• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    金黃色葡萄球菌生物被膜檢測及控制方法研究進(jìn)展

    2014-03-07 05:54:16唐俊妮
    食品工業(yè)科技 2014年22期
    關(guān)鍵詞:金黃色葡萄球菌細(xì)菌

    王 瓊,唐俊妮,陳 娟,史 輝

    (西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川成都 610041)

    金黃色葡萄球菌生物被膜檢測及控制方法研究進(jìn)展

    王 瓊,唐俊妮*,陳 娟,史 輝

    (西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川成都 610041)

    金黃色葡萄球菌極易在食品的加工、儲(chǔ)存過程中形成生物被膜,使得被膜內(nèi)的細(xì)菌很難被清除,給食品安全帶來了巨大隱患。綜述了金黃色葡萄球菌生物被膜的形成、檢測、控制方法和影響因素,特別是針對(duì)國內(nèi)外金黃色葡萄球菌生物被膜的檢測及物理、化學(xué)和生物等控制方法進(jìn)行了詳述,旨在為食品工業(yè)領(lǐng)域生物被膜的消除提供借鑒。

    金黃色葡萄球菌,生物被膜,形成,檢測,控制方法

    細(xì)菌生物被膜是由微生物細(xì)胞以及它們分泌的保護(hù)性和吸附性的基質(zhì)共同形成的三維結(jié)構(gòu)的聚合物[1]。生物被膜的形成為細(xì)菌構(gòu)建了一個(gè)保護(hù)性的生長環(huán)境,使細(xì)菌能夠限制治療的抗生素,以及食品工廠的消毒劑、殺菌劑等化學(xué)品的進(jìn)入,并且屏蔽了寄主的免疫防御功能,使生物被膜里面的細(xì)菌不斷增殖和擴(kuò)散,造成持續(xù)性的慢性感染和食品反復(fù)污染[2]。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種常見的食源性病原細(xì)菌,很容易形成生物被膜,其產(chǎn)生的生物被膜能引起食品加工過程中能量的損耗、產(chǎn)品貨架期的縮短,給企業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失,更嚴(yán)重的是影響到食品的安全性,導(dǎo)致食源性疾病,給消費(fèi)者的健康帶來危害,甚至威脅到生命安全。同時(shí),已形成的生物被膜還有可能是其他致病菌及腐敗微生物的藏身之所,生物被膜內(nèi)部細(xì)菌間的群體感應(yīng)使得多種細(xì)菌能夠協(xié)同共生,從而增加了食品加工環(huán)境以及食品本身污染或再污染的風(fēng)險(xiǎn),甚至引起食物中毒事件。有研究表明食品加工過程中常用設(shè)備中的不銹鋼、鋁等材料表面具有大量微細(xì)溝槽、縫隙等,極易殘留微生物,從而可能形成生物被膜,采用機(jī)械沖洗甚至擦洗、以及消毒劑處理等方法均很難徹底清除生物被膜[3]。鑒于生物被膜形成的復(fù)雜性,為了能更好的控制生物被膜造成的危害,本文根據(jù)近年來的文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的形成、檢測、控制方法及影響因素等方面進(jìn)行綜述,旨在為食品工業(yè)領(lǐng)域生物被膜的消除提供借鑒。

    1 生物被膜的形成

    生物被膜的形成是細(xì)菌為適應(yīng)自然環(huán)境而采取的一種生存策略,當(dāng)細(xì)菌受到各種壓力,如極端的營養(yǎng)缺乏或過剩,低pH,高滲透壓,氧化,抗菌劑和抗生素等,細(xì)菌在接觸物表面與浮游細(xì)菌相對(duì)應(yīng)的一種生長方式,是由附著于惰性或活性實(shí)體的細(xì)菌細(xì)胞分泌的多糖基質(zhì)、纖維蛋白、脂質(zhì)蛋白等多聚物構(gòu)成胞外基質(zhì),將其自身包裹其中而形成的大量細(xì)菌聚集物[4]。這是細(xì)菌所具有的一種非常重要的環(huán)境適應(yīng)機(jī)制。金黃色葡萄球菌生物被膜的形成通常涉及幾個(gè)明顯的階段,包括起始的黏附,細(xì)胞與細(xì)胞之間的吸附與增殖,生物被膜的成熟以及細(xì)菌的分離與擴(kuò)散等過程[5],綜合起來如圖1所示。在形成生物被膜的過程當(dāng)中,細(xì)菌細(xì)胞首先和支撐物表面產(chǎn)生瞬時(shí)的表面碰觸,然后定位在其表面,最后細(xì)胞大量積累。這一過程中細(xì)菌細(xì)胞先形成單層的膜,再由單層被膜中的細(xì)菌增殖而形成三維結(jié)構(gòu)完整的成熟的生物被膜[6]。金黃色葡萄球菌生物被膜生物膜的結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜,它是一系列復(fù)雜大分子的聚合體。包括多糖物質(zhì),如β-1,6-聚-N-乙酰葡萄糖胺(PNAG)或胞間黏附多糖(PIA)[7];胞外DNA[8](eDNA),指菌體自溶釋放的胞外DNA,是生物膜基質(zhì)的重要組成成分;胞外蛋白 質(zhì) 和 細(xì) 胞 壁 磷 壁 酸[9];脂 質(zhì)[10]和 其 他 環(huán) 境 中 的 物質(zhì)。已有研究表明金黃色葡萄球菌生物被膜基質(zhì)的組成是可以根據(jù)細(xì)胞外環(huán)境變化而改變的[11]。

