胃癌組織中Her－2／neu基因的表達(dá)及其臨床意義＊

劉春娜 趙承梅 馬菲菲 李衛(wèi)東

1 天津醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，天津市 300222； 2 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院

Her－2／neu基因位于17q21染色體上，毗鄰?fù)負(fù)洚悩?gòu)酶Ⅱa基因，作為癌基因表達(dá)在細(xì)胞膜上［1，2］。最近研究表明多種惡性腫瘤中都有Her－2／neu基因的表達(dá)，如乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)百分比10%～34%，并與預(yù)后以及化療和內(nèi)分泌治療的效果關(guān)系密切［3］。目前，Her－2／neu基因已成為乳腺癌選擇應(yīng)用曲妥珠單抗（Herceptin）治療重要的生物分子靶點(diǎn)。Herceptin是一種單克隆抗體，通過(guò)影響Her－2／neu基因的結(jié)構(gòu)進(jìn)行靶向治療，對(duì)于Her－2／neu基因表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌及其轉(zhuǎn)的患者，曲妥珠單抗可以提高患者的生存率［4］。而目前關(guān)于Her－2／neu基因與胃癌關(guān)系的研究較少，因此，深入研究Her－2／neu基因在胃癌組織中的表達(dá)，不僅有助于進(jìn)一步了解胃癌的發(fā)生與發(fā)展，更為胃癌的分子靶向治療提供了新的可能。

1 對(duì)象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料和對(duì)象

1.1.1 標(biāo)本資料：收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2006年1月－2011年12月外科手術(shù)切除且經(jīng)病理科明確診斷并存檔的蠟塊標(biāo)本342例及全部臨床病例資料，所有病例術(shù)前均未行放療化療。男236例（占69.01%），女106例（占30.99%）?；颊吣挲g19～85歲，平均年齡60.07歲。

1.1.2 抗體及主要試劑：鼠抗人c－erbB－2單克隆抗體（ZM－0065，北京中杉公司）；二抗HRP（辣根過(guò)氧化物酶）（北京中杉公司）；DAB顯色試劑盒（ZLI－9032，北京中杉公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 免疫組織化學(xué)SP法染色。脫蠟、水化，3%過(guò)氧化氫孵育10min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。抗原修復(fù)，滴加5%BSA封閉液，室溫30min。甩去血清，不洗，每張切片滴加抗體50μl（抗體按1∶200經(jīng)PBS稀釋?zhuān)?℃冰箱中過(guò)夜，孵育18h。取出置于室內(nèi)復(fù)溫30min，用PBS（pH 7.2～7.6）洗5min×3次。甩去PBS液，滴加生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG 50μl，37℃恒溫箱孵育30min，PBS洗3min×3次。DAB顯色，適時(shí)以蒸餾水充分沖洗以中止反應(yīng)。蘇木素復(fù)染2min，沖洗返藍(lán)。脫水、封片，中性樹(shù)膠封片、鏡檢。

1.3 結(jié)果判定 以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗設(shè)為陰性對(duì)照。在200倍光鏡下隨機(jī)選擇5～10個(gè)視野，計(jì)數(shù)100～200個(gè)癌細(xì)胞，計(jì)算出陽(yáng)性細(xì)胞百分率。染色結(jié)果判定：染色陽(yáng)性者可見(jiàn)細(xì)胞膜和／或胞漿黃染。采用二級(jí)計(jì)分法，陽(yáng)性細(xì)胞百分率及計(jì)分：＜5%，0分；5%～25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；＞75%，4分。染色強(qiáng)度分類(lèi)及計(jì)分：淡黃色，1分；黃或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分。兩者計(jì)分相乘≥2為染色陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 Her－2／neu基因與胃癌臨床特征和病理參數(shù)關(guān)系的評(píng)估采用卡方檢驗(yàn)或fisher精確概率法檢驗(yàn)。Kaplan－Meier法描繪生存曲線(xiàn)，組間生存率比較用Log－Rank（Mantel－Cox）檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中Her－2／neu基因的表達(dá) Her－2／neu基因蛋白主要定位于胃癌細(xì)胞胞膜和胞漿中（圖1）。342例胃癌中，Her－2／neu基因表達(dá)陽(yáng)性90例（26.32%），陰性252例（73.68%）。

