茶多酚對大鼠泌乳性能及抗氧化能力的影響

倪榮蓉，左 倩，李萬平，朱建津，*

（1.江南大學食品學院，食品營養(yǎng)與功能因子研究中心，江蘇無錫214122；2.中糧東海糧油工業(yè)（張家港）有限公司，江蘇張家港215633）

茶多酚對大鼠泌乳性能及抗氧化能力的影響

倪榮蓉1，左 倩1，李萬平2，朱建津1，*

（1.江南大學食品學院，食品營養(yǎng)與功能因子研究中心，江蘇無錫214122；2.中糧東海糧油工業(yè)（張家港）有限公司，江蘇張家港215633）

通過在不同能量條件下，研究茶多酚（TP）對泌乳期大鼠泌乳性能、血液生化指標及抗氧化能力的影響。選取40只SD孕鼠，隨機分為4組，每組10個重復，每個重復1只。采用2×2拉丁方設(shè)計，分別飼喂：高能日糧（HE），低能日糧（LE），高能日糧+500mg茶多酚/kg飼料（HE-TP），低能日糧+500mg茶多酚/kg飼料（LE-TP），實驗期40d。結(jié)果表明：添加TP顯著提高大鼠的泌乳量及乳腺組織中催乳素（PRL）、雌激素（E2）水平（p＜0.05），對采食量沒有顯著作用。在日糧中添加TP，均可顯著降低HE和LE組大鼠血漿TG、GLU和UN水平（p＜0.05）。添加TP，HE和LE組大鼠血漿T-AOC、CAT活力顯著提高（p＜0.05），SOD活力均提高但不顯著（p＞0.05），MDA水平顯著降低（p＜0.05）。結(jié)論：茶多酚通過提高母鼠的抗氧化能力，減少體內(nèi)氧化產(chǎn)物，同時調(diào)節(jié)了泌乳激素水平從而提高了母鼠泌乳性能。

大鼠，茶多酚，泌乳性能，抗氧化能力

茶多酚（tea polyphenols，TP）是存在于茶葉中的一類多酚類物質(zhì)，主要由兒茶素、花青素、黃酮類和酚酸類化合物等構(gòu)成。近年來，國內(nèi)外大量研究表明茶多酚具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗突變、降血糖、降低血脂和膽固醇及提高免疫力等功效[1]。

研究表明，適當增加日糧能量水平能顯著提高動物的泌乳量[2-3]。然而，飼喂高能量日糧會提高機體的代謝水平，刺激機體ROS生成，而過量ROS則會引發(fā)機體產(chǎn)生氧化應激。另外，泌乳期機體生理代謝旺盛，同時受到分娩應激、泌乳應激等的影響，進一步使得機體ROS增加，可能造成機體組織的氧化損傷[4]。

同時Hoffman等指出，添加抗氧化劑能夠提高機體抗氧化能力，有效清除體內(nèi)過量ROS[5-6]。但目前國內(nèi)外對于提高泌乳期大鼠抗氧化能力的研究尚比較少。本實驗以泌乳大鼠為動物模型，通過高能日糧與低能日糧添加茶多酚，旨在探討茶多酚通過減少氧化產(chǎn)物和血液代謝物質(zhì)，以及對乳腺組織中泌乳激素水平的調(diào)控，從而影響大鼠的泌乳性能。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

清潔級健康妊娠SD大鼠 40只，體重280～320g，南通大學實驗中心，許可證號：SCXK（蘇）2008-0010；茶多酚 純度98%，無錫太陽綠寶科技有限公司；SOD、CAT、T-AOC、MDA、BUN、GLU檢測試劑盒、總蛋白定量測試盒 南京建成生物技術(shù)公司；PRL、E2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 美國R&D公司；TC、TG、HDL、LDL檢測試劑盒 上海豐匯生物公司。

BioTek Epoch型酶標儀 美國伯騰儀器有限公司；5804R Eppendorf型臺式高速冷凍離心機 上海艾本德生物技術(shù)國際貿(mào)易有限公司；WH-2微型漩渦混合器 上海分析儀器廠；W 201B型恒溫水浴鍋 上海申順生物科技有限公司；超凈工作臺 蘇凈集團安泰公司；EL104/00型電子天平 梅特勒上海公司。