    圖1 生物被膜形成主要過程示意圖Fig.1 The diagram of biofilm formation

    2 生物被膜的檢測

    建立快速、靈敏、準(zhǔn)確、簡便的檢測方法,能夠有效控制由生物被膜引起的食品加工環(huán)境以及食品本身的污染或再污染,防止食源性疾病的發(fā)生。目前檢測細(xì)菌生物被膜的方法有三磷酸腺苷(ATP)生物發(fā)光法,高效液相色譜法,熒光素二乙酸酯法,平板擦拭法,掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM),激光共聚焦掃描顯微鏡法(CLSM),銀染法,結(jié)晶紫染色法,剛果紅實(shí)驗(yàn),報(bào)告基因檢測技術(shù),以及近年來發(fā)展的PCR鑒定,肽核酸(PNA)探針熒光原位雜交技術(shù)等[12]。其中最常用的是染色法和顯微鏡檢法,如Christensen[13]在研究金黃色葡萄球菌在器械表面形成生物被膜時(shí),首次應(yīng)用了結(jié)晶紫染色法,此后經(jīng)過不斷改進(jìn),該方法目前已經(jīng)成為一種廉價(jià),直接和常用的檢測細(xì)菌 生 物 被 膜 形 成 方 法 ;銀 染 法[14]是 被 廣 泛 采 用 的另一種定性檢測生物被膜形成能力的方法,用來證明多糖蛋白復(fù)合物和細(xì)菌生物被膜的共存,樣本需經(jīng)AgNO3等溶液浸泡處理,這種檢測方法可靠、特異、高效、省時(shí)簡便,臨床上可用于大量細(xì)菌生物被膜形成能力的鑒定。顯微鏡檢法利用SEM,TEM和CLSM可以直接檢測細(xì)菌生物被膜表層的形態(tài)學(xué),對(duì)于細(xì)胞間的連結(jié)、纖維樣多糖和細(xì)胞間質(zhì)清楚可辨,其中CLSM是近年才發(fā)展起來的用于組織形態(tài)學(xué)研究的一項(xiàng)新技術(shù),也廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室生物被膜的檢測,它可對(duì)透光樣本進(jìn)行分層掃描拍攝,常用于細(xì)菌生物被膜立體結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)研究[15]。另外,分子檢測技術(shù)也不斷在發(fā)展,Arciola等[16]通過剛果紅平板法驗(yàn)證icaA和icaD基因只在能夠形成被膜的菌株中存在,由此采用了一種簡單、快捷、可靠的PCR鑒定方法來檢測金黃色葡萄球菌生物被膜形成與icaA和icaD基因的關(guān)系,結(jié)果顯示這種方法應(yīng)用于檢測金黃色葡萄球菌被膜形成是可靠的,且比傳統(tǒng)的剛果紅實(shí)驗(yàn)更高效。肽核酸探針熒光原位雜交技術(shù)是Malic等[17]發(fā)現(xiàn)的一種檢測慢性傷口生物被膜菌感染的一個(gè)可靠的工具,這種技術(shù)具有良好的雜交特異性和雜交動(dòng)力特性,與CLSM配合使用,探針熒光原位雜交技術(shù)還能檢測和鑒定慢性傷口感染生物膜中的細(xì)菌種類立體結(jié)構(gòu)及分布情況[18]。

    事實(shí)上,在實(shí)際操作過程中通常是將這幾種檢測 技術(shù) 結(jié) 合 起 來 使 用 ,如 邢 明 勛 等[18]在 研 究 阿 奇 霉素對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜形成能力的實(shí)驗(yàn)中,通過剛果紅平板法初步驗(yàn)證受試菌株產(chǎn)生生物被膜的能力,再通過結(jié)晶紫染色、銀染和熒光染色結(jié)合CLSM技術(shù),進(jìn)一步觀察金黃色葡萄球菌形成生物被膜的形態(tài),證明了生物被膜在結(jié)構(gòu)上存在多樣性、開放性、不均一性等特點(diǎn)。唐俊妮[19]、黃瑩瑩等[20]研究則采用微孔板法來檢測金黃色生物被膜形成能力,并結(jié)合SEM及CLSM對(duì)已形成的生物被膜進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究。

    3 生物被膜的控制

    在食品加工過程中,許多食源性病原菌易在富有養(yǎng)分和有機(jī)物質(zhì)的固體表面黏附并形成生物被膜。這些黏附的微生物比浮游生長的細(xì)菌對(duì)消毒劑具有更強(qiáng)的抵抗能力。對(duì)各種化學(xué)藥品(包括各種消毒劑)、加熱、光照和干燥都存在耐受性,在清洗過程中,病原菌的散播會(huì)產(chǎn)生空氣懸浮粒,然后附著在加工設(shè)備材料表面,尤其易在一些不易清洗的地方形成生物被膜,如裂紋、拐角處、墊圈、管道材料連接處等。生物被膜中的細(xì)菌被厚厚的胞外多糖蛋白復(fù)合物包繞,不易獲得養(yǎng)分和氧氣,代謝率比較低,被膜深層的細(xì)菌處于休眠狀態(tài),不進(jìn)行頻繁的細(xì)胞分裂,往往體積較小,對(duì)殺菌劑不敏感[3]。因此,在越來越強(qiáng)調(diào)食品安全的大環(huán)境下,迫使人們不得不加強(qiáng)研究力度去尋找控制生物被膜的方法。

    3.1 物理方法

    去除生物被膜常見的物理方法有超高磁場、超聲波處理、高脈沖電場、低電場等[3]。楊葆華等[21]用優(yōu)化的超聲波平板法,利用超聲波的“空化”效應(yīng),設(shè)定超聲波功率135W,處理時(shí)間14min,處理溫度35℃,將生物被膜從接觸表面充分剝離,實(shí)驗(yàn)效果優(yōu)于平板擦拭法。低強(qiáng)度的電流(Electrical Current,EC)能夠增強(qiáng)抗菌劑對(duì)生物被膜的抗菌活性,del Pozo等[22]證明了應(yīng)用EC可以增強(qiáng)萬古霉素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的殺滅作用,但EC增強(qiáng)抗菌劑對(duì)生物被膜的清除作用因菌種和抗菌劑的不同,效果會(huì)有所改變。常壓等離子體失活技術(shù)[23],是利用高壓放電在低氣壓狀態(tài)下發(fā)生輝光放電產(chǎn)生活性氧和自由基來滅活微生物,該技術(shù)對(duì)細(xì)菌形成的生物被膜和浮游菌都具有殺菌作用。Niemira等[24]認(rèn)為電離輻射能夠有效地的殺滅生物被膜菌和浮游菌,是一種有效的物理去除生物被膜的方法,常用于處理與食品接觸的衛(wèi)生設(shè)備表面生物被膜相關(guān)的細(xì)菌。

