葛根-丹參組方對動脈粥樣硬化鵪鶉血管內(nèi)皮組織的影響

樊利娜, 張鑫, 趙興冉, 李佳川, 譚睿, 顧健

(1.西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院, 成都 610041; 2.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院, 成都 610031))

葛根-丹參組方對動脈粥樣硬化鵪鶉血管內(nèi)皮組織的影響

樊利娜1, 張鑫1, 趙興冉1, 李佳川1, 譚睿2, 顧健1

(1.西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院, 成都 610041; 2.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院, 成都 610031))

目的: 考察葛根-丹參(1:1)組方對動脈粥樣硬化鵪鶉血管內(nèi)皮組織的影響. 方法: 連續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料造模同時給藥, 觀察葛根-丹參對動脈粥樣硬化鵪鶉主動脈組織脂質(zhì)斑塊、內(nèi)皮及內(nèi)膜組織的影響. 結(jié)果: 葛根-丹參組方配伍后, 無論乙酸乙酯部位還是水提物, 均能較好的減少泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)的沉積, 改善內(nèi)皮細(xì)胞的腫脹、變性, 抑制血管內(nèi)膜的增厚及巨噬細(xì)胞的數(shù)量, 尤以乙酸乙酯部位作用明顯. 結(jié)論: 葛根丹參組方配伍具有一定的減少主動脈組織脂質(zhì)斑塊形成,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用, 有效地阻止AS的形成與發(fā)展.

葛根-丹參; 動脈粥樣硬化; 鵪鶉; 血管內(nèi)皮組織

動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是心腦血管疾病發(fā)生的病理基礎(chǔ), 以動脈粥樣硬化為基礎(chǔ)的各類疾病正急劇增加, 因此, 加速抗動脈粥樣硬化藥物的開發(fā)研究具有重要意義. 脂質(zhì)沉積于血管內(nèi)膜壁誘發(fā)AS斑塊[1]、血管內(nèi)皮功能異常反映AS發(fā)展的嚴(yán)重程度[2-3]. 葛根-丹參藥對具有活血化瘀, 去瘀生新的功效[4], 前期藥效學(xué)研究表明葛根-丹參藥對可以改善動脈粥樣硬化鵪鶉的脂質(zhì)代謝, 為進(jìn)一步探索其對動脈粥樣硬化的作用機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)建立高脂血癥鵪鶉動脈粥樣硬化模型, 觀察了藥物對動脈粥樣硬化鵪鶉模型主動脈脂質(zhì)斑塊和內(nèi)皮細(xì)胞功能方面的影響, 為葛根-丹參抗動脈粥樣硬化提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

葛根-丹參組方(1: 1)乙酸乙酯提取物, 水提物, 由西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院提供; 辛伐他汀片, 由杭州默沙東制藥有限公司提供, 規(guī)格: 20mg*7, 批號: 110737.

1.2 動物

朝鮮種鵪鶉, 雄性, 體重100±10g, 6周齡, 成都新津萬新鵪鶉養(yǎng)殖專業(yè)合作社訂購.

1.3 試劑

膽固醇, 成都市科龍化工試劑廠, 批號: 20120409; 豬膽酸鈉, 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司, 批號: 120422; 丙硫氧嘧啶, 北京嘉林藥業(yè)股份有限公司, 批號: 20110812; 高脂飼料配方: 膽固醇1%、豬油16%、丙硫氧嘧啶0.1%、豬膽酸鈉0.2%、其余為基礎(chǔ)飼料; 鵪鶉基礎(chǔ)飼料, 成都市新津希望飼料廠.

1.4 方法

1.4.1 高脂飼料的制備

參照徐淑云造模方法[5], 豬油15%、膽固醇5%、豬膽酸鈉0.2%、丙硫氧嘧啶0.1%, 其余為基礎(chǔ)飼料.

1.4.2 動物分組、造模及給藥

朝鮮種鵪鶉76只, 全雄, 體質(zhì)量100±10g. 按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為7組, 即空白組、模型組、辛伐他汀組、葛根丹參藥對乙酸乙酯部位 (7.5g/kg、5.0g/kg、2.5g/kg)劑量組和葛根丹

參藥對水提物(7.5g/kg)組. 除模型組16只動物外(其中6只用于定期病理學(xué)檢測, 鑒別模型建立程度, 每次2只), 其余每組10只. 各組鵪鶉按設(shè)計(jì)劑量灌胃給藥, 每日1次, 連續(xù)16周, 實(shí)驗(yàn)期間除空白組給予基礎(chǔ)飼料外,其余各組鵪鶉均同步給予高脂飼料20g/只·d, 建立

鵪鶉動脈粥樣硬化動物模型.

1.4.3 檢測指標(biāo)

鵪鶉處死后, 取上述鵪鶉主動脈組織(需包含主動脈分叉處和主動脈弓), 10%甲醛固定, 逐級乙醇脫水, TO透明液透明, 2次浸蠟, 石蠟包埋, 5μm切片, HE染色, 切片以TO透明液透明, 加拿大樹膠封片供鏡檢. 以上標(biāo)本均按四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物研究所質(zhì)量監(jiān)控室病理組病理檢驗(yàn)SOP程序進(jìn)行, 最后在10×10倍光鏡下鏡檢, 檢測主動脈組織脂質(zhì)斑塊、內(nèi)皮及內(nèi)膜組織的病理變化.