1.2 動物實驗

實驗期40d，采用單籠喂養(yǎng)，12h光照，環(huán)境溫度為20～25℃，相對濕度50%～60%，自由飲水與采食，操作符合相關(guān)動物實驗法規(guī)。40只孕鼠預飼3d后隨機分為4組，每組10個重復，每個重復1只：高能組（HE組），低能組（LE組），高能-茶多酚組（HE-TP組），低能-茶多酚組（LE-TP組）。分別飼喂：高能日糧（HE），低能日糧（LE），高能日糧+500mg茶多酚/kg飼料（HE-TP），低能日糧+500mg茶多酚/kg飼料組（LE-TP），采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，配方見表1。

1.3 血樣及組織樣品采集

1.3.1 血樣采集 血樣采集在無菌條件下進行，心臟取血，置于肝素鈉處理離心管內(nèi)，冷凍離心機3500r/m in離心10m in，小心吸取上清液于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 組織樣品的制備 無菌條件下，斷頸椎處死大鼠，迅速取出乳腺，精確稱重后放入液氮中保存；測定時，用預冷的滅菌生理鹽水做勻漿介質(zhì)4℃下制得10%組織勻漿（w/v），以4000r/m in離心10m in，取上清，-20℃保存?zhèn)溆?，待檢測。

1.4 檢測指標和方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標

1.4.1.1 采食量 將每只泌乳大鼠作為一個觀察單位記錄，分娩當天起，隔天定時稱量大鼠的采食量，并記錄母鼠的總采食量。

1.4.1.2 泌乳量 將每只泌乳大鼠及其哺育的仔鼠作為一個觀察單位記錄，分娩當日為第1d，稱取仔鼠初生窩重，隔天定時稱重，計算仔鼠窩增重作為母鼠的泌乳量。

1.4.1.3 激素 雌二醇（E2）、催乳素（PRL）水平采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）試劑盒應用雙抗體夾心法測定，嚴格按照說明書操作。

表1 實驗飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)，%）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（air-dry basis，%）

1.4.2 血液生化指標的測定 檢測血漿中尿素氮（UN）、葡萄糖（GLU）、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）含量，采用上海豐匯生物公司試劑盒，在日立7020型全自動生化分析儀上測定。具體操作參照試劑盒說明方法。

1.4.3 抗氧化指標的測定 血漿中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）含量采用試劑盒測定，具體操作參照試劑盒說明。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，所有指標按因子實驗設(shè)計進行兩因素有互作方差分析，分析主效應（茶多酚和能量）以及二者的互作效應，Duncan法進行多重比較，結(jié)果用平均數(shù)±標準差表示。p＜0.05時認為有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，與LE組相比，HE組大鼠總采食量有所下降（p=0.053）。李歆等[7]研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼料能量

水平升高，采食量降低，這與本實驗結(jié)果相似。TP的添加有提高泌乳大鼠總采食量的趨勢，但并不顯著（p＞0.05）?？梢奣P的添加對泌乳期大鼠總采食量無明顯增加，這與王治華等[8]研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加抗氧化劑不影響干物質(zhì)采食量的結(jié)果相似。

飼喂高能量日糧提高了母鼠總泌乳量（p=0.073）。賈弟林等[9]研究發(fā)現(xiàn)，日糧能量水平明顯影響動物的泌乳量，與上述實驗結(jié)果相似。與HE組、LE組比較，HE-TP組與LE-TP組母鼠泌乳量均有顯著增加（p= 0.031），這與Sm ith等[10]在高產(chǎn)奶牛的實驗結(jié)果相似?？紤]交互效應，能量水平和茶多酚對大鼠的總泌乳量有極其顯著的作用（p=0.009）。HE-TP組泌乳量最高，LE-TP組、HE組、LE組依次下降，說明在飼喂高能日糧的同時添加茶多酚，母鼠能量充足，且自由基能被有效清除，從而提高了母鼠的泌乳性能[5]。

