稻米中黃曲霉毒素和赭曲霉毒素A的研究進(jìn)展

賴先文，張 荷，劉承蘭

（天然農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣東廣州 510642）

稻米中黃曲霉毒素和赭曲霉毒素A的研究進(jìn)展

賴先文，張 荷，劉承蘭*

（天然農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣東廣州 510642）

真菌毒素是由某些絲狀真菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，在自然界中普遍存在，嚴(yán)重威脅人畜健康。綜述了黃曲霉毒素和赭曲霉毒素A的理化性質(zhì)及危害，在稻米中的污染現(xiàn)狀、限量標(biāo)準(zhǔn)及分析方法等方面進(jìn)行闡述，希望能給真菌毒素的研究提供一些參考。

真菌毒素，黃曲霉毒素，赭曲霉毒素A，稻米

真菌毒素（Mycotoxin）是由產(chǎn)毒真菌在適宜的環(huán)境條件下產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，廣泛分布于糧食、食品、飼料等中，具有急、慢性毒性和致畸、致癌、致突變等作用，嚴(yán)重威脅人畜健康[1-2]。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）估算，全球每年約有25%的農(nóng)產(chǎn)品受到真菌毒素的污染，2%的農(nóng)產(chǎn)品因污染嚴(yán)重而失去營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，造成數(shù)百億美元的經(jīng)濟(jì)損失[3]。在已報(bào)道的眾多真菌毒素如黃曲霉毒素（Afltoxins，AFT）、赭曲霉毒素（Ochratoxin A，OTA）、伏馬菌素（Fumonisins，F(xiàn)Bs）、玉 米 赤 霉 烯 酮（Zearalenone，ZON）和 脫 氧 雪腐 鐮 刀 菌 烯 醇（Deoxynivalenol，DON）和 桔 青 霉 素（Citrinin，CIT）等中[4]，黃曲霉毒素和赭曲霉毒素由于毒性強(qiáng)且在農(nóng)作物中污染普遍[2，5-6]，從而受到了各國(guó)政府和科研工作者的高度重視。

1 真菌毒素的理化性質(zhì)及危害

1.1 黃曲霉毒素

黃 曲 霉 毒 素（AFT）是 一 類 主 要 由 黃 曲 霉（Asperillus flavus）和寄生曲霉（A.parasiticus）等產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。目前已報(bào)道的黃曲霉毒素有AFB1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇等20多種化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的化合物，其中黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2是糧食中黃曲霉毒素的主要存在形式[7-8]。黃曲霉毒素的基本結(jié)構(gòu)由一個(gè)二呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)聪愣顾兀┙M成，前者為其毒性結(jié)構(gòu)，后者可能與其致 癌 作 用 有 關(guān)[9]；其 相 對(duì) 分 子 量 為 312~346，難 溶 于水，易溶于甲醇、乙腈、丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑，在紫外光照射下，黃曲霉毒素B1、B2發(fā)藍(lán)色熒光，黃曲霉毒素G1、G2發(fā)綠色熒光。黃曲霉毒素在中性及酸性溶液中較為穩(wěn)定，當(dāng)pH為9~10發(fā)生可逆分解；耐高溫，普通的加熱處理很難破壞其結(jié)構(gòu)。黃曲霉毒素是一類毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì)，可使人及動(dòng)物肝臟組織造成損傷，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝癌甚至死亡；同時(shí)還能造成胃腸功能障礙、生殖能力下降和出血性貧血等不良影響[10]。其中，以黃曲霉毒素B1（AFB1）的毒性和致癌性最強(qiáng)，1993年被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）劃定為I類致癌物[11]。

1.2 赭曲霉毒素

赭曲霉毒素是一類主要由赭曲霉（A.ochraceus）、疣 孢 青 霉（Penicillium verrucosum）和 炭 黑 曲 霉（A.carbonarius）等產(chǎn)生的有毒代謝物，包括A、B、C等7種結(jié)構(gòu)類似的化合物，其中以赭曲霉毒素A（OTA）毒性最大、分布最廣[12]。赭曲霉毒素A是由異香豆素與β-苯丙氨酸結(jié)合的衍生物，相對(duì)分子質(zhì)量403.8，熔點(diǎn)169℃，純品為無色針狀晶體，微溶于水，易溶于極性溶劑和碳酸氫鈉溶液，在紫外光下呈綠色熒光，在苯-乙酸（99/1，v/v）溶液中最大吸收波長(zhǎng)為333nm。OTA對(duì)熱相對(duì)穩(wěn)定，一般的烹飪加工方法只能使其部分分解。OTA毒性作用的主要靶器官為腎臟，可引起多種急慢性腎臟疾病，并被認(rèn)為與巴爾干地方性腎病有關(guān)；還具有肝毒性、神經(jīng)毒素、免疫毒性等，可導(dǎo)致胎兒畸形、流產(chǎn)甚至死亡，具有致畸、致癌作用[13-15]。1993年，世界衛(wèi)生組織（WHO）下的癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）將其劃為2B類致癌物（可能致癌物）[11]。

