黑果枸杞功能性成分抗氧化活性及對(duì)線粒體的保護(hù)作用研究

夏 娜，趙麗鳳

（喀什師范學(xué)院葉爾羌綠洲生態(tài)與生物資源研究高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，喀什師范學(xué)院化環(huán)系，新疆喀什 844007）

黑果枸杞功能性成分抗氧化活性及對(duì)線粒體的保護(hù)作用研究

夏 娜，趙麗鳳

（喀什師范學(xué)院葉爾羌綠洲生態(tài)與生物資源研究高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，喀什師范學(xué)院化環(huán)系，新疆喀什 844007）

目的：研究黑果枸杞功能性成分（多糖、黃酮和多酚）的抗氧化活性及對(duì)線粒體的保護(hù)作用。方法：對(duì)黑果枸杞多糖、黃酮和多酚功能性成分分別進(jìn)行提取，測(cè)定這三種成分對(duì)二苯代苦味?；―PPH）、羥自由基（·OH）以及超氧陰 離 子 自由基（O2-·）的 清除 能 力 ，以 及 對(duì) 小 鼠肝臟 線 粒 體 腫 脹 度和 丙 二 醛（MDA）含 量 ，評(píng) 價(jià)黑 果 枸 杞 功 能 性 成 分 抗氧化活性及對(duì)線粒體的保護(hù)作用。結(jié)果：黑果枸杞中多糖、黃酮和多酚類物質(zhì)的含量分別為30.6、21.3、和49.5mg/g（以干基計(jì)，md）。黑果枸杞黃酮和多酚清除DPPH自由基、·OH和O2-·的能力強(qiáng)于多糖。黑果枸杞多糖，黃酮及多酚提取物對(duì)DPPH自由基的清除率分別為52.5%，72.4%，82.3%；對(duì)·OH的清除率分別為48.2%，56.6%，75.8%；對(duì)O2-·的清除率分別16.1%，40.7%，53.3%。黑果枸杞黃酮（p＜0.01）和多酚（p＜0.01）能顯著抑制FeSO4-VC引起的線粒體腫脹，黑果枸杞黃酮和多酚能顯著降低線粒體MDA的含量（p＜0.05）。結(jié)論：黑果枸杞多糖、黃酮和多酚具有抗氧化活性，黃酮和多酚對(duì)線粒體的保護(hù)作用強(qiáng)于多糖。

黑果枸杞，多糖提取物，黃酮提取物，多酚提取物，線粒體

黑果枸杞（Lycium ruthenicum）是茄科枸杞屬的多年生耐鹽、抗旱灌木，因其果實(shí)成熟后呈紫黑色而得名。它廣泛分布于我國(guó)西北地區(qū)，是民族醫(yī)藥的常用藥材，在藏藥中被稱為“旁瑪”，收載于《四部醫(yī)典》、《晶珠本草》等藏醫(yī)藥經(jīng)典著作，用來(lái)治療心熱病、心臟病等疾病[1]；《維吾爾藥志》記載可用其果實(shí)及根皮治療尿道結(jié)石，牙齦出血等癥狀[2]。研究表明黑果枸杞的含有多糖、黃酮、色素等活性物質(zhì)，具有良好的抗氧化性能[3-6]，同時(shí)具有調(diào)節(jié)血糖和血脂的作用[7-8]。

大量研究表明，體內(nèi)活性氧自由基的過(guò)度生成或/和清除減少造成的氧化應(yīng)激參與了許多慢性疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程[9]?；钚匝踝杂苫饕ǔ蹶庪x子自由基和羥自由基等。超氧陰離子自由基產(chǎn)生的最早，是各種自由基的源頭，能使細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧 化 ，繼 而 損 傷 細(xì) 胞[10]；羥 自 由 基 可 使DNA突 變 ，引發(fā)癌基因活化和抑癌基因失活[11]。同時(shí)，線粒體既是自由基產(chǎn)生的主要場(chǎng)所，又是自由基作用的敏感部位。在病理情況下，線粒體電子傳遞損傷是活性氧自由 基 的 主 要 來(lái) 源[12]，因 此 ，以 線 粒 體 作 為 靶 標(biāo) ，通 過(guò)預(yù)防線粒體損傷或研究調(diào)控線粒體功能是緩解氧化損傷的重要途徑[13-14]。天然抗氧化劑以其安全和無(wú)毒副作用的優(yōu)點(diǎn)，受到普遍關(guān)注，從植物中尋找天然抗氧化劑干預(yù)氧化應(yīng)激相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展是當(dāng)前功能性食品的研究熱點(diǎn)。