由表3可知，與LE組相比，HE組母鼠乳腺組織中PRL、E2含量均有顯著增加（p=0.049，p=0.003）；同時血漿中PRL、E2水平，增加趨勢不顯著（p=0.083，p= 0.683）。朱玉哲[11]研究發(fā)現(xiàn)，實驗奶牛血漿中PRL、E2水平隨著日糧能量攝入增加而升高，與本實驗研究結(jié)果相似。相比較，添加茶多酚組母鼠乳腺組織中PRL、E2水平顯著升高（p=0.024，p=0.001），血漿中PRL、E2含量有所提高（p=0.056，p=0.072）。能量水平和茶多酚對母鼠乳腺組織中PRL、E2含量有顯著的交互作用（p＜0.05）。這一結(jié)果與母鼠的泌乳量增加趨勢基本一致。分析其原因可能是，PRL、E2作為重要的調(diào)節(jié)激素可促進乳腺發(fā)育，同時可與動物乳腺、垂體、下丘腦的胞漿PRL、E2受體結(jié)合，從而激活JAK2，該激酶磷酸化作用后可激活轉(zhuǎn)錄信號轉(zhuǎn)導蛋白或激活蛋白（STAT）等因子，STAT5a能夠促進特異基因的表達，參與動物泌乳過程的調(diào)控[12]。

2.2 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠血漿生化指標的影響

由表4可知，HE組大鼠，泌乳期血漿中TC、TG、HDL-C、LDL-C、GLU和UN含量均高于LE組，其中TC、LDL-C、GLU差異顯著（p＜0.05）。在日糧中添加TP，均可降低HE和LE組大鼠血漿TC、TG、HDL-C、LDL-C、GLU和UN水平，其中對TG、GLU和UN效果顯著（p＜0.05）。

血清尿素氮濃度可以較準確地反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況，UN濃度越低則表明氮的利用效率越高。本實驗條件下，添加茶多酚后，大鼠血液尿素氮水平顯著下降，說明HE-TP組與LE-TP組母鼠的氮的利用效率高，用于泌乳的營養(yǎng)供給更為充分，間接地提高了大鼠的泌乳性能。隨日糧能量水平的增加，血漿TC、TG、HDL-C、LDL-C含量均升高，高能日糧可能會引起大鼠血脂水平的提高，添加茶多酚則可降低HE和LE組大鼠血脂水平，

這可能是由于茶多酚具有降血脂的作用，調(diào)節(jié)了血漿膽固醇和甘油三酯的代謝。Ikeda等發(fā)現(xiàn)兒茶素能夠降低大鼠攝食后的高TG水平，與本研究結(jié)果相似[13]。

表2 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠采食量和仔鼠增重的影響Table 2 Effectof tea polyphenolswith varying energy density on DMIand litterweightgain of lactating rats

表3 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠激素水平的影響Table 3 Effectof tea polyphenolswith varying energy density on hormones of lactating rats

表4 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠血漿生化指標的影響Table 4 Effectof tea polyphenolswith varying energy density on plasma biochemical parameters of lactating rats

2.3 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠抗氧化功能的影響

血漿SOD、CAT活力和MDA含量是反映機體抗氧化能力的重要指標，其中SOD和CAT是動物體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有清除超氧化或過氧化因子自由基，保護生物膜和生物大分子免受損傷的作用；MDA是一種脂質(zhì)過氧化物，其含量高低反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度[14]。

由表5可知，HE組大鼠血漿抗氧化能力與LE組相比有降低趨勢，T-AOC活力顯著降低（p=0.012），SOD、CAT活力均有所下降（p=0.177，p=0.079），MDA水平上升，其顯著性也不明顯（p=0.051）。原因可能在于，高能日糧攝入會提高機體的能量代謝水平，導致機體產(chǎn)生大量ROS，降低機體抗氧化酶的活性，從而造成機體的氧化還原狀態(tài)失衡，而過高水平的自由基會導致細胞膜和其他脂質(zhì)的氧化，并導致蛋白質(zhì)、核酸的氧化，對機體造成嚴重的損傷[15]。

添加茶多酚組的大鼠血漿中T-AOC、CAT活力均有顯著提高（p＜0.05），SOD水平活力提高不顯著（p＞0.05），MDA水平也顯著降低（p=0.004）。能量水平和茶多酚對母鼠血漿氧化還原狀態(tài)具有顯著的交互作用（p＜0.05）?？梢娞砑硬瓒喾幽軌蛴行岣呙谌槠诖笫蟮目寡趸芰Α＿@是由于TP抑制了線粒體中脂氧合酶活性，降低了脂質(zhì)過氧化作用，另一方面是通過清除自由基、節(jié)約內(nèi)源性抗氧化酶，提高機體抗氧化酶系活力，從而對大鼠氧化應激起到緩解作用[16]。