2 黃曲霉毒素和赭曲霉毒素在稻米中的污染現(xiàn)狀和限量標(biāo)準(zhǔn)

目前，黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A等真菌毒素污染已成為影響糧食質(zhì)量安全的主要因素之一，研究報(bào)道世界范圍內(nèi)的水稻、玉米、小麥、高粱等糧谷類作物都不同程度地受到了真菌毒素的污染[8，16-19]。全世界約一半以上人口以稻米作為主食，僅在亞洲，就有20億人從稻米及稻米產(chǎn)品中攝取60%~70%的熱量[20]，因此，稻米中真菌毒素的污染對(duì)世界各國(guó)的人畜健康都是一個(gè)嚴(yán)重的威脅。目前已報(bào)道在韓國(guó)、越南、印度、伊朗、巴基斯坦、尼日利亞、土耳其、瑞典、西班牙、墨西哥、摩洛哥、突尼斯和加拿大等國(guó)家的稻米中發(fā)現(xiàn)有黃曲霉毒素和赭曲霉素A等真菌毒素的污染[21-33]（見表1）。由此可見，稻米真菌毒素的污染已成為世界范圍內(nèi)一個(gè)非常嚴(yán)峻的問題。

2012/2013年，我國(guó)稻谷總產(chǎn)量2億t左右，按平均出米率73%計(jì)算，折合稻米產(chǎn)量約為1.46億t，約占全國(guó)三大糧食作物總產(chǎn)量的40%和世界稻谷總產(chǎn)量的30%[34]。而且，稻米是我國(guó)人民的主食，食用人口占總?cè)丝诘?0%以上。據(jù)有關(guān)部門統(tǒng)計(jì)，我國(guó)糧食總產(chǎn)量的70%~80%都儲(chǔ)藏在農(nóng)村，由于儲(chǔ)糧設(shè)施簡(jiǎn)陋、儲(chǔ)藏條件差、儲(chǔ)糧技術(shù)落后、缺乏科學(xué)管理手段等原因，極易受到真菌及真菌毒素的污染。2006年，Liu等[35]對(duì)遼寧省儲(chǔ)藏1~14年的16個(gè)全谷和37個(gè)糙米樣品進(jìn)行了黃曲霉毒素的檢測(cè)，檢出陽性樣品分別為16個(gè)和36個(gè)，平均含量分別為3.87μg/kg和0.88μg/kg；2008年，楊家玲[36]對(duì)我國(guó)10個(gè)城市的91個(gè)大米制品中赭曲霉毒素A進(jìn)行了調(diào)查，平均含量為1.938μg/kg；2011年，滕南雁等[37]對(duì)來自廣西地區(qū)的34批大米中的黃曲霉毒素進(jìn)行了檢測(cè)，其中3批大米檢出了黃曲霉毒素B1，含量均為1μg/kg。

隨著人們對(duì)食品安全問題的日益重視，真菌毒素也受到了前所未有的廣泛關(guān)注，先后有100多個(gè)國(guó)家、地區(qū)和組織制訂了各種真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)（見表2），以保護(hù)農(nóng)牧業(yè)的健康發(fā)展和人類身體健康。

表1 部分國(guó)家大米中黃曲霉毒素和赭曲霉毒素A的污染情況Table 1 Contamination situation of aflatoxins and ochratoxin A in rice in some countries

表2 部分國(guó)家稻米中黃曲霉毒素和赭曲霉毒素A的最高允許限量Table 2 The maximum levels of the aflatoxins and ochratoxin A in rice in some countries

3 黃曲霉毒素和赭曲霉毒素的分析方法

大多數(shù)真菌毒素的化學(xué)性質(zhì)都很穩(wěn)定，即便是烹飪加工等過程也不容易破壞其活性，而生產(chǎn)實(shí)踐中又很難避免真菌毒素的產(chǎn)生。另外，隨著世界貿(mào)易自由化、經(jīng)濟(jì)全球化的不斷加深，真菌毒素限量已成為限制農(nóng)產(chǎn)品出口的技術(shù)性貿(mào)易壁壘之一。因此，建立簡(jiǎn)便、快速、靈敏的分析方法對(duì)掌握稻米中真菌毒素的污染程度和有效降低其危害具有十分重要的意義。

