速溶蘆筍粉抗焦慮活性的研究

馬淑鳳，湯建亞1，，何晨夢1，，嚴倩文，孫 進，*，黃云祥

（1.江南大學食品科學與技術國家重點實驗室，江蘇無錫 214122；2.江南大學食品學院，江蘇無錫 214122；3.河北省蘆筍工程技術研究中心，河北秦皇島 066600）

速溶蘆筍粉抗焦慮活性的研究

馬淑鳳2，湯建亞1，2，何晨夢1，2，嚴倩文2，孫 進2，*，黃云祥3

（1.江南大學食品科學與技術國家重點實驗室，江蘇無錫 214122；2.江南大學食品學院，江蘇無錫 214122；3.河北省蘆筍工程技術研究中心，河北秦皇島 066600）

目的：研究速溶蘆筍粉的抗焦慮作用。方法：健康雄性SD大鼠70只，按體重隨機分為7組，速溶蘆筍粉低、中和高劑量組（IAP-l 0.5g/kg、IAP-m 1.0g/kg、IAP-h 2.0g/kg），陽性對照酪蛋白水解物（CTH 30mg/kg）和安定（DZP 3mg/kg），空白對照組。采用慢性情緒應激模型，從行為學觀察和內分泌水平角度研究速溶蘆筍粉的抗焦慮作用。結果：IAP行為學觀察表明：與模型對照組比較，在此焦慮模型上速溶蘆筍粉的低、中劑量組受試物減少焦慮動物探究和修飾行為的動作次數(shù)，但統(tǒng)計結果沒有顯著的差異（p＞0.05）。IAP內分泌水平檢測結果表明：與模型對照組比較，在此焦慮模型上速溶蘆筍粉的低、中和高劑量組分別顯著提高小鼠血清中5-羥色氨酸（5-HT）和多巴胺（DA）的濃度（p＜0.05）；分別顯著降低小鼠血清中皮質醇（CORT）、腎上腺素（E）和去甲腎上腺素（NA）的濃度（p＜0.05）。速溶蘆筍粉在給藥劑量下可以顯著降低15min和60min兩個時間點的小鼠自主活動次數(shù)（p＜0.05）。結論：速溶蘆筍粉有明顯抗焦慮作用。

速溶蘆筍粉，抗焦慮，小鼠

焦慮是人在應對環(huán)境刺激時產生的一種正常的應激性情緒行為，常伴有緊張憂慮、煩躁不安、缺乏耐心、易沖動等亢奮性心理，并伴有心悸、多汗、呼吸窘迫、手腳發(fā)涼等植物神經功能紊亂的癥狀[1-2]。隨著現(xiàn)代工作壓力和生活壓力的加劇，焦慮癥已成為現(xiàn)代疾病譜的常見病和多發(fā)病。目前抗焦慮藥物雖能緩解部分癥狀，但副作用較多，因此從天然植物中開發(fā)天然抗焦慮有效組分成為近些年來研究的熱點。蘆筍（asparagus officinalis L.）又名石刁柏、龍須菜，被世界衛(wèi)生組織列為世界十大最具有營養(yǎng)價值的蔬菜之首，是國際上公認的防癌保健蔬菜[3]。蘆筍中含有甾體皂苷、多糖、黃酮等功能成分[4]。本研究從蘆筍副產物中提取分離得到蘆筍水提取物即速溶蘆筍粉，并對其進行了抗焦慮作用研究。該實驗以慢性情緒應急模型鼠為考察對象，以不確定性空瓶飲水刺激作為情緒應激源，考察14d情緒應激對大鼠行為、神經內分泌的影響，旨在初步探討速溶蘆筍粉對慢情緒應急模型鼠的抗焦慮生物活性的影響，為開發(fā)新型蘆筍保健食品提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

實驗動物 實驗選用SPF級雄性SD大鼠，體重（200±20）g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，實驗動物生產許可證號SCXK（滬）2007-0005，實驗條件保持溫度為20～25℃，相對濕度為40%~70%，實驗動物使用許可證普通環(huán)境許可證號：SYXK（蘇）2012-0001；速溶蘆筍粉 秦皇島長勝農業(yè)科技發(fā)展有限公司提供，速溶蘆筍粉為白色粉末，該樣品是以蘆筍副產物為原料，經過水浸提、脫色、脫重金屬、過濾、濃縮和干燥工藝制備得到，即蘆筍水提取物，其中總皂苷（以菝葜皂苷元計）含量為21.14%，總多糖（以葡萄糖計）10.17%，總游離氨基酸（以天冬氨酸計11.48%）；酪蛋白水解物（CTH） 上海恒遠生物科技有限公司；安定（DZP） 西安瑞林生物科技有限公司；5-羥色氨酸（5-HT）、多巴胺（DA）、皮質醇（CORT）、腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NA）檢測試劑盒 均購自上海彩佑實業(yè)有限公司。

