細(xì)胞色素P450酶4F2基因多態(tài)性對(duì)中國人服用華法林起始七天內(nèi)劑量的影響*

熊筱偉，劉紅，韓璐璐，婁瑩，華潞，李彥，李一石

細(xì)胞色素P450酶4F2基因多態(tài)性對(duì)中國人服用華法林起始七天內(nèi)劑量的影響*

熊筱偉，劉紅，韓璐璐，婁瑩，華潞，李彥，李一石

目的：研究細(xì)胞色素P450酶4F2（CYP4F2, rs2108622）基因多態(tài)性對(duì)中國漢族人群服用華法林起始七天內(nèi)劑量的影響。

華法林；CYP4F2基因多態(tài)性；初始劑量

(Chinese Circulation Journal, 2014,29:910.)

華法林是目前常用的口服抗凝藥，其抗凝效果同血藥濃度呈正相關(guān)性[1]。華法林藥物基因組學(xué)的研究明確了基因多態(tài)性對(duì)服用華法林患者的劑量差異有影響[2]。細(xì)胞色素P450酶2C9（CYP2C9），維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合物亞單位1（VKORC1, -1639G＞A）和細(xì)胞色素P450酶4F2（CYP4F2, rs2108622）的基因多態(tài)性在不同人群中對(duì)華法林的穩(wěn)定劑量均有顯著的影響[3-5]。對(duì)華法林初始劑量的影響，目前研究較多的是CYP2C9和VKORC1的基因多態(tài)性[6-8]，而有關(guān)CYP4F2基因多態(tài)性的研究較少。本研究旨在評(píng)價(jià)CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)中國漢族人服用華法林起始七天（初始階段）劑量的影響。

1 對(duì)象與方法

研究對(duì)象：本研究入選我院2008-05至2008-10因心臟瓣膜置換和2010-11至2011-12因肺栓塞在我院首次接受華法林抗凝治療，年齡≥18周歲，無肝、腎功能疾病及感染和腫瘤，無嚴(yán)重的心功能衰竭，服藥起始七天內(nèi)國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）至少1次進(jìn)入1.8≤INR≤3.0（治療窗）的患者271例，并檢測其CYP4F2基因多態(tài)性。所有患者均簽署書面知情同意書，試驗(yàn)經(jīng)由阜外心血管病醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)室檢測：依地酸（EDTA）抗凝采集患者外周靜脈全血4 ml，用脫氧核糖核酸（DNA）提取試劑盒（天根生化科技有限公司，北京）提取DNA后置于-80℃冰箱待測。利用直接測序的方法檢測CYP4F2基因型。

INR檢測及給藥：檢測患者華法林用藥前及用藥起始七天內(nèi)每天的INR值。根據(jù)INR基線值，初次華法林劑量為2～3 mg，此后每日劑量根據(jù)前一日INR值進(jìn)行調(diào)整?；颊咦≡河盟幤陂g均予以均衡適量飲食。

臨床觀察指標(biāo)：記錄所有患者年齡、性別、身高、體重，體表面積等人口學(xué)信息。記錄每日華法林劑量和INR檢測結(jié)果以及每位患者服藥后INR首次進(jìn)入治療窗的時(shí)間和服藥起始七天內(nèi)華法林的平均劑量。并記錄主要的合并疾病和用藥。

統(tǒng)計(jì)方法：利用計(jì)算機(jī)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。Hardy-Weinberg遺傳符合度及計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)；兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。多元線性回歸分析性別，年齡，體表面積，基因多態(tài)性和合并疾病及用藥對(duì)華法林劑量的影響。P＜0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1患者人口學(xué)特征及CYP4F2基因多態(tài)性分布

CYP4F2基因多態(tài)性的CC、CT和TT基因型基因變異比例分別為：57.20%，34.31%，8.49%，基因多態(tài)性分布符合Hardy-Weinberg規(guī)律（P＞0.05），該人群符合群體基因遺傳平衡。CC、CT和TT各基因型患者的性別、年齡、身高、體重等基線水平以及各基因型間合并疾病和合用藥情況差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表1

