五個(gè)產(chǎn)地荔枝核中藥飲片抗氧化活性研究

黃曉兵，李積華，彭芍丹，2，龔 霄，袁 源，林麗靜，*

（1.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東湛江 524001；2.海南大學(xué)食品學(xué)院，海南?？?570228）

五個(gè)產(chǎn)地荔枝核中藥飲片抗氧化活性研究

黃曉兵1，李積華1，彭芍丹1，2，龔 霄1，袁 源1，林麗靜1，*

（1.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東湛江 524001；2.海南大學(xué)食品學(xué)院，海南?？?570228）

為了比較五個(gè)產(chǎn)地荔枝核中藥飲片的體外抗氧化活性，分別采用DPPH法、ABTS法和總抗氧化能力測(cè)試法（T-AOC）對(duì)5個(gè)產(chǎn)地荔枝核的90%乙醇提取物進(jìn)行抗氧化活性測(cè)定，同時(shí)對(duì)其中的活性成分包括多酚、黃酮和皂苷及其含量與抗氧化活性的相關(guān)性進(jìn)行了初步分析。結(jié)果表明：廣東惠東荔枝核中多酚和黃酮含量最高，其次為陽(yáng)西荔枝核，廣西靈山荔枝核多酚和黃酮含量均最低；陽(yáng)西荔枝核中皂苷含量最高，其他產(chǎn)地皂苷含量從高到低依次為廣東惠東、從化、東莞和廣西靈山。各產(chǎn)地荔枝核提取液對(duì)DPPH自由基的清除率差異均不顯著，而對(duì)ABTS+自由基的清除率差異顯著，其中廣東陽(yáng)西荔枝核的清除能力最強(qiáng)，總抗氧化能力測(cè)定結(jié)果表明廣東從化荔枝核抗氧化能力最強(qiáng)，廣西靈山荔枝核最弱?；钚晕镔|(zhì)與抗氧化活性相關(guān)性分析表明多酚、黃酮和皂苷均與抗氧化活性呈現(xiàn)一定的正相關(guān)。

荔枝核，中藥飲片，抗氧化，相關(guān)性

荔 枝（Litchi Chinensis Sonn），與 香 蕉 、菠 蘿 、龍眼并稱“南國(guó)四大果品”，是一種無(wú)患子科荔枝屬的亞熱帶常綠果樹(shù)，原產(chǎn)中國(guó)，目前在我國(guó)主要分布于廣東、廣西、福建、四川、臺(tái)灣、云南等省區(qū)。其果核為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有抗炎、理氣、退熱、散結(jié)、止痛之功效，現(xiàn)代藥理研究也表明荔枝核有降血脂、降血糖[1]、抑制腫瘤[2]、抗氧化[3-5]等功效，其所表現(xiàn)藥理活性的主要有效部位為黃酮類化合物和總皂苷[6]。目前對(duì)于廣東、廣西等荔枝主產(chǎn)區(qū)荔枝核中藥飲片的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究較少有報(bào)道，本研究以廣東廣西兩省五個(gè)產(chǎn)地的荔枝核飲片為研究對(duì)象，以多酚、黃酮、總皂苷和體外抗氧化活性為指標(biāo)，考察五個(gè)產(chǎn)地荔枝核飲片的品質(zhì)差異，并初步分析多酚、黃酮和皂苷含量與抗氧化活性的相關(guān)性，為荔枝核中藥飲片的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

荔枝核中藥飲片 分別購(gòu)于廣東陽(yáng)西縣、廣東惠東縣、廣東東莞市、廣東從化市和廣西靈山縣的五個(gè)中藥材批發(fā)市場(chǎng)；甲醇、碳酸鈉、亞硝酸鈉、氯化鋁、氫氧化鈉、高氯酸、冰醋酸 廣東光華科技股份有限公司，分析純；福林-酚（Folin&Ciocalteu’s phenol reagent）、香草醛、沒(méi)食子酸、兒茶素 Sigma公司，色譜純；人參皂苷Re 上海源葉生物科技有限公司，色譜純；總抗氧化能力（T-AOC）測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所。