飼喂高能日糧導致機體的能量代謝水平提高，則會刺激機體產(chǎn)生大量ROS，降低機體抗氧化酶的活性，造成機體的氧化還原狀態(tài)失衡，從而導致細胞膜、蛋白質(zhì)及核酸的氧化，對乳腺組織造成一定的損傷，嚴重可發(fā)生乳房炎癥等，從而影響大鼠的泌乳量[4]。然而添加茶多酚可有效地抑制高能日糧喂養(yǎng)造成的氧化損傷，相應地提高了大鼠的泌乳性能。氧化還原狀態(tài)的改變，可能通過調(diào)節(jié)細胞信號轉(zhuǎn)導分子發(fā)生作用，引起PRL、E2水平發(fā)生變化，PRL、E2可促進乳腺發(fā)育，同時可與動物乳腺、垂體、下丘腦的胞漿PRL、E2受體結(jié)合，從而激活JAK2，該激酶磷酸化作用后可激活轉(zhuǎn)錄信號轉(zhuǎn)導蛋白或激活蛋白（STAT）等因子，STAT5a能夠促進特異基因的表達，參與動物泌乳過程的調(diào)控[12]，但其作用機制有待于進一步研究。相應地，PRL能夠通過刺激SOD mRNA的表達，產(chǎn)生抗氧化作用，對維持細胞的完整性發(fā)揮了重要作用[17]。此外，添加茶多酚提高了機體的抗氧化能力，從而影響了泌乳相關(guān)激素的濃度，同時激活了相關(guān)細胞信號轉(zhuǎn)導分子，調(diào)節(jié)了特異基因的mRNA相對表達量，從而改善了大鼠的泌乳性能。

3 結(jié)論

高能量日糧能夠提高母鼠的泌乳量。但高能日糧攝入會提高機體的能量代謝水平，導致機體產(chǎn)生大量ROS，造成機體產(chǎn)生氧化應激反應，而過高水平的自由基會引起細胞膜和其他脂質(zhì)的氧化，并導致蛋白質(zhì)、核酸的氧化，從而影響了機體的抗氧化能力和正常代謝狀況，嚴重可引起炎癥等疾病，故對母鼠的泌乳有一定的抑制作用。然而添加茶多酚可以逆轉(zhuǎn)上述結(jié)果，對機體起到保護作用，更好地提高母鼠的泌乳性能。綜上所述，通過對大鼠泌乳模型的研究，表明茶多酚對提高泌乳性能有一定的促進作用，并為其應用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)提供了理論基礎(chǔ)。

表5 茶多酚對不同日糧能量水平泌乳大鼠血漿氧化還原狀態(tài)的影響Table 5 Effectof tea polyphenolswith varying energy density on plasma redox state of lactating rats

[1]Wu LY，Juan CC，Ho LT，et al.Effect of green tea supplementation on insulin sensitivity in Sprague-Dawley rats[J]. JournalofAgriculturaland Food Chemistry，2004，52（3）：643-648.

[2]Sibanda LM.Studies on the productivity and nutrition of the Matabele goat[D].University of Reading，Reading U K，1992.

[3]Broderick GA.Effects of varying dietary protein and energy levels on the production of lactating dairy cows[J].Journal of Dairy Science，2003，86（4）：1370-1381.

[4]Coffey MT，Diggs BG，Handlin DL，et al.Effects of dietary energy during gestation and lactation on reproductive performance of sows：A Cooperative Study[J].Journal of Animal Science，1994，72（1）：4-9.

[5]Hoffman PC，Bauman LM.Strategies to improvemilk yield of lactating dairy cows fed red clover silage[J].The Professional Animal Scientist，2003，19（2）：178-187.

[6]Ko SY，Bae IH，Yee ST，et al.Comparison of the effect of green tea by-product and green tea probiotics on the growth performance，meat quality，and immune response of finishing Pigs[J].Journal of Animal Science，2008，21（10）：1486-1494.

[7]李歆，羅軍.不同能量和蛋白水平日糧對西農(nóng)薩能奶山羊泌乳性能的影響[J].家畜生態(tài)學報，2013，34（3）：31-34.