3.1 黃曲霉毒素和赭曲霉毒素的前處理方法

充分提取是分析檢測(cè)的前提，對(duì)于稻米等固體基質(zhì)中真菌毒素的提取，提取溶劑一般采用甲醇、乙腈和水的混合溶液；提取方式主要有振蕩、超聲和高速均質(zhì)等。除了酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)凈化的要求不高外，大多數(shù)用于檢測(cè)真菌毒素的方法必須進(jìn)行恰當(dāng)?shù)膬艋幚韀38]。前處理非常耗時(shí)，但是，這些步驟至關(guān)重要，直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

3.1.1 液液萃取 液液萃?。↙iquid-liquid extraction，LLE）是基于相似相溶原理，使分析物在兩種互不相溶的溶劑中達(dá)到平衡，經(jīng)過反復(fù)多次萃取達(dá)到分離純化。其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、方法穩(wěn)定、成本低，回收率也可達(dá)到要求。常規(guī)的液液萃取具有有機(jī)溶劑使用量大、對(duì)環(huán)境不友好和費(fèi)工費(fèi)時(shí)等缺點(diǎn)，已經(jīng)不能適應(yīng)“綠色、快速”萃取技術(shù)的要求。目前，相繼出現(xiàn)了液相微萃取、液膜萃取和逆流色譜等綠色分離技術(shù)[39]。分散液液微萃取是2006年Rezaee等[40]首次提出的用于萃取水樣中有機(jī)物的微型液-液萃取方法，具有操作簡(jiǎn)便，富集倍數(shù)高，萃取效果好等優(yōu)點(diǎn)，也被廣泛應(yīng)用于各類樣品中真菌毒素的提取，如葡萄酒中的OTA[41]、蘋果 汁 中 的 展青 霉 素[42]、啤 酒 中 的 玉 米 赤 霉烯酮[43]和谷物中的黃曲霉毒素[44]等。

3.1.2 固相萃取 固相萃?。⊿olid phase extraction，SPE）是在液固萃取和柱液相色譜技術(shù)基礎(chǔ)上逐漸發(fā)展起來的一種用途廣泛的樣品前處理技術(shù)。與LLE相比，SPE具有回收率和富集倍數(shù)高、有機(jī)溶劑用量少、無相分離操作、能處理微量樣品和易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，是目前最常用的樣品預(yù)處理方法之一。隨著色譜分離技術(shù)的發(fā)展，樣品預(yù)處理領(lǐng)域也得到了顯著發(fā)展，先后出現(xiàn)了全自動(dòng)固相萃取儀、全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)、固相微萃取以及基質(zhì)分散固相萃取等新技術(shù)和新方法[45]。李堯等[46]以C18為填料，建立了基質(zhì)分散固相萃取凈化-液相色譜檢測(cè)谷物中赭曲霉毒素A的分析方法，結(jié)果表明，在優(yōu)化的色譜條件下，可以完全分離谷物中的赭曲霉毒素A，方法回收率為80.0%～93.65%，最低檢測(cè)限為0.5μg/kg，表明該方法能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)谷物中赭曲霉毒素A的含量。

3.1.3 免 疫 親 和 柱 凈 化 免 疫 親 和 柱 凈 化 法（Immunoaffinity column，IAC）結(jié)合了單克隆抗體技術(shù)和親和層析技術(shù)，利用抗原-抗體免疫反應(yīng)的原理，使用單克隆抗體選擇性的吸附提取液中的真菌毒素，以達(dá)到分離凈化的目的。該方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、溶劑消耗少和凈化效果好等特點(diǎn)，是很多官方機(jī)構(gòu)檢測(cè)真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)凈化方法[47-49]。

3.1.4 多功能柱凈化 多功能凈化柱（Multifunctional purifying column，MFC）是 一 類 特 殊 的 SPE 柱 ，以 極性、非極性及離子交換等幾類基團(tuán)組成填充劑，選擇性吸附提取液中的脂類、蛋白類、糖類等各類雜質(zhì)，而待測(cè)的真菌毒素不被吸附直接通過。與傳統(tǒng)的SPE相比，無需經(jīng)過耗時(shí)的活化、淋洗和洗脫過程，可直接上樣，一次性完成凈化。此方法操作簡(jiǎn)單、凈化效果較好、適用于多殘留分析。缺點(diǎn)是價(jià)格不便宜，對(duì)赭曲霉毒素A的回收率偏低[50-51]。