研究發(fā)現(xiàn)，黑果枸杞提取物有強(qiáng)的抗氧化功效，是一種潛在的天然抗氧化劑，其中多糖、色素以及黃酮類物質(zhì)含量較高，具有明顯抗氧化活性[3-6]。然而，關(guān)于黑果枸杞中多酚類化合物的研究較少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑果枸杞中總多糖、總黃酮和總多酚的抗氧化性進(jìn)行探討，并以FeSO4-VC誘導(dǎo)肝臟線粒體損傷模型初步研究黑果枸杞功能性活性物質(zhì)在線粒體損傷相關(guān)疾病方面的應(yīng)用，以期為黑果枸杞功效的探究和以線粒體為靶標(biāo)的產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黑果枸杞 采摘于新疆吐魯番盆地，采摘后，將原料洗凈、晾干，80℃烘干3h，粉碎，過(guò)35目篩，貯存于干燥箱中備用；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、鄰 二 氮 菲 Sigma-Aldrich 公 司 ；沒(méi) 食 子酸 天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心；葡萄糖 江蘇強(qiáng)盛化工有限公司；蘆丁 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鎢酸鈉 成都科龍化工試劑廠；鉬酸鈉 上海強(qiáng)順化學(xué)試劑有限公司；過(guò)硫酸鉀、濃磷酸、濃鹽酸、硫酸鋰、亞硝酸鈉、硝酸鋁等 均為分析純。

SP-722E可見分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司；YP202N電子天平 上海精密科學(xué)儀器有限公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋 江蘇金壇市城西曉陽(yáng)電子儀器廠；KQ3200E超聲波清洗機(jī) 蘇州昆山市超聲儀器有限公司；RE-201D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；6202小型高速粉碎機(jī) 臺(tái)灣欣鎮(zhèn)企業(yè)有限公司。

1.2 黑果枸杞功能性成分的提取和測(cè)定

1.2.1 黑果枸杞多糖的提取和測(cè)定 準(zhǔn)確稱取黑果枸杞干粉10.0g，加入200mL蒸餾水，于95℃下回流提取4h，將浸提液于5000r/min離心10min，抽濾后將提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，加入4倍體積的無(wú)水乙醇過(guò)夜沉淀，離心（5000r/min，10min）取沉淀，將沉淀用適量蒸餾水復(fù)溶后，定容至100mL，混勻，于4℃下避光保存，用于后續(xù)黑果枸杞多糖相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

采用苯酚-硫酸法對(duì)提取的多糖定量，以葡萄糖當(dāng)量表示[15]。準(zhǔn)確稱取葡萄糖10.0mg，蒸餾水溶解并定容至100mL，配制成0.1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取0～1.2mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液分別置于10mL比色管中，用蒸餾水補(bǔ)至2.0mL，加入1.0mL 6%苯酚試劑，混勻，迅速加入濃硫酸5.0mL，混勻后，放置10min，于沸水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫，以試劑為空白參比液，490nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。取一定量的黑果枸杞多糖溶液，按上述方法測(cè)定其吸光度值。

1.2.2 黑果枸杞黃酮的提取和測(cè)定 按1.2.1的方法，將加入4倍體積的無(wú)水乙醇過(guò)夜沉淀，離心（5000r/min，10min）后取上清液，減壓濃縮后，定容至100mL，混勻，于4℃下避光保存，用于后續(xù)黑果枸杞黃酮相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