DHG-9426A恒溫干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DFT-250高速萬(wàn)能粉碎機(jī) 上海鼎廣機(jī)械設(shè)備有限公司；752N紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海精科實(shí)業(yè)有限公司；LR4002旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國(guó)Heidolph公司；1006-28R超聲破碎儀 深圳市好順超聲設(shè)備有限公司；RBL-FD-1真空冷凍干燥機(jī) 北京若比鄰電子信息技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備 分別稱取各荔枝核飲片800g，用5倍90%乙醇在功率為360W的超聲提取器中進(jìn)行提取，提取3次，每次30min，過(guò)濾合并三次濾液，在65℃下真空濃縮至無(wú)醇味，使其體積約為800mL，不到800mL的用水補(bǔ)齊。取其中1mL用甲醇稀釋到50mL，即為樣品液，4℃下避光保存，并分別進(jìn)行活性物質(zhì)測(cè)定及抗氧化活性研究。

1.2.2 多酚含量的測(cè)定 用福林-酚法進(jìn)行測(cè)定，按照Singleton V&Rossi JA[7]的方法進(jìn)行改進(jìn)，具體為：在10mL容量瓶中加入0.4mL樣品溶液，然后依次加入3.6mL水和0.4mL福林酚試劑，充分搖勻，6min后加入4mL 7%的碳酸鈉溶液，搖勻后室溫避光保存90min，以無(wú)水甲醇代替樣品溶液作為空白對(duì)照在750nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。按照上述操作，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中多酚含量以沒(méi)食子酸當(dāng)量表示。

1.2.3 黃酮含量的測(cè)定 吸取1mL樣品液按照J(rèn)ia等[8]所描述的亞硝酸鹽法進(jìn)行測(cè)定黃酮含量，樣品中黃酮含量以兒茶素當(dāng)量表示。

1.2.4 總皂苷含量的測(cè)定 根據(jù)方歡樂(lè)等[9]所述香草醛-高氯酸比色法進(jìn)行測(cè)定。稱取人參皂苷Re制備標(biāo)準(zhǔn)溶液，與實(shí)驗(yàn)試劑反應(yīng)后，全波掃描顯示反應(yīng)液在560nm處有最大吸收峰，以人參皂苷Re作標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到A=0.0062C-0.0098（R2=0.9991），樣品中總皂苷含量用人參皂苷Re來(lái)表示。

1.2.5 DPPH自由基清除活性 DPPH自由基清除活性的測(cè)定參考Xu BJ等[10]所述方法并稍加改進(jìn)，即吸取0.2mL樣品液與3.8mL 0.5mmol/L的DPPH無(wú)水甲醇溶液混合，封口后室溫下避光保存30min，在517nm處以無(wú)水甲醇作為空白測(cè)定吸光度（OD），以無(wú)水甲醇代替樣品作為對(duì)照組，結(jié)果以DPPH自由基清除率表示，即，DPPH清除率（%）=（1-OD對(duì)照/OD樣品）×100。

1.2.6 ABTS+自 由 基清除 活 性 對(duì)de Souza VR等[11]所描述方法加以改進(jìn)，用蒸餾水配制7mmol/L ABTS溶液和濃度為140mmol/L的過(guò)硫酸鉀溶液，取5mL ABTS溶液和88μL過(guò)硫酸鉀溶液，混合后室溫避光反應(yīng)12~16h生成ABTS+自由基，用無(wú)水甲醇稀釋至734nm波長(zhǎng)下吸光值為0.7±0.05作為工作液。測(cè)定時(shí)，取樣品液40μL于8mL工作液中，混合后30℃水浴反應(yīng)6min，以無(wú)水甲醇為空白，以無(wú)水甲醇代替樣品作為對(duì)照組，在734nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，結(jié)果用ABTS+自由基抑制率表示，即，ABTS+自由基清除率（%）=（1-OD對(duì)照/OD樣品）×100。

1.2.7 總抗氧化能力測(cè)定 根據(jù)南京建成生物工程研究所總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒的方法進(jìn)行測(cè)定，其定義為：在37℃時(shí)，每分鐘單位樣品，使反應(yīng)體系的吸光度（OD），每增加0.01時(shí)，為一個(gè)總抗氧化能力單位。具體操作為：取樣品溶液1mL用甲醇稀釋10倍，取其中0.1mL作為待測(cè)樣品，按照表1的描述進(jìn)行加樣，混勻后放置10min，用水調(diào)零后在520nm波長(zhǎng)下測(cè)各管吸光度?？寡趸芰τ?jì)算如公式（1）所示。

總 抗 氧 化 能 力[（T-AOC）-（ODT-ODC）/0.01/30 ×反應(yīng)液總量/取樣量×稀釋倍數(shù) 式（1）

其中，ODT和ODC分別為測(cè)試管和對(duì)照管的吸光值。

表1 組織中T-AOC測(cè)試操作表Table 1 Operation of total antioxidant capacity assay method

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均重復(fù)三次取平均值，并用SPSS 20.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 五個(gè)產(chǎn)地荔枝核活性物質(zhì)含量分析