3.2 黃曲霉毒素和赭曲霉毒素的檢測(cè)方法

3.2.1 薄 層 色 譜 法 薄 層 色 譜 法（ Thin layer chromatography，TLC）是一種傳統(tǒng)的真菌毒素分析方法，具有經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單、靈敏高效等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于高濃度真菌毒素的定量和半定量分析。國(guó)外已經(jīng)有許多關(guān)于薄層色譜法分析真菌毒素的報(bào)道，但結(jié)果表明TLC法靈敏度較低，操作復(fù)雜，分析結(jié)果的可重復(fù)性和再現(xiàn)性差[52-53]。因此，近年來國(guó)際上采用TLC方法檢測(cè)新真菌毒素的報(bào)道已較少，表明TLC在檢測(cè)真菌毒素領(lǐng)域的發(fā)展受到了一定的限制。不過，隨著高效薄層色譜法（HPTLC）及薄層掃描儀的發(fā)展和應(yīng)用，提高了TLC的分離效率和檢測(cè)精確度，進(jìn)而拓寬了TLC技術(shù)在真菌毒素痕量分析領(lǐng)域中的應(yīng)用。Gao等[54]采用HPTLC測(cè)定了谷物中的黃曲霉毒素B1，檢出限和定量限分別為0.22ng和0.66ng，以空白樣品為基底進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)（添加濃度分別為5、10和15ng/g），平均回收率達(dá)到81.0%~90.0%。

3.2.2 高 效 液 相 色 譜 法 高 效 液 相 色 譜 法（High performance liquid chromatography，HPLC）是 分 析 真菌毒素最常用的定量方法，在新的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)體系中已經(jīng)處于絕對(duì)的主導(dǎo)地位，作為定量的檢測(cè)方法，在國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室和檢測(cè)機(jī)構(gòu)得到普遍的使用[55]。對(duì)于黃曲霉毒素和赭曲霉毒素A的檢測(cè)，主要采用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，結(jié)合流動(dòng)相、色譜柱、柱溫和流速等因素，優(yōu)化色譜條件，從而有效分離各種真菌毒素。由于黃曲霉毒素的熒光特性受溶劑影響大，在極性流動(dòng)相中，不飽和的AFB1和AFG1極易發(fā)生熒光猝滅現(xiàn)象，所以必須在柱前或柱后進(jìn)行衍生化來增強(qiáng)熒光。目前常用的衍生化方法有柱前三氟乙酸衍生化法、柱后碘衍生化法、柱后溴衍生化法和柱后光化學(xué)衍生法[56-57]。

3.2.3 高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用 高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用方法（High performance liquid chromatography/ mass spectrometry，LC/MS）適用于大多數(shù)真菌毒素的分析，可以同時(shí)提供分析物的保留時(shí)間和分子結(jié)構(gòu)信息，具有雜質(zhì)影響小，靈敏度高，適合多組分分析等優(yōu)點(diǎn)，且可以同時(shí)進(jìn)行定量分析與定性確證，是目前認(rèn)可的通用檢測(cè)方法。Soleimany等[58]利用LC-MS/ MS方法同時(shí)測(cè)定谷物中的AFT、OTA和FBs等11種真菌毒素，樣品用有機(jī)溶劑提取后，經(jīng)簡(jiǎn)單的離心處理后進(jìn)行檢測(cè)，檢出限在0.01~20μg/kg內(nèi)，回收率在76.8%~108.4%之間。

3.2.4 酶聯(lián)免疫吸附法 酶聯(lián)免疫吸附法（Enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）是1971年由荷蘭學(xué)者Van Weeman和Schurrs，瑞典學(xué)者Engvall和Perlman同時(shí)提出的將免疫技術(shù)用于檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法[59]。目前，ELISA法已成為檢測(cè)真菌毒素的重要方法，它具有靈敏、操作簡(jiǎn)便、樣品前處理無需凈化（或只需簡(jiǎn)單凈化）、樣品處理量大等優(yōu)點(diǎn)，已建立多種分析各類農(nóng)產(chǎn)品和食品中真菌毒素的ELISA方法。同時(shí)，已有商品化的檢測(cè)糧油食品中多種真菌毒素（如AFT、OTA、伏馬菌素、T-2毒素、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮等）的ELISA試劑盒。不過，ELISA相比于其他方法，檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性和酶穩(wěn)定性差，試劑壽命短，且存在交叉反應(yīng)造成的假陽性問題，因此還需要結(jié)合其他方法進(jìn)行驗(yàn)證。目前，ELISA常用于多種毒素的定性篩選檢測(cè)[60]。

