香鱗毛蕨的化學(xué)成分研究

王 靜，曾偉民，劉國慶，張彥龍

黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江大學(xué)分子生物學(xué)省高校重點(diǎn)實驗室，哈爾濱150080

香鱗毛蕨(Dryopteris fragrans(L．)schott)為多年生落葉草本，屬于鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物，生長于高寒地區(qū)的滑石坡、森林中的碎石坡和火山周圍的巖漿縫隙中。我國的東北、華北、俄羅斯、日本以及歐美均有分布。另據(jù)五大連池地方志記載，達(dá)斡爾族居民在幾百年前就已經(jīng)使用香鱗毛蕨水煎液治療多種疾病，尤其對皮膚病療效獨(dú)特。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，香鱗毛蕨還具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多方面的藥理作用［1］。為了更深入的研究香鱗毛蕨的藥理活性，本實驗從香鱗毛蕨30%乙醇組分中分離鑒定了10個化合物，其中化合物4～10為首次從鱗毛蕨屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

香鱗毛蕨采于黑龍江省五大連池火山地區(qū)，經(jīng)東北林業(yè)大學(xué)植物學(xué)教授聶紹荃鑒定為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物香鱗毛蕨D．fragrans。植物標(biāo)本保存于黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物制藥實驗室。

Bruker AM-400和DRX-500型核磁共振波譜儀(Bruker公司)、DH-101型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(天津市中環(huán)試驗電爐有限公司);FD-1型冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康儀器有限公司);3300LH型超聲清洗儀(上?？茖?dǎo)有限公司);XRC-1型顯微熔點(diǎn)儀;Bio-Rad FTS-135型紅外光譜儀;UV-210A型紫外光譜儀;VG AUTO Spec-3000型質(zhì)譜儀;EYELA n-1100sw型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;100～200目拌樣用硅膠(青島海洋化工廠);200～300目層析用硅膠(青島海洋化工廠)及DM-130大孔樹脂(鄭州勤實科技有限公司);所用試劑均為分析純。

2 提取與分離

取干燥的香鱗毛蕨全草，粉碎后準(zhǔn)確稱取20 kg，每次加入10倍量蒸餾水，蒸汽提取三次，減壓濃縮。隨后將濃縮液進(jìn)行大孔樹脂柱色譜，用純水、30%、60%和95%的乙醇依次洗脫，得到水組分、30%乙醇組分、60%乙醇組分和95%乙醇組分。30%乙醇組分，進(jìn)行硅膠柱色譜，將氯仿甲醇按照19∶1、9∶1、8∶2、7∶3 和 1∶1 的比例混合進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測合并，減壓濃縮，得到氯仿/甲醇19∶1部分 FrⅠ、9∶1 部分 FrⅡ、8∶2 部分 FrⅢ、7∶3 部分FrⅣ和1∶1部分FrⅤ。將以上得到的五個組分分別利用不同比例氯仿/甲醇混合溶劑按照極性依次增大的順序進(jìn)行硅膠柱層析，TLC檢測合并，經(jīng)純化得到10個化合物(圖1)，分別為化合物1(135 mg)、2(3 mg)、3(12 mg)、4(55 mg)、5(5．6 mg)、6(7．2 mg)、7(172 mg)、8(42 mg)、9(6 mg)、10(130 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淺黃色針狀晶體，1H NMR(400 MHz，MeOD):δH6.22(s，H，H-3)，6.27(brs，1H，H-6)，6.34(brs，1H，H-8)，4.52(s，2H，H-11);13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:171.1(s，C-2)，106.4(d，C-3)，183.2(s，C-4)，163.4(s，C-5)，99.7(d，C-6)，164.9(s，C-7)，94.5(d，C-8)，158.9(s，C-9)，105.4(s，C-10)，61.1(t，C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［2］報道基本一致，鑒定化合物1為二羥基-2-甲基色原酮。

化合物2 褐色油狀物，1H NMR(600 MHz，MeOD)δH:7.06(d，J=2.3 Hz，1H，H-2)，6.80(s，J=8.3 Hz，1H，H-5)，6.97(dd，J=2.3，8.3 Hz，1H，H-6)，7.57(d，J=15.8 Hz，1H，H-7)，6.29(d，J=15.8 Hz，1H，H-8)，3.78(s，3H，H-10)。13C NMR(150 MHz，MeOD)δC:127.8(s，C-1)，115.2(d，C-2)，147.1(s，C-3)，149.8(s，C-4)，116.6(d，C-5)，123.1(d，C-6)，147.0(d，C-7)，114.9(d，C-8)，169.9(s，C-9)，52.2(q，C-10)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3，4］報道基本一致，鑒定化合物2為咖啡酸甲酯。