采用硝酸鋁-亞硝酸鈉-氫氧化鈉法測(cè)定黃酮含量，以蘆丁當(dāng)量表示[16]。準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20.0mg，用蒸餾水溶解并定容至100mL，配制成200mg/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取0～1.0mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mL比色管中，用蒸餾水補(bǔ)至1mL，加入0.3mL 10%（w/w）亞硝酸溶液，室溫避光靜置6min，加入0.3mL 5%（w/w）硝酸鋁溶液，室溫避光靜置6min，最后加入1mol/L的NaOH溶液4mL，蒸餾水定容至10mL，避光靜置15min，于520nm處測(cè)定吸光度值。取一定量的黑果枸杞多糖溶液，按上述方法測(cè)定其吸光度值。

1.2.3 黑果枸杞多酚的提取和測(cè)定 取黑果枸杞10.0g，加入30%的乙醇100mL，60℃水浴回流3h，離心（5000r/min，10min）取上清液，經(jīng)過(guò)減壓濃縮，定容至100mL，于4℃下避光保存，用于后續(xù)黑果枸杞多酚相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

采用福林酚法測(cè)定總酚含量，以沒(méi)食子酸當(dāng)量表示[17]。福林酚工作液配制：在1L磨口回流裝置內(nèi)加入鉬酸鈉12.5g，鎢酸鈉50.0g，85%磷酸25mL，37%鹽酸50mL，蒸餾水350mL，充分混勻后，以小火回流10h，回流過(guò)程中保持緩慢冒氣泡狀態(tài)。加入硫酸鋰75.0g，蒸餾水25mL，數(shù)滴溴水，然后繼續(xù)加熱至沸騰，維持15min，得到金黃色溶液，蒸餾水定容至500mL，置于冰箱中冷藏備用，臨用時(shí)稀釋一倍。準(zhǔn)確稱取10.0mg沒(méi)食子酸，蒸餾水溶解并定容至100mL，配制成0.1g/L的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取0～1.0mL的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL比色管中，加入蒸餾水補(bǔ)至1mL，加入1mL福林酚試劑，搖勻靜置30s后，加入10%（w/w）Na2CO3溶液3mL，蒸餾水定容至10mL，避光靜置30min，于764nm處測(cè)定吸光度值。取一定量的黑果枸杞多糖溶液，按上述方法測(cè)定其吸光度值。

1.3 抗氧化活性測(cè)定

1.3.1 清除DPPH自由基的測(cè)定[18]準(zhǔn)確稱取25mg DPPH，溶解于500mL無(wú)水乙醇中，置于棕色瓶中4℃避光保存。用0.2mL無(wú)水乙醇與2.8mL DPPH工作液，混勻，避光靜置30min，在517nm下測(cè)吸光度（A對(duì)照）。把黑果枸杞多糖、黃酮和多酚提取液分別稀釋成不同質(zhì)量濃度，吸取0.2mL稀釋的待測(cè)樣品，加入2.8mL DPPH工作液，混勻，避光靜置30min，在517nm下測(cè)吸光度（A樣品）。DPPH自由基清除率（%）=（A對(duì)照－A樣品）/A對(duì)照×100。

1.3.2 清除羥自由基的測(cè)定[19]在10mL比色管中加入0.75mmol/L pH為7.4的磷酸緩沖液1.0mL，260μg/mL番 紅 0.2mL，2mmol/L EDTA 0.375mL，2mmol/L FeSO42mL，加入1mL不同質(zhì)量濃度的待測(cè)樣品溶液，充分混勻，再加入0.1%H2O21mL，40℃水浴加熱30min，于520nm處測(cè)定其吸光度值（A樣品）?？瞻捉M以等體積的蒸餾水代替樣品溶液（A空白），對(duì)照組以等體積的蒸餾水代替樣品溶液和FeSO4溶液（A對(duì)照）?！H清除率（%）=（A樣品－A空白）/（A對(duì)照－A空白）×100。