    3.2 化學(xué)方法

    二氧化氯是一種速效、廣譜、低毒的新型消毒劑,陳 秋 云 等[25]研 究 了 不 銹 鋼 表 面 金 黃 色 葡 萄 球 菌生物被膜對(duì)二氧化氯的敏感性,結(jié)果顯示金黃色葡萄球菌生物被膜形式比以浮游形式對(duì)二氧化氯具有更強(qiáng)的抵抗能力且營養(yǎng)物質(zhì)能明顯減弱二氧化氯的殺菌效果。生物被膜的形成和有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)大大提高了其耐藥性,對(duì)殺菌劑的殺菌效果影響很大,因此,食品加工企業(yè)在日常消毒時(shí),一定要有效去除附于加工設(shè)備表面(尤其是死角處)的有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì),選用適當(dāng)?shù)那鍧崉┖拖緞?,防止生物被膜形成,這樣才能達(dá)到有效的消毒效果。Chaw等[26]研究表明低濃度的銀離子(50μg/L)對(duì)生物膜中的細(xì)菌沒有滅活能力,但離子狀態(tài)的銀離子可以結(jié)合在生物分子的供電子基團(tuán)表面,可以減穩(wěn)生物被膜基質(zhì)與胞外多聚物的分子間作用力,因此,可采用協(xié)同作用方式利用銀離子對(duì)生物被膜分子間作用力進(jìn)行減穩(wěn)。Schlag等[27]證實(shí)5mmol/L的亞硝酸鹽能夠抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成。郭志華等[28]研究證明了0.2mmol/L的EDTA可有效抑制金黃色葡萄球菌生物被膜形成;EDTA只能影響金黃色葡萄球菌生物被膜形成的早期階段;Ba2+不能完全阻斷EDTA抑制生物被膜生成,F(xiàn)e2+、Ca2+、Mg2+可以阻斷EDTA抑制生物被膜的效應(yīng);即使是高濃度的EDTA也不能影響成熟的細(xì)胞被膜數(shù)量;EDTA能抑制細(xì)胞之間的黏附作用。

    3.3 天然提取物

    近年來,植物原料作為新的殺菌劑也得到廣泛應(yīng)用。牛至精油和其主要酚類化合物——香芹酚和百里香酚具有廣泛的抗菌譜。Nostro等[29]研究表明,牛至精油和2種酚類化合物對(duì)生物被膜態(tài)的金黃色葡萄球菌的殺滅濃度分別0.25%~1.0%(v/v)和0.125%~0.500%(v/v),亞致死濃度的精油可以削弱金黃色葡萄球菌的生物被膜形成。Nostro等[30]進(jìn)一步證實(shí)香芹酚能夠顯著降低聚苯乙烯表面的生物量和細(xì)菌黏附數(shù),并進(jìn)一步證明在其亞抑制劑量(1/2,1/4和1/8 MIC)時(shí),酸性pH條件下香芹酚對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜較中性pH條件下具有更高的清除作用,對(duì)生物被膜的形成也具有潛在的抑制作用。在用5%茶樹油處理1h之后,不僅金黃色葡萄球菌的生物被膜被完全去除,而且其中的金黃色葡萄球菌也被殺滅[31]。王曉紅等[32]研究證明了從新西蘭桃柁羅漢松中提取出天然活性物質(zhì)桃柁酚,可以有效減少胞外DNA(eDNA)的釋放并抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成,并且抑制趨勢(shì)呈劑量依賴關(guān)系,而當(dāng)桃柁酚添加量為1/8× MIC藥物濃度時(shí),可以誘導(dǎo)生物被膜形成。此外,桃柁酚也可以通過影響Agr和Sar調(diào)控系統(tǒng),作用于cidA基因進(jìn)而影響eDNA釋放及生物被膜的形成。

    3.4 抗生素類

    阿奇霉素作為一種廣譜抗生素,具有免疫調(diào)節(jié)、抗微生物、抗生物被膜等作用,并且還具有良好的耐受性,成為了最常用的抗生素之一。邢明勛等[18]研究表明,阿奇霉素對(duì)金黃色葡萄球菌懸浮菌和生物被膜具有較好的抗菌活性及抗毒素作用,同時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的形成及兔紅細(xì)胞的溶血活性具有顯著的抑制作用,這將有助于治療由金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的感染。氨溴索(AMB)能破壞金黃色葡萄球菌已經(jīng)形成的生物被膜,與萬古霉素(VAN)聯(lián)合應(yīng)用后,可使生物被膜內(nèi)金黃色葡萄球菌顯著減少,顯示出了協(xié)同殺菌作用[33]。低于最低抑菌濃度的黃芩苷在體外對(duì)金黃色葡萄球菌的生物被膜具有破壞作用,與左氧氟沙星聯(lián)合應(yīng)用,可顯著增強(qiáng)左氧氟沙星對(duì)生物被膜的殺菌作用[12]。黃芩素能破壞耐甲氧西林金黃色葡萄球菌已形成的早期生物被膜,增強(qiáng)萬古霉素對(duì)生物被膜內(nèi)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的清除作用,且黃芩素破壞生物被膜及其協(xié)同殺菌作用強(qiáng)于克拉霉素(CLR)[34]。克拉霉素可以協(xié)同抗生素增強(qiáng)其對(duì)生物被膜內(nèi)金黃色葡萄球菌的殺菌作用。單用氧氟沙星抗菌效果并不顯著,克拉霉素可明顯增強(qiáng)其抗菌能力,二者具有協(xié)同作用,十四元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素能夠抑制生物膜,并提高氧氟沙星透過菌膜的能力,提示克拉霉素可作為控制金黃色葡萄球菌生物膜形成及相關(guān)感染的藥物,應(yīng)用于臨床治療此類疾病[35]。

