）.HPLC was performed on an Agilent TC－C18column（4.6mm×250mm，5μm）with a mobile phase of methanol－water（70∶30）at a detection wavelength of 220nm（for atractylenolidesⅠandⅢ）or 276nm（for atractylenolideⅡ），a flow rate of 1.0ml／min，a column temperature of room temperature，and a sample size of 20μl.Results Atractylodes macrocephala Koidz.from She County had significantly higher content of atractylenolideⅡthan those from other places.Conclusion Atractylenolides can be used as an evaluation index for the quality of Atractylodes macrocephala Koidz.from different places.

Atractylodes macrocephala Koidz.from She County；high－performance liquid chromatography；atractylenolide；content determination

R927.2

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.01.026

2013－08－19）

美國許氏基金會合作研究項(xiàng)目（K200334）

楊潔（1985－），碩士，中藥師

方成武，cwfang1961＠sina.com