正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃精加壓酒蒸工藝研究

張 婕，金傳山，吳德玲，張 偉

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 現(xiàn)代中藥安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031）

正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃精加壓酒蒸工藝研究

張 婕，金傳山，吳德玲，張 偉

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 現(xiàn)代中藥安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031）

目的 優(yōu)選黃精加壓酒蒸的最佳工藝。方法 以外觀性狀和黃精多糖為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法考察蒸制時(shí)間、蒸制溫度、加酒量、蒸制次數(shù)4個(gè)因素，優(yōu)選黃精的炮制工藝。結(jié)果 黃精加壓酒蒸最佳工藝為黃精100g，10％黃酒悶潤(rùn)，120℃高壓蒸60min，取出，切3mm厚片，干燥。結(jié)論 優(yōu)選得到的黃精炮制工藝穩(wěn)定，可為黃精飲片的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

黃精；多糖；加壓酒蒸；正交試驗(yàn)

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianumColl.et Hemsl、黃精P.sibiricumRed.或多花黃精P.cyrtonema Hua的干燥根莖。按形狀不同，習(xí)稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”。黃精具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎的功效［1］，主要含有多糖、蒽醌、皂苷以及氨基酸等成分。黃精多糖具有調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老、降血糖、降血脂等藥理作用［2－4］。生黃精具有麻味，易刺激咽喉，蒸制可使黃精去除原有的麻味，同時(shí)使其外觀顏色由淡黃色或黃棕色轉(zhuǎn)變?yōu)樽睾稚蚝谏?。酒制能助藥?shì)，使之更好地發(fā)揮補(bǔ)益作用，故臨床上選用酒制黃精。由于2010版《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)黃精炮制工藝的規(guī)定較為籠統(tǒng)，且缺乏穩(wěn)定可控的工藝參數(shù)，導(dǎo)致黃精飲片的質(zhì)量參差不齊。故本試驗(yàn)采用L9（34）正交試驗(yàn)法，考察蒸制時(shí)間、蒸制溫度、加酒量、蒸制次數(shù)4個(gè)因素，優(yōu)選黃精的炮制工藝，為黃精飲片的生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 UV－1600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海美普達(dá)儀器有限公司；AS3120型超聲清洗儀：加拿大Autoscience公司；CP225D型十萬(wàn)分之一電子天平：德國(guó)Sartorius公司；WL－100型打粉機(jī)：浙江省瑞安市威力制藥機(jī)械廠；HHS111－2型電熱恒溫水浴鍋：北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠；立式壓力蒸汽滅菌器：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.2 試藥 黃精藥材經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院金傳山教授鑒定為百合科植物多花黃精P.cyrtonema Hua的干燥根莖。無(wú)水葡萄糖：上海潤(rùn)捷化學(xué)試劑有限公司（批號(hào)20100726）；海神黃酒：安徽海神黃酒集團(tuán)有限公司；硫酸、0.2％蒽酮－硫酸試液等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃精多糖的測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備：取經(jīng)105℃干燥至恒質(zhì)量的葡萄糖對(duì)照品3.32mg，精密稱定，置于10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成0.332 mg／ml的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備：精密稱取黃精樣品0.5g，置于250ml圓底燒瓶中，加80％乙醇150ml回流提取1h，趁熱過(guò)濾，用熱的80％乙醇洗滌燒瓶及殘?jiān)?次，每次10ml。然后將濾紙及殘?jiān)呕責(zé)恐?，加?50ml回流提取1h，趁熱過(guò)濾，熱水洗滌燒瓶及殘?jiān)?次，每次10ml，合并濾液和洗滌液，轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得［1］。

2.1.3 線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分別置于10ml具塞刻度試管中，各加水至2ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2％蒽酮－硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。在582nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度（c）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A＝0.335 2 c＋0.060 1，r＝0.998，線性范圍為0.33～1.98mg／ml。

2.1.4 精密度試驗(yàn)：精密吸取葡萄糖對(duì)照品溶液1.0ml，置具塞試管中，按照“2.1.3”項(xiàng)下方法操作，在波長(zhǎng)582nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得RSD為1.94％，結(jié)果表明儀器精密度良好，符合要求。