    五倍子的濃度在大于或等于0.25mg/mL時(shí),對(duì)浮游的金黃色葡萄球菌有殺菌、抑菌的作用,但對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜作用不明顯;當(dāng)五倍子與1/4最低抑菌濃度(MIC=0.128mg/mL)的阿奇霉素聯(lián)合作用后可顯著減少細(xì)菌的黏附性,減少培養(yǎng)液和被膜中存活菌數(shù),證明五倍子與阿奇霉素聯(lián)合用藥可增強(qiáng)對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的殺菌作用[36]。然而采用抗生素也只局限于實(shí)驗(yàn)條件下,在實(shí)際環(huán)境中,生物被膜外面還附著有大量的細(xì)胞碎片、血小板、以及機(jī)體的各種代謝物,抗生素的作用并不能達(dá)到理想的效果,對(duì)于食品加工環(huán)境以及其他環(huán)境,這種方法并不可取。

    3.5 酶類

    溶葡萄球菌酶是一種最初從模仿葡萄球菌中分離獲得的含Zn2+內(nèi)切肽酶,對(duì)細(xì)菌胞壁肽聚糖交聯(lián)結(jié)構(gòu)中的五甘氨酸橋聯(lián)具有特異水解作用[37]。白寧等[38]通過研究重組溶葡萄球菌酶對(duì)金黃色葡萄球菌的體外清除作用,發(fā)現(xiàn)不同濃度的重組溶葡萄球菌酶能夠有效地減少金黃色葡萄球菌生物被膜中的活菌數(shù)。唐俊妮等[19]研究表明,耐熱核酸酶和DNaseⅠ對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的形成起到抑制作用。Mann等[39]發(fā)現(xiàn)證實(shí)了葡萄球菌核酸酶可以降解胞外DNA,促進(jìn)了細(xì)胞的分散,抑制了生物被膜的形成。

    3.6 食品添加劑

    謝麗斯等[40]在添加低質(zhì)量濃度防腐劑山梨酸鉀和苯甲酸鈉后,金黃色葡萄球菌成膜能力降低,當(dāng)兩者質(zhì)量濃度均≥0.4g/L時(shí),能夠完全抑制被膜的形成,且山梨酸鉀抑制成膜趨勢(shì)比苯甲酸鈉明顯;添加質(zhì)量濃度為3g/L的單甘酯時(shí)成膜率最低,而雙甘酯質(zhì)量濃度為4g/L成膜率最低,兩者比較,在質(zhì)量濃度2~4g/L范圍內(nèi)單甘酯抑制成膜比雙甘酯好;對(duì)于蔗糖酯類乳化劑,在質(zhì)量濃度0.3~4g/L范圍,能顯現(xiàn)抑制成膜作用;非離子型表面活性劑吐溫-80、Span-60對(duì)金黃色葡萄球菌成膜影響不同,與兩者自身親水親油性相關(guān)。因此,這幾類食品添加劑對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜具有一定抑制作用。Shanks等[41]研究顯示,濃度高于0.5%的檸檬酸鈉,可以有效地抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生物被膜的形成及細(xì)胞生長,然而,對(duì)于大多數(shù)受試的金黃色葡萄球菌,亞抑菌濃度的檸檬酸鈉能夠顯著地刺激其生物被膜的形成。Sauer等[42]用7%(w/v)檸檬酸鈉緩沖液(0.24mmol/L,pH=6.2),0.05% 亞 甲 基 藍(lán) ,0.15% 對(duì) 羥基苯甲酸甲酯和0.015%對(duì)羥基苯甲酸丙酯制成聯(lián)合殺菌劑:檸檬酸/亞甲基藍(lán)/對(duì)羥基苯甲酸酯(citrate/ methylene blue/parabens,C/MB/P)能夠顯著減少金黃色葡萄球菌生物被膜形成量及生物被膜的厚度,對(duì)預(yù)成型以及成熟的生物被膜中的金黃色葡萄球菌有迅速殺滅作用,能夠完全清除從生物被膜中分離的浮游態(tài)細(xì)菌。

    4 其他外界影響因素

    金黃色葡萄球菌具有溫和的疏水性和顯著的路易斯堿的性質(zhì),其在聚苯乙烯上形成被膜的最初黏附與生長基質(zhì)中離子強(qiáng)度呈正相關(guān)。大多數(shù)菌株在37℃時(shí)較25℃時(shí)形成的生物被膜多;增加葡萄糖的量能提高被膜生成量;孵化時(shí),NaCl和MgCl2的存在能夠顯著降低生物被膜形成量[43]。我們實(shí)驗(yàn)室通過對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜形成變化與外在培養(yǎng)條件影響關(guān)系進(jìn)行研究,也證實(shí)了培養(yǎng)基中的糖類可以促進(jìn)生物被膜的形成,NaCl對(duì)生物被膜的形成起抑制作用,并且不同的培養(yǎng)基在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)被膜形成的影響具有很大差異[44]。通過改善食品接觸表面的表面性質(zhì)以阻止微生物在其表面上的黏附也可以作為一種控制生物被膜的途徑。不同的食品接觸表面形成生物被膜的能力有所不同,與玻璃和PE塑料相比,不銹鋼表面黏附形成生物被膜的活菌數(shù)較多[45]。Jaglic等[46]證明在不利于微生物生長的溫度(6~ 22℃)和靜態(tài)條件下,會(huì)導(dǎo)致表皮葡萄球菌的黏附和形成生物被膜。相反,在有利于微生物生長的溫度下,微生物的大量繁殖則使得黏附的細(xì)胞很容易從不銹鋼表面上脫附下來。

