醒脾解郁方對抑郁模型大鼠抑郁行為和血清5-羥色胺、皮質(zhì)酮的影響

王椿野郭蓉娟

（1中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700；2北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京，100078）

實驗研究

醒脾解郁方對抑郁模型大鼠抑郁行為和血清5-羥色胺、皮質(zhì)酮的影響

王椿野1郭蓉娟2

（1中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700；2北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京，100078）

目的：初步探索醒脾解郁方對抑郁模型大鼠的抗抑郁行為和血清激素、神經(jīng)遞質(zhì)變化的影響。方法：本實驗將SD大鼠隨機分為4組：正常組、模型對照組、舍曲林對照組、中藥（石菖蒲、西洋參、郁金、熟地黃）組，采用21 d慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激建立抑郁大鼠模型，以糖水偏愛和曠野試驗移動距離評價各組大鼠抑郁行為，用ELISA法測定大鼠血清5-羥色胺、皮質(zhì)酮含量，并比較醒脾解郁方對其影響的作用。結(jié)果：21 d慢性應(yīng)激建立大鼠抑郁模型后，與正常組比較，模型組體重降低明顯（P＜0.01），糖水偏愛率、曠場試驗移動距離顯著下降（P＜0.01），同時模型組血清皮質(zhì)酮含量顯著增加（P＜0.01）、5-HT明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組均能顯著改善大鼠抑郁行為（P＜0.05），并且醒脾解郁方和舍曲林均對抑郁大鼠血清皮質(zhì)酮、5-HT均有顯著逆轉(zhuǎn)作用（P＜0.05）。結(jié)論：醒脾解郁方具有抗抑郁作用，并與舍曲林效果相當，并能逆轉(zhuǎn)抑郁模型大鼠血清皮質(zhì)酮、5-HT的作用，這可能是其改善抑郁的作用機制。

慢性不可預(yù)見性應(yīng)激；抑郁癥；醒脾解郁法；5-HT；皮質(zhì)酮

抑郁癥是由多種因素引起的，以心境低落為主要癥狀的一種精神障礙性疾病。抑郁癥會對人的神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)的生理病理功能產(chǎn)生嚴重影響。其具有高發(fā)病率、低治愈率、高復(fù)發(fā)率等特點，給患者造成的身心危害，給家庭及社會帶來的沉重的經(jīng)濟和精神負擔。世界衛(wèi)生組織預(yù)測，抑郁癥將在2020年成為全球排位在第二位的疾病，嚴重危害眾多人們的健康，且抑郁癥患者存在自殺危險性是正常人的11倍［1］。抑郁癥的機制普遍認為抑郁患者純在5-羥色胺（5-HT）等神經(jīng)遞質(zhì)的異常，及下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）功能異常。目前，抗抑郁藥在臨床上廣泛應(yīng)用，多數(shù)藥物是基于腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的代謝異常，及其受體、轉(zhuǎn)運體功能障礙的機制假說而研發(fā)的，通過提升神經(jīng)元突觸間隙內(nèi)5-HT和去甲腎上腺素（NE）濃度起到治療作用，包括5-HT、NE轉(zhuǎn)運體抑制劑和單胺氧化酶抑制劑。然而，抗抑郁藥不總是有效，且存在不良反應(yīng)較大、起效緩慢等問題。中醫(yī)藥對抑郁癥的認識和治療歷史悠久，普遍認為歸屬于“郁病”范疇，病機涉及肝、脾，病機多見肝郁脾虛等［2-4］。醒脾解郁方方藥少而精，基于上述中醫(yī)病機認識組成，本實驗主要探討醒脾解郁方對慢性不可預(yù)見性應(yīng)激致抑郁大鼠模型的抗抑郁作用，及其對大鼠血清5-HT、皮質(zhì)酮的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 清潔級健康成年雄性SD大鼠，體重（210～230 g），由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供并飼養(yǎng)（合格證號：SCXK-2012-0001）。溫度24～26℃，明暗循環(huán)（各12 h），標準顆粒飼料飼養(yǎng)，純凈飲水。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機分成4組，即正常組、模型組、舍曲林組、中藥組，每組10只。除正常組外，各給藥組和模型組大鼠均單籠飼養(yǎng)。