3.2.5 時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù) 時(shí)間分辨熒光免疫技 術(shù)（Time-resolved fluoreimmuoassay，TRFIA）是 20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種非放射標(biāo)記分析技術(shù)[61]。TRFIA是用具有特殊熒光的鑭系離子與螯合劑結(jié)合作為示蹤物標(biāo)記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體等，在一定的反應(yīng)體系（抗體抗原免疫反應(yīng)、核酸探針雜交反應(yīng)等）發(fā)生反應(yīng)后，用時(shí)間分辨熒光儀測(cè)定產(chǎn)物中的特異熒光強(qiáng)度，推測(cè)反應(yīng)體系中分析物的濃度，從而達(dá)到對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量分析的目的[62-63]。TRFIA技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，且測(cè)定范圍寬，試劑 壽 命 長(zhǎng) ，操 作 簡(jiǎn) 便 和 非 放 射 性 等 特 點(diǎn)[64]。 同 時(shí) ，TRFIA具有排除其他熒光干擾，從而克服ELISA的不足，且一次可測(cè)定多個(gè)樣品的優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已用于多種真菌毒素的檢測(cè)[65-66]。李靜等[65]建立了時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)測(cè)定油料餅粕中的黃曲霉素B1，回收率在70% ~120%之間。黃飚等[66]采用雙標(biāo)記時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)建立同時(shí)檢測(cè)AFB1和OTA的方法，AFB1的靈敏度達(dá)到了0.02μg/L，測(cè)量范圍為0.02~100μg/L，平均回收率為88.1%；OTA的靈敏度達(dá)到了0.05μg/L，測(cè)量范圍為0.05~50μg/L，平均回收率為89.9%。

3.2.6 多種真菌毒素的聯(lián)合檢測(cè) 當(dāng)前，單個(gè)真菌毒素的檢測(cè)技術(shù)已非常成熟，相關(guān)的研究報(bào)道也較多，但鑒于真菌毒素毒性強(qiáng)，且存在疊加、增效等互作效應(yīng)[67]，嚴(yán)重威脅人畜健康，各國(guó)分析工作者紛紛開始研究多種真菌毒素的聯(lián)合檢測(cè)。與單獨(dú)檢測(cè)相比，真菌毒素的聯(lián)合檢測(cè)方法顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)，不僅縮短了分析時(shí)間、提高了食品安全性，同時(shí)節(jié)約了大量的試劑和能源成本。目前關(guān)于AFT和OTA同時(shí)檢測(cè)的方法主要有HPLC和LC-MS/MS方法[68-69]；也有研究采用ELISA同時(shí)檢測(cè)AFT和OTA[70]。但是，由于不同種類的真菌毒素在理化性質(zhì)上存在差異，要同時(shí)使每種真菌毒素都達(dá)到最佳分析條件將非常困難，這也導(dǎo)致聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和平均回收率一般都低于單獨(dú)檢測(cè)。本課題組采用分散液液微萃取結(jié)合液相色譜分析，研究同時(shí)檢測(cè)大米中的黃曲霉毒素B1、B2和赭曲霉毒素A，取得了較滿意的結(jié)果[71]。

4 展望

真菌毒素是影響稻米質(zhì)量安全的主要因素之一，嚴(yán)重危害人類和動(dòng)物的健康。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，真菌毒素的作用機(jī)理越來越得到闡明；同時(shí)，一些新的真菌毒素也將被發(fā)現(xiàn)，并可能顯示出更大的危害。因此，真菌毒素的研究必將是21世紀(jì)的熱門課題之一。我國(guó)是水稻的最大生產(chǎn)國(guó)，稻米也是我國(guó)居民最基本、最重要的主糧，稻米質(zhì)量安全直接關(guān)系到全國(guó)人民的健康，涉及到整個(gè)國(guó)家的糧食安全和社會(huì)穩(wěn)定。鑒于世界范圍內(nèi)稻米真菌毒素的污染形勢(shì)，結(jié)合稻米在我國(guó)居民膳食結(jié)構(gòu)的特殊地位及我國(guó)研究現(xiàn)狀，開展我國(guó)稻米中真菌毒素污染水平和發(fā)展趨勢(shì)研究極為重要和緊迫。當(dāng)前，有關(guān)真菌毒素的檢測(cè)手段在快速發(fā)展，但主要是開展一種或幾種真菌毒素的檢測(cè)研究，同時(shí)測(cè)定多種真菌毒素的報(bào)道還較少。對(duì)于稻米中真菌毒素的污染控制，除了采取相應(yīng)的預(yù)防和脫毒措施外，對(duì)檢測(cè)技術(shù)也提出了更高的要求。因此，建立稻米中多種真菌毒素的同時(shí)快速檢測(cè)方法必將成為當(dāng)前糧食質(zhì)量安全領(lǐng)域的一個(gè)重要方面，只有改進(jìn)和完善檢測(cè)技術(shù)，才能確保人畜健康和農(nóng)產(chǎn)品安全。

[1] 陳寧慶. 實(shí)用生物毒素學(xué)[M]. 北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，2001：212-215.

[2]Sweeney MJ，Dobson AD.Mycotoxin production by Aspergillus，F(xiàn)usarium and Penicillium species[J].International of Journal of Food Microbiology，1998，43（3）：141-158.

[3]Schatzmayr G，Zehner F，Taubel M，et al.Microbiologicals for deactivating mycotoxins[J].Molecular Nutrition and Research ，2006，50（6）：543-551.