    5 結(jié)論與展望

    生物被膜是一種復(fù)雜的微生境,生物被膜的形成受到菌種、菌量、接觸表面類型、營養(yǎng)條件和生長環(huán)境等諸多因素的影響。各種不同的細(xì)菌生物被膜的形成沒有一致的途徑,即使是同一種細(xì)菌也沒有明確的具體途徑,它們可以隨著環(huán)境的變化而產(chǎn)生相應(yīng)的變化。鑒于食品加工過程中常用設(shè)備中的不銹鋼、鋁等材料表面具有大量微細(xì)溝槽、縫隙等,極易殘留微生物,從而形成細(xì)菌生物被膜。食品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立完整HACCP體系,確定食品生產(chǎn)過程中可能形成生物被膜的關(guān)鍵點(diǎn),并對(duì)各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)采取適宜,高效和安全的方法進(jìn)行控制。通過抑制生物被膜的形成和殺滅生物被膜中的金黃色葡萄球菌,從而降低食品中由金黃色葡萄球菌生物被膜引發(fā)的食源性疾病暴發(fā)。

    隨著生物信息學(xué)的發(fā)展,在研究生物被膜形成過程中越來越多的引入了生物信息學(xué)的方法,以后通過提高細(xì)菌生物被膜檢測水平,建立快速靈敏準(zhǔn)確簡便的檢測方法,利用芯片技術(shù)、雙向電泳、有效的報(bào)告基因和基因敲除等分子技術(shù),結(jié)合核磁共振和激光共聚焦顯微技術(shù),從基因組水平和蛋白組水平來構(gòu)建生物被膜形成的分子模型,充分了解金黃色葡萄球菌生物被膜的形成機(jī)理[6],為建立有效的生物被膜去除和預(yù)防策略奠定理論基礎(chǔ)。

    [1]Costerton JW,Stewart PS,Greenberg EP.Bacterial biofilms:a common cause of persistent infections[J].Science,1999,284(5418):1318-1322.

    [2]Garzoni C,Kelley WL.Staphylococcus aureus:new evidence for intracellular persistence[J].Trends Microbiol,2009,17(2):59-65.

    [3]韓北忠,陳秋云.生物被膜在食品加工過程中的形成及其控制[J]. 中國食品學(xué)報(bào),2003(增刊):527-529.

    [4]邢盼盼,鄧開野,李南薇.金黃色葡萄球菌生物被膜在食品工業(yè)領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè),2012,33(12):150-152.

    [5]O’Toole G,Kaplan HB,Kolter R.Biofilm formation as microbial development[J].Annu Rev Microbiol,2000,54:49-79.

    [6]唐俊妮,史賢明,王紅寧,等.細(xì)菌生物膜的形成與調(diào)控機(jī)制[J]. 生物學(xué)雜志,2009,26(2):48-53.

    [7]Sadovskaya I,Vinogradov E,F(xiàn)lahaut S,et al.Extracellular carbohydrate-containing polymers of a model biofilm-producing strain,Staphylococcus epidermidis RP62A[J].Infect Immun,2005,73(5):3007-3017.

    [8]Das T,Sharma PK,Busscher HJ,et al.Role of extracellular DNA in initial bacterial adhesion and surface aggregation[J]. Appl Environ Microbiol,2010,76(10):3405-3408.

    [9]Kogan G,Sadovskaya I,Chaignon P,et al.Biofilms of clinical strains of Staphylococcus that do not contain polysaccharide intercellular adhesin[J].FEMS Microbiol Lett,2006,255(1):11-16.

    [10]Flemming HC,Wingender J.The biofilm matrix[J].Nat Rev Microbiol,2010,8:623-633.

    [11]Fey PD.Modality of bacterial growth presents uniquetargets:how do we treat biofilm-mediated infections[J].Curr Opin Microbiol,2010,13(5):610-615.

    [12] 聶鑫,高原.細(xì)菌 生物 被膜檢測方 法研究進(jìn)展[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2012,21(11):24-26.

    [13]Christensen GD,Simpson WA,Younger JJ,et al.Adherence of coagulase-negative Staphylococci to plastic tissue culture plates:a quantitative model for the adherence of Staphylococci to medical devices[J].J Clin Microbiol,1985,22(6):996-1006.

    [14] 何平,李乃靜,李勝岐.銀染法鑒定克雷伯桿菌生物被膜[J]. 中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2002,22(2):84-85.

    [15]Costerton JW,Leandowski Z,Caldwellde DE,et al.Microbial biofilms[J].Annu Rev Microbiol,1995,49(1):711-745.

    [16]Arciola CR,Collamati S,Donati E,et al.A rapid PCR method for the detection of slime-producing strains of Staphylococcus epidermidis and S.aureus in periprosthesis infections[J].DiagnosticMolecular Pathology,2001,10(2):130-137.

    [17]Malic S,Hill KE,Hayes A,et al.Detection and identification of specific bacteria in wound biofilms using peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridization(PNA FISH)[J].Microbiology,2009,155(8):2603-2611.

    [18]邢明勛,賈生美,袁鵬,等.阿奇霉素對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的抑制作用[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,43(6):553-559.

    [19]唐俊妮,康名松,陳煥春,等.葡萄球菌核酸酶對(duì)金黃色葡萄球菌和其他細(xì)菌生物被膜形成的抑制作用[J].中國科學(xué):生命科學(xué),2011,41(7):529-586.

    [20]黃瑩瑩,陳一強(qiáng),孔晉亮,等.黃芩苷及聯(lián)合左氧氟沙星對(duì)金黃色葡萄球菌早期生物膜的體外影響[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013,23(13):42-45.

    [21]楊葆華,韓北忠,陳晶瑜,等.超聲波平板法檢測金黃色葡萄球菌生物被膜的研究[J]. 食品研究與開發(fā),2007,28(10):136-139.

    [22]del Pozo JL,Rouse MS,Mandrekar JN,et al.Effect of electrical current on theactivitiesofantimicrobialagents against Pseudomonas aeruginosa,Staphylococcusaureus,and Staphylococcus epidermidis biofilms[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(1):35-40.

    [23]Vleugels M,Shama G,Deng XT,et al.Atmospheric plasma inactivation of biofilm-forming bacteria for food safety control[J]. IEEE Trans Plasma Sci,2005,33(2):824-828.