酶標儀M5 美國分子儀器公司。

1.2 實驗樣處理

實驗共分7組：a.正常對照組（Control），灌胃生理鹽 水 ；b.模 型 對 照 組（Model），灌 胃 生 理 鹽 水 ；c.低劑量組（IAP-l），灌胃速溶蘆筍粉0.5g/kg；d.中劑量組（IAP-m），灌 胃 速 溶 蘆 筍 粉 1.0g/kg；e.高 劑 量 組（IAP-h），灌胃速溶蘆筍粉2.0g/kg；f.CTH陽性對照組（CTH），灌胃CTH（LACTIUMTM，Ingredia，Arras，F(xiàn)rance）30mg/kg；g.安定陽性對照（DZP），灌胃安定3mg/kg，每組10只，每日灌胃一次，每次4mL，正常對照組不給予任何處理，其他各組均進行刺激。

1.3 慢性情緒應激模型

按照Nicolas V、王延麗等建立的模型研究慢性情緒應激[5-9]，并進行適當修改。大鼠經1周適應期后隨機分組，除正常組外，模型組單籠飼養(yǎng)且接受不確定性空瓶飲水刺激建立焦慮應激模型。具體方法如下：定時喂水訓練7d，即每天早9∶00～9∶10和晚17∶00~17∶10給動物飲水10min，其余時間撤去水瓶不給水。定時喂水期結束后開始應激實驗，在上述兩個時間段內給予不確定空瓶刺激，維持1d兩次，持續(xù)兩周。正常組不接受任何處理，自由飲水和攝食。行為學觀察包括攻擊（咬或攻擊空瓶和籠子）、探究（前后左右運動和光顧水瓶所在位置）及修飾行為（梳理皮毛和洗臉）。具體方法是將空瓶應激的10min等分10個時間段，在每個時間段內記錄每只大鼠上述3種行為，行為出現(xiàn)即為1，否則為0。10min內觀察的總分為0~10之間。得分基于2名觀察者的觀察結果平均而得，其中一人為雙盲控制。14個觀察日的前3d和最后3d的平均分用于統(tǒng)計分析。實驗結束時采集標本，檢測神經內分泌指標。

1.4 檢測方法

行為學實驗結束后立即斷頭取血，置于離心管內 ，在4℃ 溫 度 下 3000r·min-1離 心15min 取 上 清 液 -20℃保存待測。以ELISA法按照試劑盒的操作步驟分別進行檢測血清中皮質酮、5-羥色氨酸、多巴胺、皮質醇、腎上腺素、去甲腎上腺素含量的測定。

1.5 數(shù)據處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析和多重比較。顯著水平為p＜0.05。

2 結果與分析

2.1 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠行為學的影響

慢性情緒應激模型，是行為藥理學實驗中用于觀察抗焦慮藥物作用效果的可靠實驗模型。通過行為學觀察顯示：速溶蘆筍粉在給藥劑量下，各個劑量組與模型對照組比較攻擊行為、探究行為和修飾行為均減少，但統(tǒng)計結果均沒有顯著的差異，且各個劑量組之間比較統(tǒng)計結果均沒有顯著的差異。該結果表明，速溶蘆筍粉在給藥劑量下對焦慮動物的活動能力無明顯作用。

表1 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠行為學的影響（±SD，n=10）Table 1 The effect of IAP on the CSM test in rat behavior（>±SD，n=10）

表1 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠行為學的影響（±SD，n=10）Table 1 The effect of IAP on the CSM test in rat behavior（>±SD，n=10）