對(duì)五個(gè)產(chǎn)地荔枝核中多酚、黃酮和皂苷含量進(jìn)行比較，結(jié)果如圖1~圖3所示。五個(gè)產(chǎn)地荔枝核樣品液中多酚含量差異顯著，其中惠東荔枝核樣品液中含量最高，為788.37μg/mL，其次為陽(yáng)西、從化、東莞產(chǎn)荔枝核，廣西靈山荔枝核多酚含量最少，為474.67μg/mL。各個(gè)產(chǎn)地荔枝核中黃酮含量高低順序與多酚一致，但黃酮含量最高的惠東荔枝核與陽(yáng)西產(chǎn)荔枝核中含量差異不顯著，黃酮含量最少的廣西荔枝核僅比東莞荔枝核少10.32μg/mL，二者差異也不顯著，二者中皂苷含量差異也不顯著，其中廣西荔枝核皂苷含量最少為331.94μg/mL，而陽(yáng)西荔枝核中皂 苷 含 量 最 高 為546.45μg/mL，與 惠 東 荔 枝 核 的521.45μg/mL差異不顯著?？偟膩?lái)看，五個(gè)產(chǎn)地荔枝核三類活性物質(zhì)含量高低走勢(shì)基本一致，從一個(gè)側(cè)面反映了所選廣東陽(yáng)西和惠東荔枝核飲片的有效成分含量相對(duì)較高，而廣東東莞和廣西靈山荔枝核的活性成分含量相對(duì)較低，其藥效的差異則需要進(jìn)一步探討；同時(shí)可以看出荔枝核中多酚的相對(duì)含量較高，其 次 為 皂苷 ，黃 酮 含 量 最 少 ，這 與 楊 燕 軍 等[12]的報(bào)道基本一致。

圖1 不同產(chǎn)地荔枝核乙醇提取物中多酚含量Fig.1 Phenolic content of ethanol extracts from different producing areas

圖2 不同產(chǎn)地荔枝核乙醇提取物中黃酮含量Fig.2 Total flavonoid content of ethanol extracts from different producing areas

圖3 不同產(chǎn)地荔枝核乙醇提取物中總皂苷含量Fig.3 Saponin content of ethanol extracts from different producing areas

2.2 五個(gè)產(chǎn)地荔枝核抗氧化活性研究

圖4~圖6分別以DPPH法、ABTS法和總抗氧化能力測(cè)定法（T-AOC）三種方法評(píng)價(jià)五個(gè)產(chǎn)地荔枝核中藥飲片的抗氧化活性。各產(chǎn)地荔枝核樣品液對(duì)DPPH自由基的清除能力差異不顯著（圖4），其中陽(yáng)西和從化樣品的清除能力相當(dāng)，對(duì)DPPH自由基抑制率均為65.01%，惠東次之為64.90%，廣西靈山最弱為49.40%；而各產(chǎn)地荔枝核對(duì)ABTS+自由基的清除能力差異顯著（圖5），清除能力大小依次為：陽(yáng)西＞惠東＞從化＞東莞＞廣西；圖6中總抗氧化能力測(cè)定結(jié)果顯示，從化荔枝核的總抗氧化能力最強(qiáng)，其次為惠東和陽(yáng)西，最小為廣西。三種抗氧化測(cè)定方法所得結(jié)果不盡相同，但總體上有一定的規(guī)律性：所有測(cè)定方法中，廣西靈山荔枝核的抗氧化活性均較弱，東莞荔枝核的抗氧化活性稍強(qiáng)，而從化、陽(yáng)西和惠東三地荔枝核樣品的抗氧化活性均較強(qiáng)，這些差異產(chǎn)生的原因可能與產(chǎn)地、品種及加工方法等相關(guān)，其相關(guān)性還有待于深入研究。

圖4 不同產(chǎn)地荔枝核DPPH自由基清除率Fig.4 DPPH radical scavenging activity of extract from different producing areas

圖5 不同產(chǎn)地荔枝核ABTS+自由基清除率Fig.5 ABTS+radical scavenging activity of extract from different producing areas

圖6 不同產(chǎn)地荔枝核總抗氧化能力Fig.6 Total antioxidant capacity of extract from different producing areas