    [24]Niemira BA,Solomon EB.Sensitivity of planktonic and biofilm-associated Salmonella spp.to ionizing radiation[J].Appl Environ Microbiol,2005,71(5):2732-2736.

    [25]陳秋云,韓北忠,李春雷.金黃色葡萄球菌生物被膜在不銹鋼表面的形成及其對(duì)二氧化氯的敏感性[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,9(4):10-13.

    [26]Chaw KC,Manimaran M,Tay FE.Role of silver ions in destabilization of intermolecular adhesion forces measured by atomic force microscopy in Staphylococcus epidermidis biofilms [J].Antimicrob Agents Chemother,2005,49(12):4853-4859.

    [27]Schlag S,Nerz C,Birkenstock TA,et al.Inhibition of staphylococcal biofilm formation by nitrite[J].J Bacteriol,2007,189(21):7911-7919.

    [28]郭志華,胡婷婷,單玲玲.低濃度乙二胺四乙酸對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜形成的影響[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2012,38(12):22-25.

    [29]Nostro A,Roccaro AS,Bisignano G,et al.Effect of oregano,carvacrolandthymol on Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis biofilms[J].J Med Microbiol,2007,56(Pt 4):519-523.

    [30]Nostro A,Cellini L,Zimbalatti V,et al.Enhanced activity of carvacrol against biofilm of Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis in an acidic environment[J].APMIS,2012,120(12):967-973.

    [31]Brady A,Loughlin R,Gilpin D,et al.In vitro activity of teatree oil against clinical skin isolates of meticillin-resistant andsensitive Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci growing planktonically and as biofilms[J].J Med Microbiol,2006,55(Pt 10):1375-1380.

    [32]王曉紅,于錄,周泐,等.桃柁酚對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜形成及cidA表達(dá)的影響[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2013,35(5):359-363.

    [33]孔晉亮,張東偉,陳一強(qiáng),等.氨溴索協(xié)同萬古霉素對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的研究[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2012,22(11):2241-2243.

    [34]陳艷,陳一強(qiáng),孔晉亮,等.黃芩素協(xié)同萬古霉素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌早期生物被膜的研究[J].國際呼吸雜志,2013,33(10):726-729.

    [35]鄭風(fēng)勁,鄧曉慧,李恒,等.克拉霉素對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜的影響[J]. 四川生理科學(xué)雜志,2007,29(1):21-24.

    [36]穆海霞,陳俊清.五倍子與阿奇霉素協(xié)同對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的體外抗菌作用[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(1):93-94.

    [37]Climo MW,Ehlert K,Archer GL.Mechanism and suppression of lysostaphin resistance in oxacillin-resistant Staphylococcus aureus[J].Antimicrob Agents Chemother,2001,45(5):1431-1437.

    [38]白寧,楊信怡,游雪甫.重組溶葡萄球菌酶對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的體外清除作用[J]. 中國藥物與臨床,2008,8(7):515-518

    [39]Mann EE,Rice KC,Boles BR,et al.Modulation of eDNA release and degradation affects Staphylococcus aureus biofilm maturation[J].PLoS One,2009,4(6):1-12.

    [40]謝麗斯,張文艷,許佳晶,等.食品添加劑對(duì)食源性金黃色葡萄球菌生物被膜的影響[J].食品科學(xué),2012,33(17):154-157.

    [41]Shanks RM,Sargent JL,Martinez RM,et al.Catheter lock solutions influence staphylococcal biofilm formation on abiotic surfaces[J].Nephrol Dial Transplant,2006,21(8):2247-2255.

    [42]Sauer K,Steczko J,Ash SR.Effect of a solution containing citrate/Methylene Blue/parabens on Staphylococcus aureus bacteria and biofilm,and comparison with various heparin solutions[J].J Antimicrob Chemother,2009,63(5):937-945.

    [43]Vázquez-Sánchez D,Habimana O,Holck A.Impact of Food-Related Environmental Factors on the Adherence and Biofilm Formation of Natural Staphylococcus aureus Isolates[J].Curr Microbiol,2013,66(2):110-121.

    [44]Tang JN,Chen J,Liu J,et al.Effect of different cultivation conditions on Staphylococcus aureus biofilm formation and diversity of adhesins genes[J].J Food Safety,2012,32(2):210-218.

    [45]張娜,韓北忠,李敏,等.食品接觸表面對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜形成的影響食品研究與開發(fā)[J]. 食品研究與開發(fā),2006,27(7):33-36.

    [46]Jaglic Z,Cervinkova D,Michu E,et al.Effect of milk temperature and flow on the adherence of Staphylococcus epidermidis to stainless steel in amounts capable of biofilm formation[J].Dairy Sci&Technol,2011,91(3):361-372.

    Research progress in detection and control methods of Staphylococcus aureus Biofilm formation

    WANG Qiong,TANG Jun-ni*,CHEN Juan,SHI Hui
    (College of Life Science and Technology,Southwest University for Nationalities,Chengdu 610041,China)

    Staphylococcus aureus is easy to form biofilm in food processing and storage,which makes the bacteria in the biofilm more difficult to be eradicated and brings great dangers to food safety.The biofilm formation,detection,control methods and influence factors of S.aureus were reviewed in this text,especially for the detection and physical,chemical and biological control methods.It would provide an important guidance on S.aureus biofilm elimination for food industry.