1.3.3 抑 制 超 氧 陰 離 子 生 成[20]取 5mL，pH8.2，50mmol/L的Tris-HCl緩沖液。2mL不同質(zhì)量濃度的待測(cè)樣品，混勻后在25℃水浴中保溫20min，取出后加入 3mmol/L 的 鄰 苯 三 酚 0.5mL（用 10mmol/L HCl配制），迅速搖勻后倒入比色皿中，420nm下每30s測(cè)定吸光度值（A樣品）?？瞻坠苡谜麴s水代替待測(cè)樣品和鄰苯三酚的HCl溶液（A空白）；對(duì)照管用蒸餾水代替待測(cè)樣品（A對(duì)照）；待測(cè)樣品空白對(duì)照用10mmol/L HCl溶液代替鄰苯三酚的HCl溶液（A樣品對(duì)照）。O2-·抑制率（%）=[1-（A樣品－A樣品對(duì)照）/（A對(duì)照－A空白）] ×100。

1.4 小鼠肝臟線粒體分離

取新鮮的小鼠肝臟組織，以冷的生理鹽水洗凈，吸干表面水分，按1∶9的比例加入預(yù)冷的生理鹽水溶液，用玻璃勻漿器在冰浴中勻漿，制成10%的肝組織勻漿液。在4℃下3000r/min離心15min，收集上清液，再以12000r/min離心20min，收集沉淀，并用生理鹽水洗滌2次。以生理鹽水重懸線粒體，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量，調(diào)整成0.5mg/mL的線粒體懸浮液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 線粒體的保護(hù)作用

分別取0.2mL按上述方法提取的不同質(zhì)量濃度的各成分提取液（0.6mg/mL的多糖提取液，0.42mg/mL黃酮提取液，0.48mg/mL多酚提取液）；線粒體懸浮液3.0mL，0.5mmol/L FeSO40.4mL，0.5mmol/L VC溶液0.4mL，迅速混勻，37℃溫浴30min，以生理鹽水調(diào)零，于520nm處測(cè)定0min和30min時(shí)的吸光度，以該值表示線粒體的腫脹程度[21]。正常組以等體積生理鹽水替代樣品及FeSO4和VC溶液，對(duì)照組以等體積的生理鹽水替代樣品溶液。

將測(cè)定完成吸光度的樣品置于-20℃保存，測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的含量，MDA的含量的測(cè)定參照試劑盒方法進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)SPASS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析，各組間比較用Duncan法。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑果枸杞多糖、黃酮和多酚含量的測(cè)定結(jié)果

分別以葡萄糖、蘆丁和沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)測(cè)定所提取的黑果枸杞中多糖、黃酮和多酚提取液中多糖、黃酮及多酚的含量。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如表1所示。

經(jīng)表1回歸方程計(jì)算出提取的黑果枸杞多糖、黃酮及多酚提取液中多糖、黃酮及多酚的含量，黑果枸杞中多糖、黃酮及多酚的含量以黑果枸杞干重表示，如由表2所示。黑果枸杞多糖、黃酮和多酚的含量分別為30.6、21.3、49.5mg/g（以干基計(jì)）。黑果枸杞中多酚含量最高，其次是多糖，黃酮含量相對(duì)較少。

表1 葡萄糖、蘆丁和沒(méi)食子酸含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Table 1 Regression equations of glucose，rutin and gallic acid

表2 黑果枸杞中多糖、黃酮和多酚含量Table 2 Contents of polysaccharides，flaconoids and polyphenols in Lycium ruthenicum

2.2 黑果枸杞的抗氧化活性

2.2.1 黑果枸杞多糖的抗氧化活性 由圖1可知，黑果枸杞多糖對(duì)DPPH自由基，·OH和O2-·具有較好的清除能力，且隨著黑果枸杞多糖質(zhì)量濃度的增加，對(duì)自由基的清除效果增強(qiáng)。黑果枸杞對(duì)DPPH自由基較好的清除能力，且隨著質(zhì)量濃度的增加，清除能力增強(qiáng)，最大達(dá)到52.5%。當(dāng)黑果枸杞多糖質(zhì)量濃度達(dá)到0.2mg/mL時(shí)，質(zhì)量濃度的增加對(duì)·OH清除影響較小，最大清除率達(dá)到48.2%。黑果枸杞多糖對(duì)O2-·的具有一定的清除作用，當(dāng)質(zhì)量濃度小大于0.4mg/mL時(shí)，隨著質(zhì)量濃度的增加對(duì)O2-·的清除能力影響較小，當(dāng)黑果枸杞多糖質(zhì)量濃度達(dá)到0.6mg/mL時(shí)，對(duì)O2-·的清除能力增加，最大清除率為16.1%。