表1 271例患者人口學(xué)特征及CYP4F2基因多態(tài)性分布[例(%),

表1 271例患者人口學(xué)特征及CYP4F2基因多態(tài)性分布[例(%),

注：CYP4F2：細(xì)胞色素P450酶4F2

CC基因型(n=155) CT基因型(n=93) TT基因型(n=23)基因變異比例 (%) 57.20 34.31 8.49男74 (47.7) 41 (44.1) 10 (43.5)女81 (52.3) 52 (55.9) 13 (56.5)年齡 (歲) 52.02±12.49 52.15±13.14 51.00±14.78身高 (cm) 163.79±8.23 164.98±8.19 163.83±7.24體重 (kg) 63.50±12.14 63.41±11.83 62.30±11.34體表面積 (m2) 1.66±0.19 1.67±0.19 1.64±0.17合并房顫 47 (30.3) 28 (30.1) 8 (34.8)未合并房顫 108 (69.7) 65 (69.9) 15 (65.2)合用胺碘酮 25 (16.1) 21 (22.6) 4 (17.4)未合用胺碘酮 130 (83.9) 72 (77.4) 19 (82.6)合用他汀 39 (25.2) 25 (26.9) 5 (21.7)未合用他汀 116 (74.8) 68 (73.1) 18 (78.3)

2.2CYP4F2基因多態(tài)性的CC、CT和TT各基因型華法林初始劑量及INR首次進(jìn)入治療窗時(shí)間的比較

TT、CT/TT基因型的平均華法林初始劑量顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TT基因型的INR首次進(jìn)入治療窗的時(shí)間顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表2

表2 CC、CT和TT各基因型的華法林初始劑量及INR首次進(jìn)入治療窗時(shí)間的比較

表2 CC、CT和TT各基因型的華法林初始劑量及INR首次進(jìn)入治療窗時(shí)間的比較

注：與CC基因型相比*P＜0.05。INR：國際標(biāo)準(zhǔn)化比值

例數(shù) 華法林初始劑量(mg/d) INR首次進(jìn)入治療窗時(shí)間 (d) CC基因型 155 3.20±0.75 3.41±1.60 CT基因型 93 3.37±0.91 3.67±1.51 TT基因型 23 3.67±0.75* 4.22±1.60*CT/TT基因型 116 3.43±0.89* 3.78±1.53

2.3多元線性回歸分析結(jié)果

除外患者性別，年齡，身高，體重，CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性以及合并疾病和合用藥等多種因素，CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)患者華法林起始七天內(nèi)華法林劑量的影響仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（回歸系數(shù)0.21，P=0.003）。

3 討論

我們的研究發(fā)現(xiàn)，在中國漢族人群服華法林后的起始七天內(nèi)，CYP4F2基因多態(tài)性的CC基因型攜帶者INR進(jìn)入治療窗時(shí)所需的華法林劑量與CT/TT基因型攜帶者相比較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且不受其他因素的影響。該研究結(jié)果同國內(nèi)有關(guān)CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)華法林穩(wěn)定劑量影響的研究結(jié)果一致[9,10]。本研究數(shù)據(jù)也顯示，CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)華法林初始劑量的影響主要存在于CC和TT兩基因型內(nèi)，CC基因型攜帶者進(jìn)入INR治療窗所需要的時(shí)間短于TT基因型攜帶者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示在中國漢族人口服華法林抗凝治療的起始階段，攜帶CC基因型的中國人群對(duì)華法林抗凝治療反應(yīng)的敏感性較高。

在基因多態(tài)性對(duì)華法林初始作用影響的研究中，婁瑩等[7]研究發(fā)現(xiàn)，CYP2C9和VKORC1對(duì)于肺栓塞或者心臟瓣膜置換術(shù)后患者初始階段華法林的抗凝作用有影響。CYP4F2是維生素K1的代謝酶，其基因變異可以通過影響體內(nèi)維生素K的水平從而影響維生素K相關(guān)的凝血因子水平，繼而影響個(gè)體間的華法林劑量[11]。Caldwell等[12]于2008年首次發(fā)現(xiàn)CYP4F2基因多態(tài)性影響患者華法林的穩(wěn)定劑量，并在隨后的多個(gè)研究中得到證實(shí)[3-5]。有研究提示，初始階段服用華法林的患者的維生素K1的水平可能與穩(wěn)定劑量情況下的維生素K1的水平不同[13]，而CYP4F2在維生素K1循環(huán)中的作用也使得其基因多態(tài)性對(duì)華法林抗凝作用的影響在初始階段和穩(wěn)定階段也可能不同。在一項(xiàng)有關(guān)CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)華法林初始作用影響的研究中[14]，人們并未發(fā)現(xiàn)CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)華法林抗凝患者的劑量和INR進(jìn)入治療窗的時(shí)間有明顯的影響。而在服用華法林抗凝治療的中國漢族人群中，我們研究發(fā)現(xiàn)，在華法林服用的初始七天內(nèi)，同CT/TT基因型攜帶者相比較，CC基因型攜帶者能在服用較低華法林劑量的情況下，在較短的時(shí)間內(nèi)即可進(jìn)入INR的治療窗，顯示出CC基因型攜帶者較高的華法林治療的敏感性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，CYP4F2的基因多態(tài)性不僅對(duì)華法林的穩(wěn)定劑量有影響，而在華法林抗凝治療的中國漢族人群中，其對(duì)華法林的初始劑量和抗凝作用也具有顯著的影響，該發(fā)現(xiàn)對(duì)初始階段華法林的個(gè)體化治療具有一定的指導(dǎo)意義。