    Staphylococcus aureus;biofilm;formation;detection;control methods

    TS201.6

    A

    1002-0306(2014)22-0371-05

    10.13386/j.issn1002-0306.2014.22.073

    2014-03-11

    王瓊(1990-),女,碩士研究生,研究方向:畜產(chǎn)品加工與安全。

    * 通訊作者:唐俊妮(1971-),女,副研究員,研究方向:食品安全。

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31071515,31371781);教育部新世紀(jì)人才支持計(jì)劃(NCET-11-0847)。

    猜你喜歡
    金黃色葡萄球菌細(xì)菌
    偉大而隱秘的細(xì)菌
    一起金黃色葡萄球菌食物中毒的病原學(xué)分析
    細(xì)菌大作戰(zhàn)
    如何防治兔葡萄球菌病
    那一抹金黃色
    那一抹金黃色
    細(xì)菌大作戰(zhàn)
    金黃色
    細(xì)菌惹的禍
    肉雞葡萄球菌病診療
    久久狼人影院| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲伊人色综图| 精品亚洲乱码少妇综合久久| av天堂在线播放| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产在视频线精品| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲精品国产av成人精品| 热99国产精品久久久久久7| 成年人午夜在线观看视频| 无限看片的www在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 日日爽夜夜爽网站| 在线观看舔阴道视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 97精品久久久久久久久久精品| 激情视频va一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 成年av动漫网址| 波多野结衣av一区二区av| 国产免费av片在线观看野外av| www.av在线官网国产| 国产福利在线免费观看视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩免费高清中文字幕av| 不卡av一区二区三区| 搡老熟女国产l中国老女人| 精品少妇久久久久久888优播| 精品一区在线观看国产| 一级毛片电影观看| 99久久精品国产亚洲精品| 操美女的视频在线观看| 亚洲精品自拍成人| 一级片免费观看大全| 午夜福利免费观看在线| 91av网站免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 性少妇av在线| 黄片播放在线免费| 99九九在线精品视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 又黄又粗又硬又大视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 不卡av一区二区三区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 一个人免费看片子| 亚洲av美国av| 国产三级黄色录像| 久久中文字幕一级| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99久久国产精品久久久| 高清av免费在线| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产精品久久久av美女十八| 国产91精品成人一区二区三区 | 啪啪无遮挡十八禁网站| cao死你这个sao货| 成人黄色视频免费在线看| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 啦啦啦在线免费观看视频4| av电影中文网址| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品一区二区在线不卡| 成人影院久久| 久久 成人 亚洲| 男人爽女人下面视频在线观看| 老汉色∧v一级毛片| tube8黄色片| 欧美黑人欧美精品刺激| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产区一区二久久| 制服人妻中文乱码| 亚洲专区字幕在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久中文看片网| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 青草久久国产| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 大码成人一级视频| av在线播放精品| 成年人午夜在线观看视频| 午夜精品国产一区二区电影| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 婷婷色av中文字幕| 免费黄频网站在线观看国产| 国产在线视频一区二区| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲av电影在线进入| 日韩大码丰满熟妇| 成年女人毛片免费观看观看9 | 两个人免费观看高清视频| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美精品亚洲一区二区| 不卡av一区二区三区| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品第二区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲欧美色中文字幕在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄频高清免费视频| 人成视频在线观看免费观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久精品国产综合久久久| 久久久精品区二区三区| 热99久久久久精品小说推荐| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产免费视频播放在线视频| 日韩视频在线欧美| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av线在线观看网站| cao死你这个sao货| 久久 成人 亚洲| 丁香六月天网| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产在线一区二区三区精| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 老司机福利观看| 欧美成人午夜精品| www.av在线官网国产| 亚洲国产av新网站| 成人影院久久| 高清视频免费观看一区二区| 欧美黑人精品巨大| 国产精品一区二区在线观看99| 国产黄频视频在线观看| 国产精品免费大片| 在线 av 中文字幕| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99国产精品免费福利视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 少妇的丰满在线观看| 丁香六月欧美| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产淫语在线视频| 国产伦人伦偷精品视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品高清国产在线一区| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美精品一区二区大全| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲伊人久久精品综合| 国产成人av激情在线播放| 一二三四在线观看免费中文在| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 岛国毛片在线播放| 国产黄频视频在线观看| av一本久久久久| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 黑人操中国人逼视频| 欧美 日韩 精品 国产| 久久久欧美国产精品| 欧美在线一区亚洲| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品高清国产在线一区| 欧美 日韩 精品 国产| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 电影成人av| 成人三级做爰电影| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久久精品人妻al黑| 国产av又大| 黑人猛操日本美女一级片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 免费高清在线观看视频在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 91老司机精品| 一边摸一边做爽爽视频免费| 精品人妻在线不人妻| 69av精品久久久久久 | 久久影院123| 亚洲精品成人av观看孕妇| av欧美777| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲avbb在线观看| 曰老女人黄片| 精品一区二区三卡| 国产福利在线免费观看视频| 午夜激情久久久久久久| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 黄色视频,在线免费观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品av麻豆狂野| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲av美国av| 成年人黄色毛片网站| 黄色a级毛片大全视频| 久久久精品区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 大香蕉久久成人网| 制服人妻中文乱码| 国产精品一二三区在线看| 18禁国产床啪视频网站| 久久精品成人免费网站| 欧美国产精品一级二级三级| av免费在线观看网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 免费看十八禁软件| 国产人伦9x9x在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 人妻一区二区av| 免费观看a级毛片全部| 看免费av毛片| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久久久久免费高清国产稀缺| 99精品欧美一区二区三区四区| 一区二区三区精品91| 青青草视频在线视频观看| 九色亚洲精品在线播放| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 岛国在线观看网站| 90打野战视频偷拍视频| 色视频在线一区二区三区| 免费少妇av软件| 男女下面插进去视频免费观看| 高清av免费在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品一二三区在线看| 一二三四社区在线视频社区8| 在线观看免费午夜福利视频| 国产1区2区3区精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美午夜高清在线| 超色免费av| 久久久久久久精品精品| 成人av一区二区三区在线看 | av国产精品久久久久影院| 美女午夜性视频免费| bbb黄色大片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日本a在线网址| 精品高清国产在线一区| 一二三四社区在线视频社区8| 国产成人啪精品午夜网站| 97在线人人人人妻| 热99re8久久精品国产| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产福利在线免费观看视频| 一本大道久久a久久精品| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲专区字幕在线| videosex国产| 亚洲色图综合在线观看| 久久av网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美 日韩 精品 国产| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 一级片'在线观看视频| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲精品在线美女| 91精品三级在线观看| 国产av又大| 精品高清国产在线一区| 男女午夜视频在线观看| 满18在线观看网站| 亚洲avbb在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久99一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲精品一二三| 久久精品亚洲av国产电影网| 午夜免费鲁丝| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 