圖1 黑果枸杞多糖對(duì)DPPH自由基，羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）的清除能力Fig.1 Scavenging rates of polysaccharides from Lycium ruthenicum against DPPH，hydroxyl free radicals and superoxide anion free radicals

2.2.2 黑果枸杞黃酮的抗氧化活性 由圖2可知，黑果枸杞黃酮對(duì)DPPH自由基，·OH和O2-·具有極好的清除能力，隨著黑果枸杞黃酮質(zhì)量濃度的增加，清除作用增強(qiáng)。當(dāng)黑果枸杞黃酮質(zhì)量濃度大于0.42mg/mL時(shí)，隨著質(zhì)量濃度的增加對(duì)DPPH自由基和·OH清除能力影響不大，達(dá)到72.4%和56.6%。當(dāng)黑果枸杞黃酮質(zhì) 量 濃 度 達(dá) 到0.21mg/mL時(shí) ，對(duì) O2-·的 清 除 率 達(dá) 到38.2%，之后隨著質(zhì)量濃度的增加對(duì)O2-·的清除能力影響不大，最大清除率為40.7%。

圖2 黑果枸杞黃酮對(duì)DPPH自由基，羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）的清除能力Fig.2 Scavenging rates of flavonoids from Lycium ruthenicum against DPPH，hydroxyl free radicals and superoxide anion free radicals

2.2.3 黑果枸杞多酚的抗氧化活性 由圖3可知，黑果 枸 杞 多 酚 對(duì) DPPH 自 由 基 ，·OH 和 O2-·均 具 有 較強(qiáng)的清除能力。當(dāng)黑果枸杞多酚的質(zhì)量濃度達(dá)到0.24mg/mL時(shí)，黑果枸杞多酚對(duì)DPPH自由基清除率達(dá)到68.3%，隨著黑果枸杞質(zhì)量濃度的增加，對(duì)DPPH自由基的清除作用增強(qiáng)，最大達(dá)到82.3%。黑果枸杞多酚質(zhì)量濃度大于0.48mg/mL時(shí)，對(duì)·OH的清除能力影響不大，最大清除率達(dá)到75.8%。隨著質(zhì)量的增加，黑果枸杞多酚對(duì)O2-·的清除能力增強(qiáng)，最大達(dá)到53.3%。

圖3 黑果枸杞多酚對(duì)DPPH自由基，羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）的清除能力Fig.3 Scavenging rates of polyphenols from Lycium ruthenicum against DPPH，hydroxyl free radicals and superoxide anion free radicals

2.3 黑果枸杞多糖、黃酮和多酚對(duì)線粒體的保護(hù)作用

2.3.1 對(duì)線粒體腫脹度的影響 由圖4可知，F(xiàn)eSO4和VC對(duì)小鼠肝臟線粒體造成了損傷，與正常組相比，對(duì)照組在520nm吸光度值極顯著降低（p＜0.01）。添加不同質(zhì)量濃度的黑果枸杞提取物后，線粒體腫脹得到緩解。與對(duì)照組相比，添加0.6mg/mL的多糖提取液，A520顯著降低，但無(wú)顯著差異性；添加0.42mg/mL黃酮提取液或0.48mg/mL多酚提取液，腫脹度極顯著降低（p＜0.01）。

圖4 黑果枸杞提取物對(duì)線粒體腫脹度的影響Fig.4 Effect of Lycium ruthenicum extracts on mitochondrial membrane swelling

