“香參”防脫育發(fā)液的研制及其性能考察*

趙寧，李偉澤，康雪寧，王歡，崔艷華

“香參”防脫育發(fā)液的研制及其性能考察*

趙寧*，李偉澤，康雪寧，王歡，崔艷華

（西安醫(yī)學院藥學院，陜西西安710021）

制備“香參”防脫育發(fā)液，并對其抑菌效果及其促毛發(fā)生長作用進行研究；方法：在中醫(yī)藥理論指導下選藥組方，采用水提醇沉法提取制備“香參”防脫育發(fā)液，研究其抑菌作用及對模型小鼠毛發(fā)生長的促進作用；結果：“香參”防脫育發(fā)液的抑菌效率隨作用時間延長而增大，當作用時間超過10min時，其對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌的抑制率均達到99%以上，且能顯著促進小鼠毛發(fā)生長，作用強度具有劑量依賴性；結論：“香參”防脫育發(fā)液不僅能夠有效抑制細菌生長繁殖，并且對小鼠的毛發(fā)生長具有顯著的促進作用，具有較好的應用前景。

“香參”防脫育發(fā)液；抑菌作用；防脫；毛發(fā)生長

脫發(fā)是一種臨床常見的毛發(fā)疾病，據(jù)不完全統(tǒng)計，脫發(fā)患者約占成年人群體的20%～30%；雖不屬于嚴重疾病，但對人們的精神和心里健康產生極大的影響。中醫(yī)認為“發(fā)為血之余，發(fā)為腎之主”，頭發(fā)稀疏或干枯不榮多為精血、肝腎不足之證[1，2]。另外，很多患者除脫發(fā)外，還常表現(xiàn)為頭屑多，頭皮瘙癢，小紅顆粒等癥狀，有蟲蝕咬感等，類似中醫(yī)的“蟲蝕”侵犯，與頭部細菌、真菌感染的癥狀相似。正如陳達仙等報道，對溢脂性脫發(fā)患者毛發(fā)的掃描電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)其病理結構的變化與細菌的感染直接相關[3]，眭維恥等也報道了脫發(fā)與細菌的感染有關[4]。

本文以中醫(yī)藥理論為指導，選取廣藿香、苦參、桑葉、制首烏、丹參、熟地、側柏葉、黃芪、墨旱蓮、五倍子等12味中藥配伍組方，經過提取精制得到“香參”防脫育發(fā)液，以達到滋補肝腎、滋陰補血、活血化瘀、祛風除濕、清熱涼血、燥濕化痰、健脾補氣、化瘀通絡之功效，以促進毛發(fā)生長，并對其抑菌能力及促進毛發(fā)生長的效果進行了驗證。實驗表明，“香參”防脫育發(fā)液經局部給藥，不僅可使藥物活性成分直達病所，疏通經脈，調和氣血，改善脫發(fā)癥狀，還能夠顯著抑菌細菌滋生，通過局部調理促進毛發(fā)生長。

1 儀器與材料

1.1 藥材

處方中藥材均購自西安市萬壽路中藥材市場。

1.2 試藥

章光101發(fā)珍育發(fā)劑（北京章光101科技發(fā)展有限公司，批號：20091201），Na2S（天津市福晨化學試劑廠，批號：20110105）。

昆明種小鼠：體重15～20g，雌雄各半，第四軍醫(yī)大學動物實驗中心提供。

1.4 菌種

大腸埃希氏菌（44102-s-03-01）；金黃色葡萄球菌（1.0089-s-03-01），白色念珠菌（44102-s-03-01）。

1.5 儀器

ALC210.4精密電子天平（賽多利斯）；Olympus DP70生物顯微鏡；BHC-1300IIA2超凈工作臺（蘇州蘇潔凈化設備有限公司）；DHP恒溫培養(yǎng)箱（常州菲普實驗儀器廠）。