[4]Weidenboerner M.Encyclopedia of food mycotoxins[M]. Berlin：Springer-Verlag，2000：218-220.

[5]World Health Organization（WHO）.Aflatoxins.In ：Safety evaluation of certain food additives and contamination.WHO Food Additive Series No.40.Report of the 49th Meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives（JECFA）[C].Geneva（Switzerland）：WHO；1998，P.359-468.

[6]Juan C，Zinedine A，Idrissi L，et al.Ochratoxin A in rice on the Moroccan retail market[J].International Journal of Food Microbiology，2008（126）：83-85.

[7] 黃潔. 黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 化學(xué)分析計(jì)量，2013，22（5）：100-105.

[8]Tanaka K，Sago Y，Zheng YZ，et al.Mycotoxins in rice[J]. International Journal of Food Microbiology，2007，119：59-66.

[9]吳丹. 黃曲霉毒素在糧食和食品中的 危害 及防治[J]. 糧食加工，2007，32（3）：91-94.

[10]陳志飛，王元?jiǎng)P，嚴(yán)亞賢，等.真菌毒素的污染狀況及毒性研究[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2012，22（5）：71-76.

[11]IARC.Some naturally occurring substances：items and constituents heterocyclic aromatic amines and mycotoxins. Monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans [C].Lyon，F(xiàn)rance：International Agency for Research on Cancer，1993：56.

[12]Ringot D，Chango A，Schneider YJ，et al.Toxicokinetics and toxicodynamics of ochratoxin A，an update[J].Chem Biol Interact，2006，159（1）：18-46.

[13]Schlatter C，Studer RJ，Rasonyi T.Carcinogenicity and kinetic aspects of ochratoxin A[J].Food Additives and Contaminants，1996，13（1）：43-44.

[14]Holzhauser D，Delatour T，Marin-Kuan M，et al.Ochratoxin A：toxicity and carcinogenicity[J].Toxicology Letters，2003，65：144.

[15] 高翔，李梅，張立實(shí). 赭曲霉毒素A的毒性研究進(jìn)展[J]. 國(guó)外醫(yī)學(xué)（衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)），2005，32（1）：51-55.

[16]Dowling TS.Fumonisins and its toxic effects[J].Cereal Food World，1997（42）：13-15.

[17]Salem NM，Ahmad R.Mycotoxins in food from Jordan：Preliminary survey[J].Food Control，2010（21）：1099-1103.

[18]Li R，Wang X，Zhou T，et al.Occurrence of four mycotoxins in cereal and oil products in Yangtze Delta region of China and their food safety risks[J].Food Control，2014，35：117-122.

[19]Logrieco A，Mule G，Moretti A，et al.Toxigenic Fusarium species and mycotoxins associated with maize ear rot in Europe [J].European Journal of Plant Pathology，2002（108）：597-609.

[20] 國(guó)際稻米年秘書處. 聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織.國(guó)際稻米年度報(bào)告（摘登）[J]. 糧食與飼料工業(yè)，2004（10）：1-6.

[21]Park JW，Choi SY，Hwang HJ，et al.Fungal mycoflora and mycotoxins in Korean polished rice destined for humans[J]. International Journal of Food Microbiology，2005，103（3）：305-314.

[22]Nguyen MT，Tozlovanu M，Tran TL，et al.Occurrence of aflatoxin B1，citrinin and ochratoxin A in rice in five provinces of the central region of Vietnam[J].Food Chemistry，2007（105）：42-47.

[23]Reddy K R，Reddy C S，Muralidharan K.Detection of Aspergillus spp.and aflatoxin B1in rice in India[J].Food Microbiology，2009，26（1）：27-31.

[24]Mohammadi M，Mohebbi GH，Akbarzadeh S，et al.Detection of Aspergillus spp.and determination of the levels of aflatoxin B1in rice imported to Bushehr，Iran[J].African Journal of Biotechnology，2012，11（38）：9230-9234.

[25]Firdous S，Ejaz N，Aman T，et al.Occurrence of aflatoxins in export-quality Pakistani rice[J].Food Addititves and Contaminants Part B，2012，5（2）：121-125.

[26]Makun HA，Gbodi TA，Akanya OH，et al.Fungi and some mycotoxins contaminating rice（Oryza sativa） in Niger State，Nigeria[J].African Journal of Biotechnology，2007，6（2）：99-108.

[27]Aydin A，Aksu H，Gunsen U.Mycotoxin levels and incidence of mould in Turkish rice[J].Environmental Monitoring and Assessment，2011，178（1-4）：271-280.

[28]Fredlund E ，Thim AM ，Gidlund A ，et al.Moulds and mycotoxins in rice from the Swedish retail market[J].Food Additives and Contaminants Part A，2009，26（4）：527-533.