化合物 3 黃色粉末，1H NMR(400 MHz，MeOD)δH:5.32(dt，J=12.7，2.9 Hz，1H，H-2)，2.74(dt，J=17.2，3.3 Hz，2H，H-3)，6.18(d，J=2.0 Hz，1H，H-6)，6.21(d，J=2.0 Hz，1H，H-8)，6.91(brs，1H，H-2')，6.79(brs，1H，H-5')，6.77(brs，1H，H-6')，4.97(d，J=6.8 Hz，1H，H-1'')，3.88(d，J=12.1 Hz，1H，H-6''a)，3.69(dq，J=3.9，12.3 Hz，1H，H-6''b)，3.36 ～ 3.49(m，4H，H-2''，H-3''，H-4''，H-5'')。13CNMR(100 MHz，MeOD)δC:80.68(d，C-2)，44.04(t，C-3)，198.5(s，C-4)，164.9(s，C-5)，96.9(d，C-6)，166.92(s，C-7)，97.9(d，C-8)，164.6(s，C-9)，104.9(s，C-10)，131.45(s，C-1')，114.75(d，C-2')，147.0(s，C-3')，146.5(s，C-4')，116.2(d，C-5')，119.32(d，C-6')，101.16(d，C-1'')，74.6(d，C-2'')，71.1(d，C-3'')，77.8(d，C-4'')，78.2(d，C-5'')，62.3(t，C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報道相符，可以確定化合物3為2S-圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物 4 無色晶體，1H NMR(400 MHz，MeOD):δH:7.28(s，1H)，6.77(d，J=1.8 Hz，1H，H-2)，6.70(d，J=8.0 Hz，1H，H-5)，6.62(dd，J=8.0，1.8 Hz，1H，H-6)，2.59(t，J=7.6 Hz，2H，H-7)，1.8(m，2H，H-8)，3.56(t，J=6.5 Hz，2H，H-9)，3.82(s，3H，H-OCH3)。13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:134.9(s，C-1)，113.1(d，C-2)，148.8(s，C-3)，145.5(s，C-4)，116.1(d，C-5)，121.8(d，C-6)，32.7(t，C-7)，35.7(t，C-8)，62.3(t，C-9)，56.3(q，C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本符合，可以確定化合物4為二氫松柏醇。

化合物5 紫紅色無定形態(tài)粉末，1H NMR(400 MHz，MeOD)δH:6.07(t，J=2.2 Hz，1H，H-2)，6.12(d，J=2.2 Hz，2H，H-4，H-6)，2.42(t，J=7.4 Hz，2H，H-7)，1.59(m，2H，H-8)，0.92(t，J=7.4 Hz，3H，H-9)。13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:159.3(s，C-1，C-3)，100.9(d，C-2)，107.9(d，C-4，C-6)，146.1(s，C-5)，39.1(t，C-7)，25.5(t，C-8)，14.1(q，C-9)。與文獻(xiàn)［7］對照，其波譜數(shù)據(jù)基本吻合，可以確定化合物5為1，3-二羥基-5-丙基苯。

化合物6 無色油狀物，1H NMR(400 MHz，MeOD)δH:1.64(1H，m，H-2a)，1.26(1H，m，H-2b)，3.72-3.80(m，1H，H-3)，1.67(1H，m，H-4a)，2.29(dd，J=14.8 Hz，4.9，1H，H-4b)，7.17(d，J=15.8 Hz，1H，H-7)，6.19(d，J=15.8 Hz，1H，H-8);2.30(s，3H，H-10)，1.18(s，3H，H-11)，1.19(s，3H，H-12)，0.96(s，3H，H-13)，13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:36.1(s，C-1)，47.6(t，C-2)，64.4(d，C-3)，41.3(t，C-4)，68.8(s，C-5)，70.8(s，C-6)145.4(d，C-7)，133.8(d，C-8)，200.2(s，C-9)，27.4(q，C-10)，29.8(q，C-11)，25.1(q，C-12)，20.0(q，C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報道基本一致，鑒定化合物6為3β-羥基-5α，6α-環(huán)氧-7-大柱香波龍烯-9-酮。

化合物 7 白色粉末，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δH:6.73(d，J=7.9 Hz，1H，H-3)，7.20(dt，J=7.9，1.9 Hz，1H，H-4)，6.80(dt，J=7.9，1.9 Hz，1H，H-5)，7.30(dd，J=7.9，1.9 Hz，1H，H-6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報道基本一致，鑒定化合物7為2-羥基苯甲酸。

化合物8 白色晶體，1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δH:7.17(s，1H，H-2)，6.87(d，J=7.6 Hz，1H，H-5)，7.06(d，J=7.6 Hz，1H，H-6)，7.61(d，J=15.8 Hz，1H，H-7)，6.34(d，J=15.8 Hz，1H，H-8)。13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δC:127.0(s，C-1)，115.1(d，C-2)，146.2(s，C-3)，148.6(s，C-4)，116.5(d，C-5)，122.7(d，C-6)，145.5(d，C-7)，116.3(d，C-8)，168.1(s，C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報道相符，可以確定化合物8為咖啡酸。

化合物9 白色針狀晶體，1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δH:7.55(d，J=8.2 Hz，2H，H-2，H-6)，6.89(d，J=8.2 Hz，2H，H-3，H-5)，2.27(s，3H，H-8)。13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δC:127.8(s，C-1)，130.1(d，C-2，C-6)，115.7(d，C-3，C-5)，160.5(s，C-4)，198.0(s，C-7)，27.2(q，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本符合，可以確定化合物9為對羥基苯乙酮。

化合物10 淡黃色晶體，1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δH:5.36(dd，J=2.9，12.9 Hz，1H，H-2)，2.69(dd，J=2.9，17.4 Hz，2H，H-3α，H-3β)，5.91(d，J=2.1 Hz，1H，H-6)，5.93(d，J=2.1 Hz，1H，H-8)，7.01(s，1H，H-2')，6.84(s，2H，H-5'，H-6')。13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δC:79.9(d，C-2)，43.4(t，C-3)，197.3(s，C-4)，165.1(s，C-5)，96.7(d，C-6)，167.7(s，C-7)，95.8(d，C-8)，164.8(s，C-9)，103.8(s，C-10)，131.2(s，C-1')，114.6(d，C-2')，146.1(s，C-3')，146.5(s，C-4')，115.9(d，C-5')，119.0(d，C-6')。與文獻(xiàn)［12］對照，其波譜數(shù)據(jù)基本吻合，可以確定化合物10為圣草素。

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