最新的欧美精品一区二区| 午夜免费鲁丝| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产成人精品久久二区二区91| 91大片在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 一级毛片电影观看| 午夜视频精品福利| 久久人妻熟女aⅴ| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲 国产 在线| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 99国产精品一区二区三区| 99久久人妻综合| 久久女婷五月综合色啪小说| 大片电影免费在线观看免费| 麻豆乱淫一区二区| 女性生殖器流出的白浆| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美97在线视频| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美午夜高清在线| 成人手机av| 99国产精品99久久久久| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品 国内视频| 中文字幕最新亚洲高清| 中文字幕制服av| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久久久精品国产欧美久久久 | 最近中文字幕2019免费版| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产成人精品无人区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 成人av一区二区三区在线看 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美日韩av久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 在线av久久热| 亚洲欧美激情在线| 国产男女超爽视频在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 悠悠久久av| 亚洲欧美精品自产自拍| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲一码二码三码区别大吗| 91老司机精品| 日本欧美视频一区| 成人黄色视频免费在线看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 1024香蕉在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久久久精品人妻al黑| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲三区欧美一区| 欧美激情高清一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 飞空精品影院首页| 国产av精品麻豆| 国产精品一区二区在线不卡| 超碰97精品在线观看| 在线天堂中文资源库| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产欧美日韩一区二区三 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久亚洲国产成人精品v| 爱豆传媒免费全集在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久久久久久精品精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 最近中文字幕2019免费版| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 波多野结衣一区麻豆| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 桃红色精品国产亚洲av| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲精品美女久久av网站| 人妻久久中文字幕网| 欧美日韩亚洲高清精品| 男女下面插进去视频免费观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产一区二区在线观看av| 秋霞在线观看毛片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久青草综合色| 国产主播在线观看一区二区| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲精品在线美女| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 9191精品国产免费久久| 午夜福利,免费看| 大码成人一级视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一级毛片电影观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品国产一区二区久久| 999久久久精品免费观看国产| 99国产精品一区二区蜜桃av | 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美精品亚洲一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 国产1区2区3区精品| 久久亚洲国产成人精品v| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 十八禁高潮呻吟视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久国产精品影院| 国产成人精品无人区| 色播在线永久视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜成年电影在线免费观看| 999久久久精品免费观看国产| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久九九热精品免费| 9热在线视频观看99| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久99热这里只频精品6学生| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 性少妇av在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av国产av综合av卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 在线天堂中文资源库| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品国产一区二区三区四区第35| 两人在一起打扑克的视频| 午夜视频精品福利| 中文欧美无线码| 一级黄色大片毛片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 日韩中文字幕视频在线看片| 国产在线一区二区三区精| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美日韩黄片免| 又大又爽又粗| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产黄频视频在线观看| 丝袜脚勾引网站| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 黄片小视频在线播放| 午夜激情久久久久久久| www.自偷自拍.com| av福利片在线| 热re99久久精品国产66热6| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 老司机福利观看| 国产精品久久久av美女十八| 日本vs欧美在线观看视频| 18禁观看日本| av福利片在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人手机av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 这个男人来自地球电影免费观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 日本a在线网址| 欧美人与性动交α欧美软件| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 中文字幕高清在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 人人澡人人妻人| 黄片小视频在线播放| 久久ye,这里只有精品| 在线永久观看黄色视频| 免费av中文字幕在线| 欧美黑人精品巨大| www.精华液| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 国产主播在线观看一区二区| 国产激情久久老熟女| av视频免费观看在线观看| 欧美大码av| 99精品欧美一区二区三区四区| 我的亚洲天堂| 十八禁网站免费在线| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品美女久久av网站| 久久青草综合色| 欧美激情极品国产一区二区三区| av国产精品久久久久影院| 欧美日本中文国产一区发布| 黄色怎么调成土黄色| 一二三四社区在线视频社区8| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线精品无人区一区二区三| 我的亚洲天堂| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲色图综合在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 女人久久www免费人成看片| 男男h啪啪无遮挡| 免费高清在线观看日韩| 一本久久精品| 免费观看人在逋| 不卡av一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 秋霞在线观看毛片| 久久性视频一级片| 国产一级毛片在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| www.自偷自拍.com| 最新在线观看一区二区三区| tube8黄色片| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久精品免费免费高清| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲av美国av| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产亚洲精品一区二区www | av天堂在线播放| 成人国产av品久久久| 丁香六月天网| 老司机福利观看| 国产欧美日韩一区二区三 | 精品人妻1区二区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 两个人免费观看高清视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 真人做人爱边吃奶动态| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久久久网色| 免费高清在线观看视频在线观看| 999精品在线视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲欧洲日产国产| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产成人免费无遮挡视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 黄色 视频免费看| 少妇人妻久久综合中文| 啦啦啦免费观看视频1| 国产高清国产精品国产三级| 日本黄色日本黄色录像| 精品卡一卡二卡四卡免费| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲五月色婷婷综合| 99精品久久久久人妻精品| 丁香六月天网| 欧美少妇被猛烈插入视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美日韩av久久| tocl精华| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲欧洲日产国产| 99re6热这里在线精品视频| 真人做人爱边吃奶动态| 日本a在线网址| 日韩一区二区三区影片| 一进一出抽搐动态| 搡老岳熟女国产| 91大片在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 高清欧美精品videossex| cao死你这个sao货| 欧美日韩黄片免| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲欧美色中文字幕在线| 伦理电影免费视频| 捣出白浆h1v1| netflix在线观看网站| 国产成人精品无人区| 999久久久精品免费观看国产| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久欧美国产精品| 国产av国产精品国产| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产三级黄色录像| 不卡av一区二区三区| 免费人妻精品一区二区三区视频|