隨著計算機信息技術的不斷進步，人們對傳統(tǒng)生鮮產品的消費觀念也有所改變，從而促進了冷鏈物流行業(yè)的發(fā)展。生鮮產品的保質期不變較短，且在運輸?shù)倪^程中會產生極大的耗損，常溫下有易腐，因此，生鮮產品對運輸過程中溫度的要求非常嚴格。任何大小型規(guī)模的生鮮產品企業(yè)中對生鮮產品的冷鏈物流投入都可達到銷售成本的30%～40%之多。所以，一方面企業(yè)有效管理冷鏈物流的投入非常重要。另一方面能否完善生鮮產品冷鏈物流標準體系化建設對生鮮產品行業(yè)意義深遠。

2 “香參”防脫育發(fā)液的制備

（1）稱取處方量廣藿香，加入8倍量水，浸泡30min，水蒸汽蒸餾，提取、收集揮發(fā)油；分離藥液與藥渣，藥渣中再加8倍量水，煎煮30min，合并2次煎液，過濾，濾液備用；（2）稱取處方量剩余藥材，加入8倍量水，浸泡30min，煎煮提取2次，每次30min。合并煎液，過濾，濾液備用；（3）將（1）和（2）項中所得濾液合并，濃縮至相對密度1.08，醇沉，靜置24h；（4）回收乙醇至無醇味，得藥材清膏；（5）在（1）項所得揮發(fā)油中加入適量吐溫-80，與藥材清膏混合均勻；純化水定容調整濃度；于4℃冷藏24h，過濾，即得棕褐色“香參”防脫育發(fā)液。

3 “香參”防脫育發(fā)液的抑制作用

3.1 PBS磷酸鹽緩沖液的制備

取無水NaH2PO42.83g，KH2PO41.36g加入1000mL蒸餾水中，待完全溶解后，調pH值至7.2～7.4，于121℃高壓蒸氣滅菌20min，備用。

3.2 “香參”防脫育發(fā)液對細菌的抑制作用

脫發(fā)患者除脫發(fā)外還常表現(xiàn)為頭屑多，頭皮瘙癢，小紅顆粒，有蟲蝕咬感，跟頭部細菌、真菌感染的癥狀相似，類似中醫(yī)的“蟲蝕”侵犯。據(jù)文獻報道，造成脫發(fā)的菌種有多種，具有代表性的常見菌種主要有大腸埃希氏菌[5-7]、金黃色葡萄球菌[8]、白色念珠菌[7，9]等，本文即針對此3種常見菌種，對“香參”防脫育發(fā)液的抑菌性能進行了初步研究，方法如下：

（1）大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌分別24h斜面培養(yǎng)，培養(yǎng)物用PBS洗下，分別制成濃度為1×104～9×104cfu·mL-1菌懸液，備用；

（2）取測試樣液（所制備的“香參”防脫育發(fā)液）5mL和對照樣液（無菌水）5mL各4管；

（3）分別在測試樣液和對照樣液內滴加100μL菌懸液，均勻混合，開始計時，分別在2、5、10、20min時用無菌鑷將各樣液（0.5mL）投入含5mLPBS的試管內，充分混勻并適當稀釋，取其中3個稀釋度（分別為10-4、10-5、10-6），分別吸取各樣液0.5mL，置于2個平皿，用40～45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15mL作傾注，轉動平皿，使其混合均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，使其倒置。大腸埃希氏菌、金黃葡萄球菌37℃培養(yǎng)48h作活菌菌落計數(shù)，白色念球菌28℃培養(yǎng)72h作活菌菌落計數(shù)。

式中X:抑菌率%；Nc：對照樣品平均菌落數(shù)，cfu· mL-1；Ns：測試樣品平均菌落數(shù)，cfu·mL-1。

3.3 實驗結果

結果表明，在實驗條件下，“香參”防脫育發(fā)液對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌的抑制率隨著作用時間的延長而增大，當作用時間超過10min時，“香參”防脫育發(fā)液對3種細菌的抑制率均達到99%以上，表明該產品對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌有較強抑制、殺滅作用。