2.3 活性物質(zhì)與抗氧化活性的關(guān)系

為進(jìn)一步了解荔枝核中活性物質(zhì)與抗氧化活性的關(guān)系，對(duì)5個(gè)產(chǎn)地荔枝核中藥飲片中多酚、黃酮、皂苷含量與抗氧化活性進(jìn)行初步的相關(guān)性分析，結(jié)果如表2所示。由表2可知，多酚含量與DPPH自由基清除率存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系，Pearson相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.974，與總抗氧化能力T-AOC呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.929，而與ABTS+自由基清除率存在相關(guān)性但不顯著。黃酮含量與DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率和T-AOC均顯著相關(guān)，與DPPH自由基清除率的相關(guān)性最高，與ABTS+自由基清除率相關(guān)性最低?？傇碥蘸颗c與DPPH自由基清除率極顯著相關(guān)，與T-AOC顯著相關(guān)，而與ABTS清除率相關(guān)性不顯著。從整體看，多酚、黃酮及皂苷含量均與樣品的抗氧化活性存在一定的相關(guān)性，根據(jù)相關(guān)系數(shù)的大小判斷，皂苷及多酚含量對(duì)抗氧化性的貢獻(xiàn)較大，其次為黃酮，而更多的抗氧化成分需要深入進(jìn)行分析以便詳細(xì)了解其量效關(guān)系。

表2 活性物質(zhì)與抗氧化活性相關(guān)性分析Table 2 Pearson correlations among bioactive compounds and antioxidant activity

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)五個(gè)產(chǎn)地荔枝核中藥飲片抗氧化活性及其中有效成分含量的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)五個(gè)產(chǎn)地中陽(yáng)西、惠東和從化荔枝核樣品中的多酚、黃酮和皂苷的含量均較高，而東莞和廣西靈山樣品中三種有效成分含量較低；與此相應(yīng)，陽(yáng)西、惠東和從化荔枝核的抗氧化活性也較強(qiáng)，廣西靈山荔枝核活性最弱；五個(gè)產(chǎn)地荔枝樣品中三種有效成分與抗氧化活性初步相關(guān)性分析表明多酚、黃酮和皂苷與樣品的抗氧化活性存在正相關(guān)關(guān)系，其中皂苷、多酚含量與抗氧化活性相關(guān)性較大，黃酮次之。多酚、黃酮和皂苷含量及抗氧化活性大小在一定程度上反映了樣品的品質(zhì)優(yōu)劣與功效的強(qiáng)弱，因此對(duì)于荔枝核中藥飲片進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)監(jiān)測(cè)，有利于荔枝核飲片生產(chǎn)加工和市場(chǎng)的規(guī)范化。

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Study on the antioxidant activity of Chinese herbal medicine prepared from litchi（Litchi chinensis sonn）seed in five producing areas

HUANG Xiao-bing1，LI Ji-hua1，PENG Shao-dan1，2，GONG Xiao1，YUAN Yuan1，LIN Li-jing1，*
（1.Agricultural Products Processing Research Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Zhanjiang 524001，China；2.College of Food Science and Technology，Hainan University，Haikou 570228，China）

The antioxidant activity of litchi seed from five producing areas was estimated in vitro models using 1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH） method，2，2’-Azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）（ABTS）method and total antioxidant capacity（T-AOC） assay method.The content of phenolics，flavonoids and saponins was also determined，and the correlation analysis was carried out between the active constituent and antioxidant capacity.The results showed that the content of phenolics and flavonoids in the litchi seed produced in Huidong was the highest among the five places followed by that produced in Yangxi with the lowest content produced in Lingshan.In addition，the Yangxi litchi seed had the highest level of saponin followed by that of Huidong，Conghua，Dongguan and Lingshan in sequence.Furthermore，no significant difference was found about the DPPH radical scavenging capacity among litchi seeds from the five places，while the ABTS+radical scavenging capacity was significantly different and the Yangxi litchi seed had the strongest scavenging ability. The total antioxidant capacity of litchi seed in Conghua was the highest and that was lowest in Lingshan litchi. Moreover，certain positive correlation was found between the antioxidant activity and phenolics，flavonoids and saponins content in litchi seed.

litchi seed；Chinese herbal medicine；antioxidant；correlation

TS255.1

A

1002-0306（2014）22-0091-04

10.13386/j.issn1002-0306.2014.22.012

2014－01－17

黃曉兵（1986-），男，碩士研究生，研究實(shí)習(xí)員，研究方向：食品加工及天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)利用研究。

* 通訊作者：林麗靜（1978-），男，博士，副研究員，研究方向：食品加工與天然產(chǎn)物化學(xué)。

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)“特色熱帶亞熱帶果品加工關(guān)鍵技術(shù)研究與示范”（201303077-4）。