[29]Suarez-Bonnet E ，Carvajal M ，Mendez-Ramirez I，et al. Aflatoxin（B1，B2，G1，and G2） contamination in rice of Mexico and Spain ，from local sources or imported[J].Journal of Food Science，2013，78（11）：1822-1829.

[30]Gonzalez L，Juan C，Soriano JM，et al.Occurrence and daily intake of ochratoxin A of organic and non-organic rice and rice products[J].International Journal of Food Microbiology，2006，107（2）：223-227.

[31]Zinedine A，Soriano JM，Juan C，et al.Incidence of ochratoxin A in rice and dried fruits from Rabat and Sale area，Morocco[J]. Food Additives and Contaminants，2007，24（3）：285-291.

[32]Zaied C，Abid S，Zorgui L，et al.Natural occurrence of ochratoxin A in Tunisian cereals[J].Food Control，2009，20（3）：218-222.

[33]Bansal J，Pantazopoulos P，Tam J，et al.Surveys of rice sold in Canada for aflatoxins，ochratoxin A and fumonisins[J].Food Additives and Contaminants Part A，2011，28（6）：767-774.

[34] 劉笑然，劉娟.2012/2013年度中國(guó)稻米產(chǎn)業(yè)分析[J]. 中國(guó)糧食經(jīng)濟(jì)，2014（1）：35-38.

[35]Liu ZX，Gao JX，Yu JJ.Aflatoxins in stored maize and rice grains in Liaoning Province，China[J].Journal of Stored Products Research，2006，42（4）：468-479.

[36]楊家玲. 我國(guó)主要食品中赭曲霉毒素A調(diào)查與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2008.

[37]滕南雁，宋寧寧，劉濤.廣西地區(qū)市售食用植物油和大米中黃曲霉毒素B1的采樣調(diào)查和分析[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（6）：1531-1532.

[38]Bhatnagar D，Lillehoj EB，Arora DK.Mycotoxins in Ecological Systems[C].FS Chu ，Handbook of applied mycology：Marcel Dekker，New York，1992：87.

[39]楊春蕾，曹學(xué)麗.基于液-液萃取機(jī)理的新型環(huán)境樣品前處理方法研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（6）：242-248.

[40]Rezaee M，Assadi Y，Milani Hosseini M，et al.Determination of organic compounds in water using dispersive liquid-liquid microextraction[J].Journal of Chromatography A，2006，1116（1-2）：1-9.

[41]Arroyo-Manzanares N，Gamiz-Gracia L，Garcia-Campana AM.Determination of ochratoxin A in wines by capillary liquid chromatography with laser induced fluorescence detection using dispersive liquid-liquid microextraction[J].Food Chemistry，2012，135（2）：368-372.

[42]Victor-Ortega MD，Lara FJ，Garcia-Campana AM，et al. Evaluation of dispersive liquid-liquid microextraction for the determination ofpatulin in apple juices using micellar electrokinetic capillary chromatography[J].Food Control，2013，31（2）：353-358.

[43]Antep HM，Merdivan M.Development of new dispersive liquid-liquid microextraction technique for the identification of zearalenone in beer[J].Analytical Methods，2012，4（12）：4129-4134.

[44]Campone L，Piccinelli AL，Celano R，et al.Application of dispersive liquid-liquid microextraction for the determination of aflatoxins B1，B2，G1and G2in cereal products[J].Journal of Chromatography A，2011，1218（42）：7648-7654.

[45] 吳芳華. 固相萃取新技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 分析測(cè)試技術(shù)與儀器，2012，18（2）：114-120.

[46]李堯，張雪梅，黨獻(xiàn)民，等.基質(zhì)分散固相萃取凈化液相色譜檢測(cè)谷物中赭曲霉毒素A[J]. 糧食與飼料工業(yè)，2012（10）：57-60.

[47] 中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（SN/T 1664-2005）. 牛奶和奶粉中典曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的測(cè)定[S].2005.

[48]Scott PM，Trucksess.Application of immunoaffinity columns to mycotoxin analysis[J].Journal of AOAC International，1997，80（5）：941-949.

[49]Uchigashima M，Saigusa M，Yamashita H，et al.Development of a novel immunoaffinity column for aflatoxin analysis using an organic solvent-tloerantmonoclonalantibody[J].JournalofAgricultural and Food Chemistry，2009，57（19）：8728-8734.

[50]樊祥，褚慶華，周瑤，等.多功能柱凈化-高效液相色譜法檢測(cè)麥類中赭曲霉毒素A[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2007，26（S1）：284-286.

[51]鄭翠梅.高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定糧食中13種真菌毒素[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[52]Karuna R，Sashidhar RB.Use of ion-exchange chromatography coupled with TLC-laser scanning densitometry for the quantization of fumonisin B1[J].Talanta，1999，50（2）：381-389.