2 結(jié)果與分析

葛根-丹參對動脈粥樣硬化鵪鶉主動脈組織脂質(zhì)斑塊、內(nèi)皮及內(nèi)膜組織的影響

表1 脂質(zhì)斑塊病理評分標(biāo)準(zhǔn)

由表1～4和圖1 A～H結(jié)果所示, 空白組主動脈內(nèi)膜光滑, 無粥樣病損, 肉眼觀察并未形成脂質(zhì)斑塊, 光鏡下組織學(xué)切片觀察顯示主動脈壁、內(nèi)膜、中膜都清晰可見, 結(jié)構(gòu)正常, 內(nèi)膜無泡沫細(xì)胞, 更無脂質(zhì)沉積改變, 含有少量膠原纖維和平滑肌纖維, 彈力纖維分布均勻, 無異常改變; 與空白組相比較, 如箭頭所示, 模型組主動脈內(nèi)膜異常增厚, 內(nèi)皮有一定程度的損傷、脫落, 表層纖維帽薄, 其下有大量的泡沫細(xì)胞, 泡沫細(xì)胞圓形體積大,胞質(zhì)內(nèi)大量空泡化(制片時脂肪已被溶解所致)以及少許平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞外脂質(zhì)及炎性細(xì)胞, 這些病理表現(xiàn)符合AS癥的早期脂紋纖維斑塊期改變. 與模型組相比較, 葛根丹參組方配伍后, 無論乙酸乙酯部位還是水提物, 均能較好的減少泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)的沉積, 改善內(nèi)皮細(xì)胞的腫脹、變性, 抑制血管內(nèi)膜的增厚及巨噬細(xì)胞的數(shù)量(均P<0.05～0.01), 尤以葛根丹參乙酸乙酯部位作用最為明顯, 顯示出一定的減少脂質(zhì)斑塊形成, 保護(hù)血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)及功能的作用.

表2 對動脈粥樣硬化鵪鶉模主動脈脂質(zhì)斑塊的影響

表3 對動脈粥樣硬化鵪鶉模主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響

表4 對動脈粥樣硬化鵪鶉模主動脈內(nèi)膜的影響

圖1 主動脈脂質(zhì)斑塊病理圖(HE, ×100)

3 討論

動脈粥樣硬化基本損害表現(xiàn)為動脈內(nèi)膜局部呈現(xiàn)壁膜增厚, 并伴隨動脈粥樣硬化斑塊, 病理表現(xiàn)形式有脂質(zhì)條紋及纖維斑塊. AS的發(fā)生一般會累及全身動脈血管, 以主動脈、腦動脈、腎動脈、肌彈力型動脈等部位為主, 嚴(yán)重者會導(dǎo)致動脈血管變狹窄甚至完全堵塞, 致使機(jī)體某些重要器官因缺血缺氧而發(fā)生多種病變. 在AS整個發(fā)病過程中, 脂質(zhì)代謝的紊亂和血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能損傷是AS發(fā)生發(fā)展過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[6]. 醫(yī)學(xué)上現(xiàn)已公認(rèn)脂質(zhì)沉積與AS的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系, 過多的血脂會引發(fā)脂質(zhì)代謝障礙, 可導(dǎo)致機(jī)體血液粘稠度增高, 脂質(zhì)沉積于血管內(nèi)膜壁上, 從而誘發(fā)AS斑塊; 同時血管內(nèi)皮功能異常是AS形成早期的始動環(huán)節(jié), 也是其它心血管疾病發(fā)生的重要因素[7-8]. 因此, 本研究從減少脂質(zhì)斑塊、保護(hù)血管內(nèi)皮功能兩方面入手共同探討葛根丹參藥對抗AS的作用機(jī)制. 本實(shí)驗(yàn)病理檢測結(jié)果表明葛根-丹參組方配伍能抑制泡沫細(xì)胞及斑塊, 達(dá)到穩(wěn)定血管內(nèi)皮細(xì)胞功能, 減少血栓形成的作用, 提示葛根丹參藥對對AS有一定治療作用. 這可能是葛根丹參藥對抗動脈粥樣硬化作用的藥理學(xué)基礎(chǔ). 本研究為臨床上從改善脂質(zhì)代謝、改善細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞方面防治AS提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為開發(fā)葛根-丹參組方配伍新藥開辟新途徑.

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The pathology study of Gegen-Danshen prescription on aorta in atherosclerosis quail

FAN Li-na1, ZHANG Xin1, ZHAO Xing-ran1, LI Jia-chuan1, TAN Rui2, GU Jian1
(1.Institute of National Medicine, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, P.R.C.; 2.School of Life Science and Engineering, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, P.R.C.)

Objective:To observe the effect of Gegen-Danshen Prescription(1:1) on aorta in atherosclerosis quail.Method:Feeding quail with high fat continuously establishes atherosclerosis models. At the same time, groups quail are administered orally once daily to observe the effect of Gegen-Danshen Prescription on aorta lipid plaque, endothelial cells and intima tissue in atherosclerosis quail.Results:Gegen-Danshen ethyl acetate extract and water extract, especially ethyl acetate extract can better reduce the foam cells and deposition of lipid, improve swelling and degeneration of endothelial cell, restrain vascular intimal thickening and decrease the number of macrophages.Conclusion:Gegen-Danshen can reduce the formation of aorta lipid plaque and protect vascular endothelial cells, which can prevent the formation and development of AS.

combination of Puerariae and Salviae; AtheroscIerosis; quail; vascular endothelial tissue

R285

A

1003-4271(2014)01-0058-05

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.01.12

2013-11-29

顧健(1967-), 男, 教授, 碩士生導(dǎo)師, 研究方向: 民族藥物及中藥研究開發(fā), E-mail: gujian_3@163.com.

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81173594); 四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013SZ0124); 四川省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2012JY0025).