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取黃精樣品6份，約0.5g，制備6份供試品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備，測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中黃精多糖的平均百分含量為5.38％，RSD＝1.92％。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取黃精樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，每隔10min測(cè)定1次吸光度，連續(xù)測(cè)定9次，RSD＝1.91％，結(jié)果表明樣品液顯色后在90min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.7 加樣回收率試驗(yàn)：取已知黃精多糖含量的黃精樣品0.5g，共6份，精密稱定，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，精密移取1ml，再加入葡萄糖對(duì)照品0.1ml，置10ml具塞刻度試管中，各加水至2ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2％蒽酮－硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。在582nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算平均回收率為99.88％，RSD＝1.83％。

2.2 黃精加壓酒蒸工藝的正交試驗(yàn) 以文獻(xiàn)查閱及單因素考察為基礎(chǔ)，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，考察蒸制時(shí)間（A）、蒸制溫度（B）、加酒量（C）、蒸制次數(shù)（D）4個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，以性狀、黃精多糖為評(píng)價(jià)指標(biāo)，加黃酒悶潤(rùn)，置高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)蒸制，優(yōu)選加壓酒蒸黃精的工藝。因素水平見(jiàn)表1。

2.2.1 加壓酒蒸黃精外觀性狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：參照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》黃精性狀項(xiàng)下規(guī)定，確定評(píng)分。黑色，計(jì)1.0分；棕褐色，計(jì)0.8分；棕色，計(jì)0.5分。味甜、無(wú)口舌麻木感，計(jì)1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，計(jì)0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，計(jì)0.5分。嚼之黏性足，計(jì)1.0分；嚼之有黏性，計(jì)0.8分；嚼之無(wú)黏性，計(jì)0.5分。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：為客觀反映加壓酒蒸黃精工藝中各因素對(duì)黃精質(zhì)量的影響，本試驗(yàn)將外觀性狀及與黃精功效相關(guān)成分（黃精多糖）作為評(píng)定指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法評(píng)定。因黃精多糖是黃精的有效成分，且為2010版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的黃精的指標(biāo)成分，又因外觀性狀和黃精多糖的含量對(duì)酒蒸黃精的質(zhì)量評(píng)價(jià)有同等重要意義，故外觀性狀加權(quán)系數(shù)定為0.5，黃精多糖含量的加權(quán)系數(shù)為0.5。外觀性狀加權(quán)評(píng)分＝（外觀性狀評(píng)分／9個(gè)樣品中最高外觀性狀評(píng)分）×5，黃精多糖含量加權(quán)評(píng)分＝（黃精多糖含量／9個(gè)樣品中黃精多糖最高含量）×5。綜合評(píng)分＝外觀性狀加權(quán)評(píng)分＋黃精多糖含量加權(quán)評(píng)分。結(jié)果分別見(jiàn)表2、表3。

表2 黃精加壓酒蒸工藝的L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）

表3 方差分析表

由表2中極差R值可知，各因素的作用為：B＞ A＞D＞C，A因素（蒸制時(shí)間）和B因素（蒸制溫度）對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響。由于C因素（加酒量）和D因素（蒸制次數(shù)）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著性影響，從工業(yè)化生產(chǎn)節(jié)約能耗、便于操作等角度綜合考慮，酒蒸黃精最佳炮制工藝為A2B3C1D1，即黃精100g，10％黃酒悶潤(rùn)，120℃高壓蒸60min，取出，切3mm厚片，干燥。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 按照上述黃精的最佳炮制工藝，取黃精100g，加入10％黃酒悶潤(rùn)，120℃高壓蒸60 min，取出，切3mm厚片，干燥，制備黃精樣品3份。取樣測(cè)定蒸制品中黃精多糖的量。3批試驗(yàn)得到的樣品均為黑色，味甜，嚼之黏性足。黃精多糖的含量分別為7.87％、8.05％、8.17％，表明工藝操作簡(jiǎn)便，合理可控。

2.4 傳統(tǒng)蒸制和加壓蒸制黃精質(zhì)量比較

2.4.1 傳統(tǒng)蒸制：參考前期試驗(yàn)優(yōu)選出的黃精傳統(tǒng)炮制工藝，即取黃精100g，20％黃酒悶潤(rùn)，大火蒸2h，反復(fù)6次，取出，切3mm厚片，干燥。