表1 原液濃度及大腸埃希氏菌菌落數(shù)Tab.1 Initial concentration and Escherichia coli colonies

表2 藥物作用不同時間后對大腸埃希氏菌的平均抑殺率Tab.2 Average killing rate after the drug effecting on Escherichia coli for different time

表3 原液濃度及金黃色葡萄球菌菌落數(shù)Tab3 Initial concentration and Staphylococcus aureus colonies

表4 藥物作用不同時間后對金黃色葡萄球菌的平均抑殺率Tab.4 Average killing rate after the drug effecting on Staphylococcus aureus for different time

表5 原液濃度及白色念珠菌菌落數(shù)Tab.5 Initial concentration and Candida albicans colonies

表6 藥物作用不同時間后對白色念珠菌的平均抑殺率Tab.6 Average killing rate after the drug effecting on Candida albicans for different time

4 “香參”防脫育發(fā)液的藥效學研究

4.1 對小鼠脫毛區(qū)體毛長度及重量的影響

4.1.1 實驗方法取小鼠36只，雌雄各半，適應性喂養(yǎng)3d，將其背部毛剪短，將脫毛劑（10%Na2S）涂于小鼠背部，3min后，溫水洗凈，以小鼠背部光滑，無傷無殘毛為凈，脫毛面積約2cm×2cm。

次日將脫毛小鼠隨機均分為6組，雌雄各半，其分組及給藥方案見表7。

表7 分組及給藥方案示意表Tab.7 Grouping and administration scheme of table

各組給藥后每3天，于同一時間觀察小鼠背部皮膚變化及毛發(fā)生長情況；并在每組小鼠脫毛區(qū)相同位置取最長毛6根，測定長度；18 d后，脫頸處死各組小鼠，取脫毛區(qū)毛皮，用14mm打孔器于每鼠脫毛區(qū)相同位置取圓形皮片，用手術刀刮下皮片上所有體毛，精密稱定。

4.1.2 實驗結果

圖1 陽性對照組、正常組和陰性對照組對小鼠毛發(fā)長度的影響Fig.1 Effect on murine hair length of the positive control group,normal control group and negative control group

由圖1可知，陽性對照組藥物促進小鼠毛發(fā)生長的作用強于正常組和陰性對照組，而“香參”防脫育發(fā)液高劑量組促進小鼠毛發(fā)生長的作用強于陽性對照組，且隨著時間延長差異增大。

圖2 陽性對照組、高劑量組對小鼠毛發(fā)長度的影響Fig.2 Effect on murine hair length of the positive control group and high dose group

由圖2可知，劑量組第3～6d和陽性對照組差異較小，但第9d以后差異變大；低劑量組在9d以前促進毛發(fā)生在的速度低于陽性對照組，9d以后其生長速度增大。

圖3 陽性對照組、中劑量組對小鼠毛發(fā)長度的影響Fig.3 Effect on murine hair length of the positive control group,middle dose group

圖4 陽性對照組、低劑量組對小鼠毛發(fā)長度的影響Fig.4 Effect on murine hair length of the positive control group,low dose group

由圖3、4可知，“香參”防脫育發(fā)液促進小鼠毛發(fā)生長的作用隨著劑量的增大而增強，且高劑量組小鼠的毛發(fā)長度顯著高于中劑量和低劑量。

圖5 高、中、低劑量組對小鼠毛發(fā)長度的影響Fig.5 Effect on murine hair length of the high,middle, low dose group

由圖5可知，高、中、低劑量組促進生長的毛發(fā)的重量高于陽性對照組、正常組和陰性對照組。

圖6 各給藥組對小鼠脫毛區(qū)體毛重量的影響Fig.6 Each group of mice body weight on the hair removal area