1.2 藥物干預(yù) 鹽酸舍曲林片：輝瑞制藥公司生產(chǎn)（國藥準字H10980141），50 mg片。醒脾解郁方：石菖蒲、西洋參、郁金、熟地黃，購自北京康仁堂藥業(yè)有限公司。舍曲林組灌胃給予10 mgkg，中藥組灌胃給予600 mgkg，連續(xù)給藥21 d，正常組、模型組每日等劑量生理鹽水灌胃。

1.3 慢性不可預(yù)見性應(yīng)激致抑郁模型大鼠的建立 慢性應(yīng)激方法具體如下［5-6］：將鼠籠傾斜24 h，明暗顛倒24 h，10℃冰水游泳5 min，25℃熱水游泳30 min，夾尾1 min，水平搖晃5 min，濕墊料24 h，共7種刺激隨機安排到21 d內(nèi)，1種d，每種刺激至少出現(xiàn)2次，同種刺激不能連續(xù)出現(xiàn)，使動物不能預(yù)料刺激的發(fā)生，連續(xù)給予21 d應(yīng)激。

1.4 糖水偏愛測試 所有大鼠在模型建立前后進行糖水偏好實驗。動物在禁食禁水20 h后放入1瓶1%的蔗糖水和1瓶普通飲用水，2瓶位置隨機，觀察其在1 h內(nèi)的液體消耗量，排除飲水瓶滴漏所致的液體消耗量。糖水偏愛＝糖水消耗總液體消耗×100%。

1.5 曠場試驗 裝置由不透明木材制造，周圍為高40 cm的木墻，底面為100 cm×100 cm的正方形，被分為25個等邊方格，內(nèi)壁涂滿黑色漆料。模型建立前后1 d的14：00～18：00在安靜的房間內(nèi)進行。每只大鼠只進行1次測定，測定完畢后徹底清潔敞箱再進行下1只。糖水偏好試驗結(jié)束后，將大鼠放入中心方格內(nèi)，觀察其在3 min內(nèi)穿越格數(shù)（4爪均進入方格才記數(shù)，為水平運動得分）、后肢直立次數(shù)（2前爪騰空或攀附墻壁，為垂直運動得分），記錄移動距離。

1.6 血清5-HT和皮質(zhì)酮含量的影響 用ELISA法測定大鼠血清皮質(zhì)酮、5-HT的含量。試劑：皮質(zhì)酮、5-HT測試盒由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，用ELISA法檢測血清中皮質(zhì)酮、5-HT含量，測定按照試劑盒說明嚴格進行。主要儀器Sunrise Romote酶標儀（天津天美國際貿(mào)易有限公司），離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠），分析天平等。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 體重 造模前各組大鼠體重無統(tǒng)計學(xué)意義。21 d慢性應(yīng)激后，與正常組比較，模型組大鼠體重顯著降低（P＜0.01），而中藥組和舍曲林組大鼠體重無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（見表1）。

表1 大鼠體重變化

2.2 抑郁行為學(xué)評價（糖水偏愛試驗和曠場試驗）造模前各組大鼠的糖水偏愛率無統(tǒng)計學(xué)意義。21 d慢性應(yīng)激后，與正常組比較，模型組大鼠糖水偏愛率顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組顯著增加抑郁大鼠糖水偏愛率（P＜0.05）。21 d慢性應(yīng)激后，與正常組比較，模型組大鼠活動路程顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組大鼠運動路程顯著降低（P＜0.05）（見表2）。

表2 抑郁行為學(xué)變化

2.3 血清皮質(zhì)酮和5-HT的影響 21 d慢性應(yīng)激后，與正常組比較，模型組大鼠皮質(zhì)酮顯著升高、5-HT顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組均能顯著降低抑郁大鼠皮質(zhì)酮（P＜0.05），明顯增加抑郁大鼠5-HT含量（P＜0.05）（見表3）。