注：同列數(shù)值中標注不同字母表示對應組別間差異顯著（p<0.05）；表2、表3同。

修飾行為（次）空白對照組 - 0.5±0.3a 5.3±1.5a1.6± 0.2a模型對照組 - 2.1±0.7c 8.2±2.8c 2.2±1.1b速溶蘆筍粉低劑量組 0.5g/kg 1.9±1.0c 7.6±2.9c 1.9±1.1b速溶蘆筍粉中劑量組 1.0g/kg 1.8±1.1c 7.7±2.9c2.0± 1.2b速溶蘆筍粉高劑量組 2.0g/kg 1.7±1.0c 7.8±2.3c 2.1±0.4b酪蛋白水解物處理組 30mg/kg 1.1±0.9b 6.6±2.4b 1.9±0.8b安定處理組 3mg/kg 0.7±0.6a 6.8±2.1b1.9±1.1b組別 劑量 攻擊行為（次）探究行為（次）

2.2 速溶蘆筍粉對小鼠血漿中內分泌水平的影響

表2中結果表明：速溶蘆筍粉、酪蛋白水解物及安定在給藥劑量下可以改變焦慮動物的血清中主要神經遞質的含量，顯著降低血清皮質醇、腎上腺素和去甲腎上腺素濃度，顯著升高血清中5-羥色氨酸和多巴胺的濃度（p＜0.05）。速溶蘆筍粉的低、中、高劑量組對血清中皮質醇、腎上腺素、去甲腎上腺素、5-HT和多巴胺的作用趨勢完全一致，均是隨著速溶蘆筍粉劑量的增加，作用效果呈增強趨勢；各劑量組間差異均顯著（p＜0.05）。

2.3 速溶蘆筍粉對小鼠自主活動次數(shù)的影響

表2 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠內分泌水平的影響（±SD，n=10）Table 2 The serum neurotransmitters level rat in the CSM tes（t±SD，n=10）

表2 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠內分泌水平的影響（±SD，n=10）Table 2 The serum neurotransmitters level rat in the CSM tes（t±SD，n=10）

去甲腎上腺素（ng/mL）空白對照組 - 50.355±3.010a 0.462±0.010a 87.845±2.419a 54.851±2.387a 0.123±0.006a模型對照組 - 88.058±2.955f 0.287±0.012e 50.562±2.591e 92.481±1.849e 0.216±0.006f速溶蘆筍粉低劑量組 0.5g/kg 67.294±1.943e 0.327±0.011b 55.111±2.224b 74.111±2.256d 0.165±0.007e速溶蘆筍粉中劑量組 1.0g/kg 61.302±3.011c，d 0.342±0.011c 67.279±1.931c 67.985±2.912c 0.150±0.006c，d速溶蘆筍粉高劑量組 2.0g/kg 58.103±2.651b 0.368±0.015d 67.431±2.820d 62.539±2.446b 0.134±0.007b酪蛋白水解物處理組 30mg/kg 60.240±3.133b，c 0.341±0.011c 61.878±2.439c 66.096±2.330c 0.146±0.006c安定處理組 3mg/kg 63.533±3.382d 0.344±0.010c 63.677±2.322c 68.325±3.062c 0.154±0.005d組別 劑量 皮質醇（ng/mL）5-羥色胺酸（ng/mL）多巴胺（pg/mL）腎上腺素（E）（pg/mL）

表3 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠自主活動次數(shù)的影響（±SD，n=10）Table 3 The effect of IAP on the spontaneous motor activity in rat behavio（r±SD，n=10）

表3 速溶蘆筍粉對慢性情緒應激模型小鼠自主活動次數(shù)的影響（±SD，n=10）Table 3 The effect of IAP on the spontaneous motor activity in rat behavio（r±SD，n=10）

組別 劑量 15~20min（次） 30~35min（次） 60~65min（次）空白對照組 - 52±31c 34±8c 33±4c模型對照組 - 72±29a 67±18a 61±10a速溶蘆筍粉低劑量組 0.5g/kg 61±37b 59±14a 45±6b速溶蘆筍粉中劑量組 1.0g/kg 52±28c 42±11b 37±5c速溶蘆筍粉高劑量組 2.0g/kg 54±35c 38±9c 30±6d酪蛋白水解物處理組 30mg/kg 51±23c 35±10c 34±5c安定處理組 3mg/kg 45±33d 31±12c 28±7d

