HPLC法測(cè)定鼻炎糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

冉亞?wèn)|，原歡歡，官 柳

（太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶408000）

HPLC法測(cè)定鼻炎糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

冉亞?wèn)|，原歡歡，官 柳

（太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶408000）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定鼻炎糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的測(cè)定方法。方法采用Agilent Zorbax SB－C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），乙腈－0.2%磷酸溶液（含0.2%三乙胺）（2∶98）為流動(dòng)相，流速：1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)206 nm，柱溫：25℃。結(jié)果鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.124～1.86μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性（r＝0.999 9），平均回收率為99.99%，RSD＝1.24%（n＝6）；鹽酸偽麻黃堿進(jìn)樣量在0.103 8～1.557μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性（r＝0.999 9），平均回收率為99.33%，RSD＝1.93%（n＝6）。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于鼻炎糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的測(cè)定。

鼻炎糖漿；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；高效液相色譜法

鼻炎糖漿是由黃芩、麻黃等七味中藥組方而成，具有清熱解毒，消腫通竅的功效。臨床用于急性鼻炎。方中麻黃具有利水消腫，發(fā)汗散寒之功效，所含鹽酸偽麻黃堿能減輕過(guò)敏性鼻炎、鼻炎及鼻竇炎引起的鼻充血癥狀，現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)［1］未對(duì)麻黃進(jìn)行質(zhì)量控制。為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，參照《中國(guó)藥典》2010

年版麻黃標(biāo)準(zhǔn)，以鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿為含量測(cè)定指標(biāo)，建立了以高效液相色譜法測(cè)定鼻炎糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200 series高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Mettler Toledo 240電子分析天平（梅特勒托利多公司）；明澈－D24UV純水系統(tǒng)（默克公司）。

1.2 試劑與試藥 鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：171241－201007，供含量測(cè)定用，含量99.7%）；鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：171237－200807，供含量測(cè)定用，含量99.9%）；鼻炎糖漿（市售品，批號(hào)：1403010、1403011、1403012）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.2%磷酸溶液（含0.2%三乙胺）（2∶98），柱溫：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：206 nm，流速：1.0 mL·min－1，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1 mL含50μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品適量，混勻，取2.0 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形量瓶中，加10%氫氧化鈉溶液10 mL，混勻，震蕩10 min，加乙醚振搖提取4次（20、20、20、20 mL），合并乙醚液，加1%氫化化鈉溶液（20 mL）洗滌，棄去洗液，乙醚液加入20 mL鹽酸乙醇溶液（1→20），混勻，水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇少量多次溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取本品陰性樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備。

2.3 專屬性試驗(yàn) 陰性對(duì)照樣品對(duì)供試品溶液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿測(cè)定無(wú)干擾，供試品溶液中兩主色譜峰對(duì)稱性好，與其他峰基線分離（見圖1）。

2.4 線性關(guān)系 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇配制成每1 mL各含124、103.8μg的溶液，精密吸取對(duì)照品溶液1、3、5、7、10、15μL，注入色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)X，相應(yīng)面積為縱坐標(biāo)Y，按照最小二乘法原理擬合，得回歸方程：鹽酸麻黃堿 Y＝2 202.2X－0.345 7，r＝0.999 9；鹽酸偽麻黃堿Y＝2 113.7X－0.543 2，r＝0.999 9。結(jié)果表明：鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分別在0.124～1.86μg和0.103 8～1.557μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積平均值分別為1 365.4和1 097.6，峰面積的RSD分別為0.52%和0.68%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)：1403010）適量，按照“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液，平行6份，再按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，鹽酸麻黃堿平均含量為0.311 mg·g－1，RSD為1.25%；鹽酸偽麻黃堿平均含量為0.104 mg·g－1，RSD為1.75%，表明重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一供試品溶液，于0、2、4、8、12、16、20、24 h，分別測(cè)定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積，平均峰面積分別為1 543.1和 567.3，RSD分別為0.89%和1.35%，表明供試品在24 h時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 對(duì)照品（A、B）、供試品（C）、陰性對(duì)照（D）色譜圖

2.8 回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品（批號(hào)：1403010，鹽酸麻黃堿含量0.311 mg·g－1，鹽酸偽麻黃堿含量0.104 mg·g－1）適量，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中［已加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液（124 μg·mL－1）2.5 mL，鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品溶液（103.8μg·mL－1）1.0 mL，用熱氮?dú)獯蹈?，備用］，按照?.2.2”項(xiàng)下制備方法制備樣品，平行6份，按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量，計(jì)算回收率。鹽酸麻黃堿的平均回收率為99.99%，RSD為1.24%；鹽酸偽麻黃堿的平均回收率為99.33%，RSD為1.93%。結(jié)果表明回收率良好，見表1。