圖1 胃癌Her－2／neu基因免疫組化染色結(jié)果

2.2 Her－2／neu基因表達(dá)水平與胃癌臨床特征和病理參數(shù)的關(guān)系 在組織類(lèi)型來(lái)源、分化程度、浸潤(rùn)程度的不同組別之間，胃癌組織中Her－2／neu基因陽(yáng)性表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的兩組間比較，Her－2／neu基因在胃癌組織的表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 胃癌組織中Her－2／neu基因染色與預(yù)后（生存期）的關(guān)系 病例資料完整的342例隨訪(fǎng)截至2013年3月，失訪(fǎng)26例，失訪(fǎng)率7.6%，術(shù)后1年、3年、5年生存率分別為76.02%、54.67%、46.22%，中位生存時(shí)間45個(gè)月。Her－2／neu基因染色陰性患者的中位生存時(shí)間為57個(gè)月，陽(yáng)性患者為32個(gè)月。Log－Rank（Mantel－Cox）檢驗(yàn)結(jié)果顯示：兩組間生存時(shí)間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝45.310，P＝0.000，見(jiàn)圖2）。

表1 Her－2／neu基因表達(dá)與胃癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

圖2 不同組別患者Her－2／neu基因表達(dá)生存曲線(xiàn)圖

3 討論

3.1 Her－2／neu基因在胃癌中的表達(dá) 本研究中利用免疫組化SP法檢測(cè)342例胃癌標(biāo)本，Her－2／neu表達(dá)陽(yáng)性率為26.32%，與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相近［5～8］，提示Her－2／neu與胃癌發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)［9］。胃癌組織中Her－2／neu基因陽(yáng)性表達(dá)在組織學(xué)類(lèi)型、分化程度、浸潤(rùn)程度的不同組別之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移兩組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，Her－2／neu基因在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過(guò)程中被激活，并在腫瘤的侵襲過(guò)程中具有一定的促進(jìn)作用。其參與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的機(jī)制，可能是由于Her－2／neu基因可以激活STAT3，并且Her－2／neu基因可以促進(jìn)HRG引發(fā)MMP－7轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)和蛋白分泌的增加，而MMP－7又可激活Her－2／STAT3，更進(jìn)一步加強(qiáng)了Her－2／neu基因促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)作用［10］。

3.2 Her－2／neu基因在胃癌中的表達(dá)與胃癌預(yù)后的相關(guān)性 本研究表明，Her－2／neu基因表達(dá)陰性組與陽(yáng)性組比較，患者的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Her－2／neu基因表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān)［11～13］，這可能與其抑制腫瘤凋亡有關(guān)，Her－2／neu基因主要通過(guò)PI3K／Akt途徑抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，使定位于胞核的p21（WAF1／CIP1）的145位蘇氨酸磷酸化，磷酸化的p21（WAF1／CIP1）易于在胞漿中定位，且能抑制細(xì)胞凋亡。Her－2／neu基因通過(guò)上調(diào)抑制凋亡蛋白bcl－2和生存素的表達(dá)，腫瘤細(xì)胞凋亡受抑制，通過(guò)該途徑還可使NFκB、p53結(jié)合蛋白（Mdm－2）、原凋亡蛋白－9等磷酸化，進(jìn)而介導(dǎo)細(xì)胞抗凋亡［14］。

3.3 Her－2／neu基因作為胃癌治療靶點(diǎn)的展望

近年來(lái)，隨著抗Her－2單克隆抗體曲妥珠單抗（Herceptin）在乳腺癌分子靶向治療中的成功應(yīng)用，人們開(kāi)始探討分子靶向藥物治療胃癌的價(jià)值，有研究報(bào)道應(yīng)用曲妥珠單抗聯(lián)合化療藥物對(duì)伴有Her－2／neu基因擴(kuò)增的胃癌細(xì)胞具有明顯抑制其生長(zhǎng)的作用［15］。Roukos［16］等認(rèn)為，Her－2應(yīng)該作為進(jìn)展期胃癌的一個(gè)診斷指標(biāo)，他們還發(fā)現(xiàn)Trastuzumab聯(lián)合化療能夠提高胃癌患者的總生存率，這可作為治療Her－2／neu基因陽(yáng)性表達(dá)疾病的一個(gè)新的標(biāo)準(zhǔn)化方案。因此，Her－2／neu基因有望成為治療胃癌的有效分子生物靶點(diǎn)，從而使Her－2／neu基因在胃癌分子靶向治療領(lǐng)域顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。

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