紅花注射液致敏反應(yīng)的研究現(xiàn)狀及展望

李建平，楊國(guó)珍(綜述)，康 永，程玉釧(審校)

(山西省中醫(yī)藥研究院中藥方劑研究所，太原 030012)

紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。紅花注射液是由紅花經(jīng)提取精制而成的黃紅色至紅棕色的滅菌水溶液，具有活血化瘀、消腫止痛等作用，廣泛用于治療冠心病、心絞痛、高血脂癥[1-2]及急性腦梗死[3]、各種頸椎病[4-5]、原發(fā)性痛經(jīng)[6-7]等。然而,隨著臨床用途的不斷擴(kuò)大，紅花注射液的不良反應(yīng)也日趨增多，有些反應(yīng)還較為嚴(yán)重[8]。經(jīng)過(guò)查閱文獻(xiàn)，歸納總結(jié)紅花注射液過(guò)敏反應(yīng)的研究進(jìn)展，分析存在的問(wèn)題并提出可借鑒的過(guò)敏原相關(guān)研究方法及技術(shù)。該文就以下兩個(gè)方面來(lái)闡述紅花注射液致敏反應(yīng)的研究現(xiàn)狀。

1 紅花注射液過(guò)敏反應(yīng)臨床報(bào)道及病案分析

1.1臨床報(bào)道 關(guān)于紅花注射液過(guò)敏反應(yīng)的臨床報(bào)道很多，其過(guò)敏癥狀輕者如發(fā)熱[9]、皮疹[10-11]、過(guò)敏性寒戰(zhàn)[12]等，重者如急性哮喘[13]、過(guò)敏性休克[14]等。目前，初步推斷引起過(guò)敏反應(yīng)的可能原因有：①患者的特殊體質(zhì)容易對(duì)紅花注射液產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)；②紅花注射液作為中藥注射劑，化學(xué)成分復(fù)雜，含有的大分子物質(zhì)可作為抗原引起變態(tài)反應(yīng)；③紅花注射液在生產(chǎn)過(guò)程中未除盡的雜質(zhì)、微粒、內(nèi)毒素等致敏物質(zhì)或是在生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存等過(guò)程中成分改變或受到污染引起過(guò)敏反應(yīng)；④紅花黃色素作為紅花注射液的有效成分之一，可能也是引起過(guò)敏反應(yīng)的一個(gè)重要原因，值得關(guān)注[11,14-18]。

1.2病案分析 李茵等[19]從患者的性別、年齡、原患疾病、不良反應(yīng)時(shí)間等方面進(jìn)行分析，綜合判斷47例患者應(yīng)用紅花注射液后發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的原因。結(jié)果表明，中老年患者使用紅花注射液易發(fā)生不良反應(yīng)；原患疾病可能與紅花注射液致敏有關(guān)。程鵬等[20]對(duì)51例紅花注射液不良反應(yīng)文獻(xiàn)進(jìn)行分析并指出，紅花注射液超劑量使用和不恰當(dāng)?shù)呐湮闀?huì)導(dǎo)致不良反應(yīng)；紅花注射液中未除盡的雜質(zhì)經(jīng)靜脈進(jìn)入人體后可作為半抗原與血漿蛋白的氨基結(jié)合成更大分子的復(fù)合物，引起變態(tài)反應(yīng)。李世蔭等[21]認(rèn)為中藥中的大分子物質(zhì)(蛋白、多肽、多糖等)同時(shí)具有免疫原性和反應(yīng)原性，能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，使機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，最終導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。曾聰彥等[8]對(duì)34例不良反應(yīng)病例進(jìn)行分析得出，紅花注射液中含有紅花黃色素和紅花苷等，也可作為抗原或半抗原引起變態(tài)反應(yīng)，即患者使用紅花后，在體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體，當(dāng)靜脈注入紅花注射液時(shí)，作為致敏原激活了細(xì)胞內(nèi)的酶，釋放出組胺樣的活性物質(zhì)引起變態(tài)反應(yīng)。

2 紅花注射液致敏反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)性研究

張穎等[22]將紅花注射液進(jìn)行分離純化后，通過(guò)建立過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物模型，用間接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)，結(jié)果表明脂溶性的成分導(dǎo)致發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的強(qiáng)度最大，并指出紅花注射液所含的聚山梨酯80能夠引起過(guò)敏反應(yīng)。張潞等[23]通過(guò)全身主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)和被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)，證明紅花注射液具有致敏性且為Ⅰ型超敏反應(yīng)，但是紅花注射液的致敏性物質(zhì)是蛋白類(lèi)大分子還是其他類(lèi)型物質(zhì)，如多糖、色素或其他，仍需要進(jìn)一步研究。

3 過(guò)敏物質(zhì)研究方法和技術(shù)