2.9 樣品測(cè)定 取樣品3批（批號(hào)：1403010、1403011、1403012），按照“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制備樣品，按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量，結(jié)果3批樣品中鹽酸麻黃堿含量分別為0.311、0.339、0.298 mg·g－1；鹽酸偽麻黃堿含量分別為0.104、0.108、0.097 mg·g－1。

3 討論

3.1 供試液制備方法 有文獻(xiàn)報(bào)道［2～4］采用氫氧化鈉或氨水溶液堿化樣品，乙醚或三氯甲烷萃取、最后加鹽酸溶液成鹽的方法制備樣品；《中國(guó)藥典》中小兒肺熱咳喘口服液、小青龍合劑標(biāo)準(zhǔn)采用樣品通過(guò)大孔吸附樹脂D101柱，用醇液洗脫方法制備供試品；經(jīng)試驗(yàn)，采用樣品堿化、乙醚萃取、酸成鹽的制備方法適合本品。曾試驗(yàn)用三氯甲烷做萃取溶劑，經(jīng)比較，含量測(cè)定結(jié)果基本一致，但三氯甲烷毒性較大，污染環(huán)境，最后選用乙醚做萃取溶劑。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

3.2 流動(dòng)相選擇 有文獻(xiàn)報(bào)道采用以下流動(dòng)相檢測(cè)含麻黃樣品：乙腈－0.2%磷酸溶液（3∶97）［5］、乙腈－0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（4∶96）［6］、甲醇－0.02 mol·L－1磷酸二氫鈉溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調(diào)pH值2.5）（9∶91）［7］、乙腈－磷酸鈉緩沖液（含17.5mmol·L－1十二烷基硫酸鈉的0.07 mol·L－1磷酸鈉溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH 6.0）（30∶70）［8］；經(jīng)摸索調(diào)整，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈－0.20%磷酸溶液（含0.2%三乙胺）（2∶98），柱溫為25℃時(shí)分離效果和峰形最優(yōu)。

3.3 色譜柱選擇 《中國(guó)藥典》中麻黃采用以極性乙醚鏈接苯基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，但藥典制劑均采用C18色譜柱，本方法也采用C18色譜柱。

3.4 檢測(cè)波長(zhǎng) 在選定條件下，分別測(cè)定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品及供試品，在DAD檢測(cè)器下查看對(duì)應(yīng)色譜峰光譜圖，發(fā)現(xiàn)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿均在206 nm左右有最大吸收，且陰性對(duì)照樣品無(wú)干擾，因此選定206 nm為樣品測(cè)定波長(zhǎng)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：376.

［2］王戈，趙培敬.HPLC法測(cè)定宣清止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量［J］.齊魯藥事，2012，31（10）：577－578.

［3］解玲，范秀玉.寧嗽露中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定［J］.齊魯藥事，2011，30（4）：213－215.

［4］景金柱，余衛(wèi)兵，畢雪艷，等.HPLC測(cè)定麻杏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量［J］.齊魯藥事，2005，24（7）：409－410.

［5］太成梅，那微，趙曉霞，等.HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（5）：380－383.

［6］王啟硯，陳潔.HPLC法測(cè)定麻黃止嗽丸中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量［J］.中國(guó)藥師，2013，16（10）：1512－1513.

［7］覃曉媚，韋薇，黃妹春，等.HPLC法測(cè)定小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量［J］.廣西科學(xué)，2012，19（3）：244－246.

［8］張妤琳，李玉萍.HPLC同時(shí)測(cè)定止喘靈口服液中氫溴酸東莨菪堿、硫酸阿托品、鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38（19）：3291－3294.

Determ ination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Biyan Syrup by HPLC

RAN Ya-dong，YUAN Huan-huan，GUAN Liu
（Taiji Group Chongqing Fuling Pharmaceutical Co.，Ltd.，Chongqing 408000，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Biyan Syrup.M ethodsThe Agilent Zorbax SB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）column was used.Themobile phase consisted of acetonitrile－0.20%phosphoric acid（containing 0.2%triethylamine）（2∶98）with the flow rate of1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 206 nm and the column temperature was 25℃.ResultsThe linear range of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloridewas0.124～1.86μg（r＝0.999 9）and 0.103 8～1.557μg（r＝0.999 9）with the average recovery of 99.99%（RSD＝1.24%，n＝6）and 99.33%（RSD＝1.93%，n＝6），respectively.ConclusionThemethod was accurate and reproducible.It can be used for the determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Biyan Syrup.

Biyan Syrup；Ephedrine hydrochloride；Pseudoephedrine hydrochloride；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）12－0699－003

冉亞?wèn)|，男，研究方向：新藥開發(fā)和藥品質(zhì)量，E－mail：ranyadong＠163.com