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Effect of Cytochrome P-450 4F2 Gene Polymorphisms in Patients With Warfarin for Initial Doses in 7 Days

XIONG Xiao-wei, LIU Hong, HAN Lu-lu, LOU Ying, HUA Lu, LI Yan, LI Yi-shi.
Key Laboratory of Clinical Trials Research in Cardiovascular Drugs, Ministry of Health, State Key Laboratory of Cardiovascular Disease, Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, CAMS and PUMC, Beijing (100037), China

LI Yi-shi, Email: lchyl_fuwai@sina.com

Objective: To study the effect of cytochrome P-450 4F2 (CYP4F2, rs2108622) gene polymorphisms in patients with warfarin for initial doses in 7 days.Methods: A total of 271 patients treated by warfarin were studied. The CYP4F2 gene polymorphisms were assessed by real-time PCR, the average initial warfarin doses in 7 days and the time of international normalized ratio (INR) fi rst arrived to therapeutic range were recorded. The differences of initial warfarin doses and the time of INR fi rst arrived to therapeutic range among CYP4F2 gene polymorphisms of CC, CT and TT genotypes were analyzed by statistical method.Results: The average initial warfarin doses among CYP4F2 polymorphisms of TT and CT/TT were higher than CC, P＜0.05. The times of INR first arrived to therapeutic range in TT genotype was higher than CC genotype, P＜0.05. With adjusted gender, age, body height and weight, CYP2C9 and VKORC1 polymorphisms, conditions of disease and medication, the effect of CYP4F2 gene polymorphisms on initial warfarin doses in 7 days were still with the statistic meaning (regression coeff i cient=0.21, P=0.003).Conclusion: CYP4F2 polymorphisms inf l uenced the initial warfarin doses in 7 days in relevant patients.

Warfarin; Cytochrome P-450 4F2 gene polymorphisms; Initial dose

2014-05-29）

（編輯：王寶茹）

2010年國家臨床重點(diǎn)專科建設(shè)項(xiàng)目——《衛(wèi)生部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目》；《大品種藥物IV期臨床試驗(yàn)及新藥臨床試驗(yàn)審評(píng)研究技術(shù)平臺(tái)》（2011ZX09304）

100037 北京市，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 國家心血管病中心 阜外心血管病醫(yī)院 衛(wèi)生部心血管藥物臨床研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

熊筱偉 博士研究生 主要從事臨床藥理研究 Email：bddwxxw@aliyun.com 通訊作者：李一石 Email: lchyl_fuwai@sina.com

R54

A

1000-3614（2014）11-0910-03

10.3969/j.issn.1000-3614.2014.11.014

方法：利用Real-time PCR的方法分析271例服用華法林抗凝患者的CYP4F2基因多態(tài)性，記錄患者服用華法林七天內(nèi)的平均華法林初始劑量，國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）首次進(jìn)入治療窗的時(shí)間。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析CYP4F2基因多態(tài)性的CC，CT和TT各基因型間初始劑量和INR首次進(jìn)入治療窗的時(shí)間差異。

結(jié)果：CYP4F2基因多態(tài)性的TT、CT/TT基因型的平均華法林初始劑量顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TT基因型的INR首次進(jìn)入治療窗的時(shí)間顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除外患者性別，年齡，身高，體重，CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性以及合并疾病和合用藥等多種因素，CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)患者華法林起始七天內(nèi)華法林劑量的影響仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（回歸系數(shù)0.21，P=0.003）。

結(jié)論：在服用華法林的中國人中，CYP4F2基因多態(tài)性對(duì)華法林起始七天內(nèi)的劑量有影響。