動物的自主活動情況反映其中樞神經系統(tǒng)的功能狀態(tài)，在陌生環(huán)境下中樞神經系統(tǒng)過度活動可以明顯增加自主的活動次數(shù)，一定劑量的抗精神病藥物可以減少焦慮模型鼠的自主活動次數(shù)。利用YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀記錄給藥后不同時間點的小鼠自主活動情況。觀察小鼠自主活動次數(shù)，結果表明，與模型對照組比較，速溶蘆筍粉和安定在給藥劑量下可以減少小鼠的自主活動次數(shù)，顯著降低15min和60min兩個時間點的小鼠自主活動次數(shù)（p＜0.05）（表3）。

3 結論

研究表明，5-羥色胺酸在人和動物的焦慮反應中起重要作用，但是目前有兩種不同的解釋，一種理論認為5-羥色胺酸過多導致了焦慮，而另一種理論認為5-HT缺乏導致了焦慮[10]。在本實驗中，空白對照組的5-HT含量顯著高于模型對照組，而IAP低、中、高劑量組的5-HT含量均高于模型對照組，表明在本次實驗中，5-HT缺乏導致了焦慮。

速溶蘆筍粉、安定及酪蛋白水解物對慢性應激性模型所致的焦慮（動物模型）有一定的緩解作用，并且隨著速溶蘆筍粉劑量的增加，作用效果呈增強趨勢。速溶蘆筍粉能降低應急狀態(tài)下血清皮質醇濃度（壓力狀態(tài)的重要生化指標），減少小鼠自主活動對陌生環(huán)境下中樞神經系統(tǒng)過度活動有一定抑制作用；速溶蘆筍粉能顯著升高血清中5-HT水平。初步認定速溶蘆筍粉抗焦慮的活性物質為蘆筍水提取物，其發(fā)揮抗焦慮的作用機制可能為提高中樞神經傳遞介質5-HT和多巴胺的含量有關。

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Study on anxiolytic activity of the instant asparagus powder in rats

MA Shu-feng2，TANG Jian-ya1，2，HE Chen-meng1，2，YAN Qian-wen2，SUN Jin2，*，HUANG Yun-xiang3
（1.State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；2.School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；3.Asparagus Engineering Research Centers of Hebei Province，Qinhuangdao 066600，China）

Objective：To study anxiolytic activity of the instant asparagus powder.Methods：70 healthy Sprague-Dawley male rats were randomly divided into 7 groups according to their weight for daily intragastric administration of drugs：the instant asparagus powder low-dose（IAP-l 0.5g/kg），medium-dose（IAP-m 1.0g/kg），high-dose（IAP-h 2.0g/kg） ，the positive Caseinate Hydrolyzate group （CTH 30mg/kg） ，Diazepam control group（DZP 3mg/kg） and normal control group.In this test，adopting the model of chronic emotional stress，the effect of anti-anxiety of the instant asparagus powder on the behavior and endocrine level was observed.Results：The results of IAP behavior showed the instant asparagus powder low-dose group and medium-dose group had anxiolytic trend，while comparing with the normal control group in decreasing the exploration and preening behavior times of the anxiety animals ，but the statistical results had no significant differences （p ＞0.05 ）.The results of IAP endocrine level showed that on the anxiety model，the instant asparagus powder low-dose ，medium-dose and high-dose could obviously increase the concentrations of 5-HT and Dopamine in rats’serum （p ＜0.05） and also obviously decrease the concentrations of Cortisol，Epinephrine and Noradrenaline in rats’ serum （p＜0.05）.The instant asparagus powder that were given dose could obviously decrease the the locomotor activity times of rats at two points of 15min and 60min （p＜0.05）.Conclusion：The instant asparagus powder had obvious anti-anxiety activity.

instant asparagus powder；anti-anxiety；rats

TS255.1

A

1002-0306（2014）22-0340-03

10.13386/j.issn1002-0306.2014.22.066

2014－02－24

馬淑鳳（1978-），女，博士，高級實驗師，研究方向：食品科學與食品營養(yǎng)。

* 通訊作 者 ：孫進（1977-），男，博士，副教授，研究方向：食品科學與食品營養(yǎng)。

中央高?；究蒲袠I(yè)務費專項資金資助項目（JUSRP21115）；秦皇島市科學技術研究與發(fā)展計劃項目（20121107001）；江蘇高校優(yōu)勢學科建設工程資助項目；公益性行業(yè)（農業(yè)）科研專項經費項目（201303079）；河北省重大科技成果轉化專項項目（13042805Z）。