由圖5可知，黑果枸杞黃酮、多酚提取物能緩解FeSO4-VC造成的脂質(zhì)過(guò)氧化。與正常組相比，F(xiàn)eSO4-VC能極顯著增加小鼠肝臟線粒體MDA的含量（p＜0.01）。與對(duì)照組相比，添加0.42mg/mL黃酮提取液或0.48mg/mL多酚提取液能顯著降低小鼠肝臟線粒體MDA的含量（p＜0.05），而0.6mg/mL的多糖提取液能在一定程度上降低線粒體MDA的含量，但與對(duì)照組相比沒(méi)有顯著差異性。

圖5 黑果枸杞提取物對(duì)線粒體MDA含量的影響Fig.5 Effect of Lycium ruthenicum extracts on mitochondrial of MDA concentration

3 討論

自由基是需氧生物生理代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一類大分子，在正常情況下，體內(nèi)存在多種自由基清除途徑，從而維持體內(nèi)自由基產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡。該平衡一旦被破壞，將引發(fā)各種疾病，研究表明自由基代謝失衡與肥胖、心血管疾病、衰老等眾多疾病密切相關(guān)[9]。因此，提高機(jī)體的抗氧化能力對(duì)疾病的防治顯得尤為重要，而通過(guò)膳食添加抗氧化物質(zhì)則是提高機(jī)體的抗氧化能力的重要途徑。黑果枸杞是我國(guó)西北地區(qū)，民族醫(yī)藥的常用藥材，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外純化學(xué)反應(yīng)體系以及體外生物模擬反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，探討黑果枸杞功能性活性成分對(duì)自由基的清除作用以及線粒體保護(hù)作用。

DPPH自由基是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，被廣泛用于物質(zhì)的抗氧化活性分析，而超氧陰離子自由基和羥自由基是造成機(jī)體氧化損傷的主要因素。本實(shí)驗(yàn)以DPPH、羥自由基以及超氧陰離子自由基的清除率為指標(biāo)，研究黑果枸杞多糖、黃酮和多酚的體外抗氧化活性。前期研究結(jié)果顯示，黑果枸杞提取物具有良好的自由基清除能力。汪河濱等研究顯示黑果枸杞色素對(duì)DPPH自由基、羥自由基以及超氧陰離子自由基均具有良好的清除作用[5]。李進(jìn)等研究結(jié)果認(rèn)為黑果枸杞葉黃酮增強(qiáng)小鼠血清羥自由基清除能力[3]。陳晨等研究顯示黑果枸杞的抗氧化能力指數(shù)為587μmoleTE/g[22]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黑果枸杞多糖、黃酮和多酚提取物均具有一定的體外抗氧化活性，它們?cè)谇宄齇2-·的能力弱于DPPH自由基和·OH，且整體上黑果枸杞總黃酮和總多酚的抗氧化能力強(qiáng)于總多糖。

線粒體是自由基產(chǎn)生的主要場(chǎng)所，它具有提供能量，調(diào)控細(xì)胞凋亡等多種生理功能[23-24]。同時(shí)線粒體是自由基作用的敏感場(chǎng)所，其膜上含有豐富的不飽和脂肪酸，極易受到自由基的攻擊，造成脂質(zhì)過(guò)氧化損傷以及線粒體膜結(jié)構(gòu)的改變，引起線粒體體積增大，從而導(dǎo)致線粒體腫脹[25]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)線粒體的腫脹度以及MDA的含量，評(píng)價(jià)提取的黑果枸杞多糖、黃酮和多酚對(duì)線粒體的保護(hù)作用。線粒體腫脹度反映了線粒體膜瞬間孔道的開放程度，因此，線粒體腫脹度是觀察線粒體膜通透性，評(píng)價(jià)線粒體功能的敏感指標(biāo)之一。FeSO4-VC通過(guò)誘導(dǎo)產(chǎn)生羥自由基，對(duì)線粒體膜產(chǎn)生損傷而致其腫脹，表現(xiàn)為在520nm處濁度下降，吸光度值降低。加入黑果枸杞提取物后，線粒體腫脹程度得到抑制，其中黑果枸杞黃酮和多酚添加組線粒體腫脹度與損傷組比極顯著降低（p＜0.01）。MDA是氧自由基攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化，并形成脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，是衡量線粒體氧化損傷的重要指標(biāo)[26]。黑果枸杞三種提取物均能降低線粒體MDA的含量，其中黑果枸杞黃酮和多酚提取物干預(yù)組中MDA的含量顯著低于損傷組（p＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黑果枸杞的三種提取物均能降低線粒體的腫脹度，抑制線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化程度，其中黑果枸杞黃酮和多酚提取物的效果強(qiáng)于多糖。