3.1中藥注射液過(guò)敏物質(zhì) 紅花注射液過(guò)敏物質(zhì)的試驗(yàn)方法和技術(shù)尚未成熟，可參考其他中藥注射液的過(guò)敏物質(zhì)指認(rèn)方法，如王新彤[24]采用考馬斯亮藍(lán)法和三氯乙酸沉淀結(jié)合雙縮脲法對(duì)清開(kāi)靈注射液中大分子蛋白的含量進(jìn)行研究，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，SDS-PAGE)與分子排阻色譜法分析其中的大分子蛋白，獲知其相對(duì)分子質(zhì)量范圍為3×103～17×103，將SDS-PAGE中獲得的蛋白膠點(diǎn)進(jìn)行酶解，然后進(jìn)行質(zhì)譜分析，得到一級(jí)肽段信息；曾姣麗等[25]采用酶聯(lián)免疫雙抗夾心和免疫指紋圖譜法對(duì)雙黃連注射劑中黃芩苷的致敏性進(jìn)行研究，最終確定黃芩苷為其致敏原；胡昌勤等[26]利用超濾等方法從含丹參的中藥注射液中提取大分子抗原活性雜質(zhì)，采用豚鼠主動(dòng)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)和被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)考證該類(lèi)雜質(zhì)的致敏性，并建立ELISA法用于含丹參的中藥注射劑中殘留抗原的檢測(cè)；屈會(huì)化等[27]提出了一種新的研究中藥注射液致敏物質(zhì)的思路，利用免疫芯片技術(shù)從中藥注射劑多組分體系中鑒定、判斷及分離尋找小分子半抗原或致敏成分。

3.2食物中過(guò)敏物質(zhì) 食品如小麥、番茄、花粉、牛奶、海產(chǎn)品等可引起過(guò)敏反應(yīng)，可借鑒其致敏物質(zhì)的分析，確認(rèn)方法。Sotkovsky等[28]利用超濾、等電聚焦電泳和層析法分離、純化小麥面粉中水/鹽溶性提取物，用對(duì)面粉過(guò)敏的患者的混合血清進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)定位致敏蛋白，通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定得到27種可能的面粉致敏性蛋白，其中7種是新發(fā)現(xiàn)物質(zhì)。López-Matas等[29]對(duì)6種番茄中致敏原進(jìn)行指認(rèn)并測(cè)定各致敏物質(zhì)的含量，利用液質(zhì)聯(lián)用/質(zhì)譜鑒定番茄提取物中的Lyc e 3和滲調(diào)蛋白樣蛋白，免疫印跡法定位多聚半乳糖醛酸酶2A，直接ELISA法評(píng)價(jià)番茄提取物刺激機(jī)體所產(chǎn)生的特異性IgE，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Lyc e 3在6種番茄中均存在，且含量最高，滲調(diào)蛋白樣蛋白和多聚半乳糖醛酸酶2A也是較為常見(jiàn)的番茄過(guò)敏物質(zhì)。孟光等[30]對(duì)椰子花粉過(guò)敏原進(jìn)行研究，采用離子交換層析對(duì)過(guò)敏原進(jìn)行初步分離純化，用SDS-PAGE進(jìn)一步分離過(guò)敏原并測(cè)定其分子量，免疫印跡法鑒定和檢測(cè)變應(yīng)原，結(jié)果顯示，粗提液有10個(gè)蛋白條帶，其中相對(duì)分子質(zhì)量為50×103，16×103，14×103的蛋白為主要變應(yīng)原。常艷敏等[31]研究牛奶中的過(guò)敏物質(zhì)，利用等電點(diǎn)沉淀、凝膠層析和分子篩等技術(shù)純化牛奶中過(guò)敏組分，SDS-PAGE鑒定蛋白純度，采用雙抗夾心-ELISA鑒定免疫活性，得知牛奶中的β乳球蛋白和高分子量蛋白質(zhì)為主要過(guò)敏原。張軼群[32]采用改良硫酸銨沉淀法(濃度不同，pH相同的硫酸銨溶液)，結(jié)合電泳切膠回收法，對(duì)海產(chǎn)品過(guò)敏原進(jìn)行純化。另外，對(duì)傳統(tǒng)的免疫芯片進(jìn)行修飾并制備三維芯片來(lái)檢測(cè)海產(chǎn)品中的過(guò)敏原。

4 小結(jié)與展望

紅花作為活血化瘀之要藥，其注射液形式經(jīng)靜脈給藥后藥效發(fā)揮迅速，在心腦血管疾病的臨床預(yù)防和治療中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，然而紅花注射液的過(guò)敏反應(yīng)日益嚴(yán)重。根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局最新公布的不良反應(yīng)通報(bào)[33]，僅2012年，以紅花為主要成分的紅花注射液，在國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)中的病例報(bào)告數(shù)共計(jì)3306例，嚴(yán)重病例報(bào)告154例?；谌绱藝?yán)峻的不良反應(yīng)現(xiàn)狀，僅僅通過(guò)臨床報(bào)道過(guò)敏病例和病案分析推斷致敏原可能的來(lái)源是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，必須從最基本的致敏物質(zhì)基礎(chǔ)研究開(kāi)始，但目前針對(duì)紅花注射液過(guò)敏物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)性研究所查到的文獻(xiàn)很少，其致敏原的分析及確認(rèn)工作亟待開(kāi)展。

國(guó)內(nèi)外研究過(guò)敏物質(zhì)研究方法和手段已較為成熟，應(yīng)參照已有技術(shù)并結(jié)合紅花注射液自身成分的特點(diǎn)進(jìn)行探索，逐步建立并完善紅花注射液過(guò)敏原的分離、純化、檢測(cè)的體系，明確其過(guò)敏物質(zhì)基礎(chǔ)及致敏含量限度等信息，為生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制提供必要的研究基礎(chǔ)，為使用單位提供更安全的紅花注射液應(yīng)用規(guī)范。

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