2.4.2 加壓蒸制：取黃精100g，10％黃酒悶潤(rùn)，120℃高壓蒸60min，取出，切3mm厚片，干燥。

2.4.3 不同炮制方法所得黃精質(zhì)量比較：方法同前，研究結(jié)果表明，加壓蒸制黃精的質(zhì)量?jī)?yōu)于傳統(tǒng)蒸制黃精。見(jiàn)表4。

表4 傳統(tǒng)蒸制、加壓蒸制黃精質(zhì)量比較（n＝3）

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道及臨床實(shí)踐表明，黃精生用會(huì)產(chǎn)生口舌麻木、刺激咽喉的不良反應(yīng)，炮制后既能消除不良反應(yīng)又能增強(qiáng)補(bǔ)脾、益腎的功效［5］。本研究結(jié)果表明，黃精炮制后無(wú)口舌麻木感，色黑味甜，質(zhì)地柔軟，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。

外觀質(zhì)量評(píng)價(jià)是傳統(tǒng)意義上的中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)是目前單一化學(xué)成分和化學(xué)部位不能替代的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［6］，故將其作為正交試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。黃精多糖是黃精的主要有效成分，具有調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老、降血糖等作用，故選其作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明，加壓蒸制黃精的黃精多糖含量高于傳統(tǒng)蒸制黃精，且外觀質(zhì)量較優(yōu)。

黃精傳統(tǒng)的炮制方法費(fèi)工耗時(shí)，隨常壓蒸制時(shí)間的延長(zhǎng)，藥液損失增多，且易導(dǎo)致其內(nèi)部纖維化，影響飲片質(zhì)量。采用加壓蒸制法蒸制黃精，便于控制時(shí)間、溫度等影響因素，又能夠縮短炮制時(shí)間，減少有效成分的流失。與常壓蒸制黃精相比，加壓蒸制黃精工藝合理，穩(wěn)定可行，故可為黃精的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)僅從外觀性狀和化學(xué)成分的角度優(yōu)選黃精炮制工藝，還應(yīng)將化學(xué)成分、藥效等多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)炮制工藝。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：288.

［2］陳立娜，高艷坤，都述虎.黃精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中藥材，2006，29（12）：1367－1369.

［3］賀?；?，楊云，王爽，等.不同蒸制方法和時(shí)間對(duì)黃精中多糖含量的影響［J］.中藥材，2009，32（6）：861－862.

［4］張瑩，鐘凌云.炮制對(duì)黃精化學(xué)成分和藥理作用影響研究［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，22（4）：77－79.

［5］鐘凌云，周燁，龔千鋒.炮制對(duì)黃精薯蕷皂苷元影響的研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，27（3）：538－540.

［6］李群，王瑾，張會(huì)敏.正交試驗(yàn)法優(yōu)選桑白皮蜜炙工藝［J］.中草藥，2013，44（3）：286－290.

Optimization of Pressurized Wine－steaming Process for Rhizoma Polygonati by Orthogonal Test

ZHANG Jie，JIN Chuan－shan，WU De－ling，ZHANG Wei
（School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine ＆Anhui Key Laboratory of Modern Chinese Materia Medica，Anhui Hefei 230031，China）

Objective To optimize the pressurized wine－steaming process for Rhizoma Polygonati.Methods The orthogonal test was used to investigate the effects of steaming time，steaming temperature，wine volume，and steaming times on the appearance and polysaccharides，and the steaming process was optimized accordingly.Results The optimal pressurized wine－steaming process for Rhizoma Polygonati was as follows：Rhizoma Polygonati（100g）was subjected to covered moistening with 10％yellow wine and high－pressure steaming at 120℃for 60min and was then taken out，cut into 3mm thick slices，and dried.Conclusion The optimized pressurized wine－steaming process is feasible and reliable and provides guidance for the industrial production of Rhizoma Polygonati decoction pieces.

Rhizoma Polygonati；polysaccharides；pressurized wine－steaming；orthogonal test

R283

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.01.025

2013－07－26）

國(guó)際科技合作計(jì)劃項(xiàng)目（2011DFA31950）

張婕（1987－），女，碩士研究生

金傳山，jcs4＠sohu.com