[53]Sokolovi M，Impraga B.Survey of trichothecene mycotoxins in grains and animal feed in Croatia by thin layer chromatography [J].Food Control，2006，17（9）：733-740.

[54]Gao HG，Chen L，Pan GS，et al.Development and Validation of an HPTLC Method for Determination of Aflatoxin B1[J].LC GC North America，2011（S）：71-74.

[55]王松雪，魯沙沙，張艷，等.國(guó)內(nèi)外真菌毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)制修訂現(xiàn)在與進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技，2011，32（3）：408-412.

[56]王陽，曹忠波.柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（2）：344-345.

[57]許梓榮，史瑩華，馮建蕾，等.光化學(xué)衍生法結(jié)合HPLC測(cè)定食品和飼料中的黃曲霉毒素[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2005，20（2）：71-75.

[58]Soleimany F，Jinap S，Abas F.Determination of mycotoxins in cereals by liquid chromatography tandem mass spectrometry [J].Food Chemistry，2012，130（4）：1055-1060.

[59]張占軍，王富花.酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 食品研究與開發(fā)，2011，32（1）：157-161.

[60] 張宇昊，楊琳，馬良. 真菌毒素同時(shí)檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2011，26（6）：123-128.

[61]Tan M，Song B，Wang G，et al.A new terbium（III） chelate as an efficient singlet oxygen fluorescence probe[J].Free Radical Biology and Medicine，2006，40（9）：1644-1653.

[62]Niu CG，Liu J，Qin PZ，et al.A novel bifunctional europium chelate applied in quantitative determination of human immunoglobin G using time-resolved fluorimmunoassay[J]. Analytical Biochemistry，2011，409（2）：244-248.

[63]Harma H，Soukka T，Lovgren T.Europium nanoparticles and time-resolved fluorescence for ultrasensitive detection of prostatespecific antigen[J].Clinical Chemistry，2001，47（3）：561-568.

[64]Zhang Z，Liu JF，Yao Y et al.A competitive dual-label time resolved fluoroimmunoassay for the simultaneous determination of chloramphenicol and ractopamine in swine tissue[J].Chinese Science Bulletin，2011，56（15）：1543-1547.

[65]李靜，李培武，張奇，等.時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙條在油料餅粕黃曲霉素B1檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2014，36（2）：256-262.

[66]黃飚，張鈺，馬智鴻，等.用雙標(biāo)記時(shí)間分辨熒光免疫法同時(shí)檢測(cè)黃曲霉素B1和赭曲霉毒素A[J]. 衛(wèi)生研究，2009，38（4）：385-388.

[67]易中華，吳興利.飼料中常見霉菌毒素間的毒性互作效應(yīng)[J]. 飼料研究，2009（1）：15-18.

[68]Tang YY，Lin HY，Chen YC，et al.Development of a quantitative multi-mycotoxin method in rice，maize，wheat and peanut using HPLC-MS/MS[J].Food Analytical Methods，2013（6）：727-736.

[69]Desmarchelier A，Oberson JM，Tella P，et al.Development and comparison of two multiresidue methods for the analysis of 17 mycotoxins in cereals by liquid chromatography elcetrospray ionization tandem mass spectrometry[J].Journal Agricultural and Food Chemistry，2010（58）：7510-7519.

[70]Debjani S，Debopam A，Dipika R，et al.Simultaneous enzyme immunoassay for the screening of aflatoxin B1and ochratoxin A in chili samples[J].Analytica Chimica Acta，2007，584：343-349.

[71]Lai XW，Sun DL，Ruan CQ，et al.Rapid analysis of aflatoxin B1，B2，and ochratoxin A in rice samples using dispersive liquidliquid microextraction combined with HPLC[J].Journalof Separation Science，2014，37（1-2）：92-98.

Research progress in aflatoxins and ochratoxin A in rice

LAI Xian-wen，ZHANG He，LIU Cheng-lan*
（Key Laboratory of Natural Pesticide and Chemical Biology，Ministry of Education，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China）

Mycotoxins are toxic metabolites produced by some filamentous fungi，which occur in foodstuffs and feeds.They have been a hazard to man and animals.The physical，chemical properties and hazard of aflatoxins and ochratoxin A were introduced.Due to the risk to human and animal health，their contamination situation，the maximum residue levels and analysis method in rice were summarized.The aim was to provide reference for mycotoxins research.

mycotoxins；aflatoxins；ochratoxin A；rice

TS55.1

A

1002-0306（2014）22-0386-06

10.13386/j.issn1002-0306.2014.22.076

2014－05－26

賴先文（1987-），男，碩士研究生，研究方向：真菌毒素污染研究。

* 通訊作者：劉承蘭（1976-），男，博士，副教授，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品安全。

國(guó)家自然科學(xué)基金（31071546）。