結果表明，“香參”防脫育發(fā)液具有顯著的促進小鼠毛發(fā)生長的作用，且其作用強度具有劑量依賴性。

4.2 對小鼠脫毛區(qū)皮膚組織學的影響

同4.1實驗操作，于第18日將各組小鼠處死，取脫毛區(qū)皮膚組織，用10%甲醛固定，沿毛囊縱向切面取組織3塊，每塊長1.5cm，常規(guī)組織脫水、石蠟包埋，HE染色，光鏡鏡檢觀察小鼠皮膚組織：（1）真皮淺層血管管徑（μm），隨機測定5個橫切毛細管管徑，計算平均數(shù)；（2）真皮淺層血管數(shù)（個），以200倍視野大小計數(shù)，數(shù)5個視野，計算平均數(shù)；（3）真皮淺層新生毛囊數(shù)（個），以100倍視野大小計數(shù)，數(shù)5個視野，計算平均數(shù)。結果見下表5。

表8 “香參”防脫育發(fā)液對小鼠脫毛區(qū)皮膚組織學的影響Tab.8 Influence on mouse hair removal skin histology of "Xiangshen"hair anti dropping liquid

結果表明，所有小鼠皮膚組織均無破損、水腫、充血、炎癥等反應，表皮無明顯增生。“香參”防脫育發(fā)液高、中、低3劑量組和陽性對照組、陰性對照組相比，均能增加小鼠脫毛區(qū)皮膚的真皮血管管徑和毛囊數(shù)，其中“香參”防脫育發(fā)液高、中劑量組小鼠的真皮血管管徑增加有明顯差異，小鼠的毛囊數(shù)增加亦有明顯差異。各給藥組真皮血管管徑和毛囊數(shù)比陰性對照組有明顯增加。實驗表明，“香參”防脫育發(fā)液能改善毛發(fā)營養(yǎng)，刺激毛囊與毛發(fā)再生。

5 結論

外用制劑具有使用方便，克服了長期口服給藥的不便、肝腎負擔與胃腸道刺激等副作用，且攜帶方便，可不間斷用藥而保證藥效，使藥物活性成分直達病所，本文中所得“香參”防脫育發(fā)液是在中醫(yī)藥理論指導下，針對脫發(fā)的病因病機進行選藥組方，具有滋補肝腎、滋陰補血、活血化瘀、祛風除濕、清熱涼血、燥濕化痰、健脾補氣、化瘀通絡的功效。實驗結果表明“香參”防脫育發(fā)液具有顯著的促進毛發(fā)生長的作用，且能夠有效抑制細菌滋生，并且可通過藥物成分對于經絡穴位的刺激增強藥效，長期使用，安全可靠。因此，“香參”防脫育發(fā)液具有廣闊的應用前景。

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Preparation and performance study of“Xiangshen”anti hair dropping and nourishing liquid*

ZHAO Ning，LI Wei-ze，KANG Xue-ning，WANG Huan，CUI Yan-hua
（College of Pharmaceutical Science,Xi'an Medical University,Xi'an 710021，China）

"Xiangshen"anti hair dropping and nourishing liquid was prepared,and the bacteriostatic performance and on hair growth promoting effect was studied;Under the guidance of Chinese medicine theory,"Xiang Shen"anti hair dropping and nourishing liquid was prepared by the method of water extraction and alcohol precipitation.Its antibacterial action and hair growth promoting effect on model mice were studied.The liquid antibacterial efficiency increased with the prolonging of time,when the time is more than 10 min,its inhibitory effect on Escherichia coli,Staphylococcus aureus,Candida albicans rate were more than 99%,and can significantly promote the mice hair grow,the strength of effect in a dose dependent manner.The liquid not only effectively inhibit bacterial growth and reproduction,and has significant effect on mice hair growth.It has good application prospects.

“Xiang Shen”antihairdropping and nourishing liquid；bacteriostatic；antihairdropping；hairgrowth

R932

A

1002-1124（2014）03-0061-04

2014-01-02

陜西省西安醫(yī)學院校級課題：純中藥“香參”育發(fā)精的研制（No.11FZ12）；陜西省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目：一種具有防脫育發(fā)作用的中草藥洗發(fā)乳研制（No.201211840013）

趙寧（1985-），女，碩士，講師。