4 結(jié)論

研究結(jié)果顯示，黑果枸杞多糖、黃酮和多酚提取物具有清除自由基作用，同時(shí)能緩解FeSO4-VC造成的線粒體損傷，為黑果枸杞緩解線粒體損傷的研究提供了一些參考依據(jù)，然而其對(duì)線粒體的保護(hù)作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。下一步的研究工作將對(duì)提取物中總黃酮、總多酚和總多糖進(jìn)行進(jìn)一步分離、純化以及鑒定；同時(shí)通過(guò)不同的動(dòng)物模型，探討黑果枸杞提取物對(duì)疾病的防治作用，從提高抗氧化能力，免疫調(diào)節(jié)，凋亡等多重角度對(duì)黑果枸杞的功能性質(zhì)進(jìn)行研究，為黑果枸杞在功能性食品中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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Study on the antioxidant activity and protective effect on mitochondria of Lycium ruthenicum functional ingredients

XIA Na，ZHAO Li-feng
（The Key Laboratory of Ecology and Biological Resources in Yarkand Oasis at Colleges&Universities under the Department of Education of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Kashi Teacher Colloge，Kashi 844007，China）

Objective ： To study the antioxidant activity of Lycium ruthenicum （ polysaccharide ， flavonoids and polyphenols） extracts，as well as protective effect on mitochondrial.Methods：Polysaccharides，flavonoids and polyphenols were extracted from Lycium ruthenicum Murr.Comparison of their antioxidant activity was carried out by scavenging of DPPH radical，hydroxyl free radical（·OH） and superoxide anion radical（O2-·）.The inhibit effects of Lycium ruthenicum extracts on liver mitochondria swelling and malondialdehyde （MDA） content were measured.Results ：Lycium ruthenicum contains abundant polysaccharide ，flavonoids and polyphenols ， the contents of polysaccharide，flavonoids and polyphenols were 30.6mg/g，21.3mg/g and 49.5mg/g of dry Lycium ruthenicum，respectively.The free radical scavenging capacity of flavonoids and polyphenols from Lycium ruthenicum were stronger than that of polysaccharides.The free radical scavenging capacity of polysaccharides，flavonoids and polyphenols were 52.5% ，72.4%and 82.3%against DPPH free radicals，·OH 48.2% ，56.6%and 75.8%against·OH，16.1%，40.7%and 53.3%against O2-·，respectively.Flavonoids （p＜0.01） and polyphenols（p＜0.01） from Lycium ruthenicum were significantly inhibit mitochondria swelling caused by FeSO4and VC，and flavonoids and polyphenols can significantly reduce the mitochondrial MDA content（ p ＜ 0.05 ） .Conclusion ：Extracts from Lycium ruthenicum （ polysaccharides ，flavonoids and polyphenols ） had antioxidant activity and mitochondrial protection，flavonoids and polyphenols protection stronger than the polysaccharides of mitochondria.

Lycium ruthenicum；polysaccharide extract；flavonoid extract；polyphenols extract；mitochondria

TS255.1

A

1002-0306（2014）20-0162-06

10.13386/j.issn1002-0306.2014.20.027

2014－03－14

夏娜（1985-），女，碩士研究生，講師，研究方向：食品加工原理與技術(shù)。

新疆維吾爾自治區(qū)高校科研計(jì)劃項(xiàng)目（XJEDU2014S054）。