[8]王治華，楊志飛，王連仲.日糧中硒和維生素E對奶牛泌乳性能的影響[J].中國草食動物，2005，25（2）：33-34.

[9]賈弟林，李文波，劉占發(fā).日糧營養(yǎng)水平對中衛(wèi)山羊母羊泌乳性能的影響[J].中國草食動物，2011，31（2）：35-36.

[10]Smith JL，Sheffield LG，Saylor D.Impact of ethoxyquin on productivity of dairy cattle[J].Journal of Dairy Science，2002，85（1）：358-359.

[11]朱玉哲.泌乳量與日糧能量水平對泌乳奶牛生殖機能的影響[D].大慶：黑龍江八一農(nóng)墾大學，2009.

[12]Liu X，Robinson GW，Wagner KU，etal.Stat5a ismandatory for adultmammary gland development and lactogenesis[J].Genes &Development，1997，11（2）：179-186.

[13]Ikeda I，Tsuda K，Suzuki Y，et al.Tea catechins with a galloylmoiety suppress postprandial hypertriacylglycerolemia by delaying lymphatic transport of dietary fat in rats[J].The Journal of Nutrition，2005，135（2）：155-159.

[14]Kumanyika SK.The obesity epidemic：looking in themirror [J].American Journal of Epidemiology，2007，166（3）：243-245.

[15]Dandona P，Mohanty P，Ghanim H，et al.The suppressive effect of dietary restriction and weight loss in the obese on the generation of reactive oxygen species by leukocytes，lipid peroxidation，and protein carbonylation[J].The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism，2001，86（1）：355-362.

[16]Vazquez-Anon M，Nocek J，Bowman G，et al.Effects of feeding a dietary antioxidant in diets with oxidized fat on lactation performance and antioxidant status of the cow[J]. Journal of Dairy Science，2008，91（8）：3165-3172.

[17]Norihiro S，Mitsuko HT，Liping Z，et al.Hormonal regulation of copper-zinc superoxide dismutase and manganese superoxide dismutasemessenger ribonucleic acid in the rat corpus luteum：induction by prolactin and placental lactogens[J].Biology of Reproduction，1998，59（3）：599-605.

Effect of tea polyphenols on lactation performance andantioxidant capacity in rats

NIRong-rong1，ZUO Qian1，LIW an-ping2，ZHU Jian-jin1，*
（1.School of Food Science and Technology，Jiangnan University，The Research Center of Food Nutrition and Functional Factors，Wuxi214122，China；2.East Ocean Oils&Grains Industries of COFCO Co.，Ltd.，Zhangjiagang 215633，China）

Experiments were conducted to determine the effect of tea polyphenols （ TP ） on the lactationperformance，blood biochemical parameters and antioxidant capacity of lactating rats under different dietaryconditions. 40 pregnant SD rats were randomly divided into four groups with 10 repeats in each group and 1 ineach repeat. Four kinds of diets were designed by 2×2 Latin square experiment：high-energy diet group（HE），low-energy diet group（LE），high-energy diet+500mg/kg tea polyphenols group （HE-TP），low-energy diet+500mg/kg tea polyphenols group（LE-TP）. The whole trial period was 40 days. The results showed that：AddingTP significantly increased the lactation yield of postpartum rats and the level of PRL，E2in mammary gland（p＜0.05），there’s no significant effect on feed intake. Adding TP in the diet significantly reduced the level ofTG，GLU and UN in plasma in the group of HE and LE（p＜0.05）. After adding TP，the contents of T-AOC andCAT were significantly increased（p＜0.05），the level of SOD was increased in the group of HE and LE（p＞0.05），while the level of MDA was significantly reduced（p＜0.05）. Conclusion：Adding tea polyphenols could improvelactation performance of rats by improving antioxidant capacity of rats，reducing oxidative products and adjustingthe levels of lactational hormones.

rat；tea polyphenols；lactation performance；antioxidant capacity

TS201.4

：A

：1002-0306（2014）16-0337-05

10.13386/j.issn1002-0306.2014.16.065

2013－12－16 *通訊聯(lián)系人

倪榮蓉（1988－），女，碩士研究生，主要從事動物營養(yǎng)代謝調(diào)控方面的研究。

十二五科技支撐計劃（2012BAD33B05）。