表3 大鼠血清皮質(zhì)酮、5-HT變化

3 討論

抑郁癥患者在國內(nèi)外的發(fā)病率逐漸增加，在我國據(jù)有關(guān)報道，抑郁癥患者已經(jīng)超過2 600萬，抑郁癥正逐漸成為嚴重危害人名健康的重大公共衛(wèi)生問題，給患者和社會造成了沉重的負擔，并且抑郁癥患者自殺和自殺未遂者占我國自殺和未遂人數(shù)的50%～70%［7-8］，成為致病致殘的重要病因之一。目前，在抑郁癥機制研究中，認可度較高是下丘腦-垂體-腎上腺（Hypothalamic-pituitary-adrenocortical，HPA）軸異常假說和單胺遞質(zhì)假說。

當機體受到外界刺激時，會導(dǎo)致一系列的應(yīng)激反應(yīng)，其本質(zhì)是一系列的神經(jīng)內(nèi)分泌變化，其中HPA軸是關(guān)鍵機制，其生理機制如下［9］：首先，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（Corticotropin-releasing Hormone，CRH）在室旁核神經(jīng)元分泌，經(jīng)過垂體門脈系統(tǒng)到達刺激垂體，垂體釋放促腎上腺皮質(zhì)激素（Adrenocorticotropic Hormone，ACTH），ACTH經(jīng)過體循環(huán)到達腎上腺皮質(zhì)，促進糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoid，GC）的釋放，在靈長類動物主要為皮質(zhì)醇，在齲齒類動物主要為皮質(zhì)酮，最后，GC分別通過作用于海馬糖皮質(zhì)激素受體（Glucocorticoid Receptor，GR）和垂體、腎上腺受體，減少ACTH的釋放及阻斷其興奮效用，形成反饋機制。

在抑郁癥患者中，HPA軸呈功能亢進狀態(tài)［10］。其原因包括兩方面：一方面由于應(yīng)激的持續(xù)存在，機體產(chǎn)生過多的GC，與海馬GR結(jié)合，導(dǎo)致海馬損傷；另一方面，在持續(xù)應(yīng)激下海馬神經(jīng)元功能和結(jié)構(gòu)損傷，對HPA軸的抑制作用減弱，對HPA軸負反饋作用減弱，機體會生產(chǎn)更多的GC，形成惡性循環(huán)。海馬是情緒和學(xué)習記憶的重要腦區(qū)，海馬神經(jīng)元可塑性損傷后，導(dǎo)致抑郁癥患者發(fā)生情緒和認知障礙。

單胺假說認為，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度和活性下降是抑郁癥發(fā)生的重要機制。單胺神經(jīng)遞質(zhì)和其受體結(jié)合后，發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達的作用。5-HT系統(tǒng)異常是抑郁癥重要神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)之一，有研究表明，抑郁癥患者多伴有5-HT含量下降［11］。5-HT可以調(diào)節(jié)第二信使cAMP介導(dǎo)的信號級聯(lián)反應(yīng)，如激活轉(zhuǎn)錄因子CREB、激活BDNF的相關(guān)基因表達等［12］。慢性應(yīng)激過程中，海馬神經(jīng)元5-HT及其受體功能異常，影響了海馬的生理功能［13］。

本研究所采用的21 d慢性不可預(yù)見性應(yīng)激致抑郁大鼠模型的造模方法，被國內(nèi)外神經(jīng)科學(xué)者廣泛應(yīng)用，屬于經(jīng)典的抑郁模型之一，該方法很好的模擬了人類的抑郁癥狀和復(fù)雜的應(yīng)激環(huán)境，造模后模型穩(wěn)定［14］。模擬了抑郁癥的興趣喪失、快感缺乏、運動能力下降等核心癥狀［15］。本研究旨在探討醒脾解郁方是否可以通過調(diào)節(jié)血清5-HT、皮質(zhì)酮的含量起到抗抑郁作用。結(jié)果顯示：抑郁模型大鼠的血清5-HT明顯下降、皮質(zhì)酮顯著增加，與正常組比較有統(tǒng)計學(xué)意義，這與其他研究結(jié)果一致［16］。醒脾解郁方組成方藥數(shù)量較少，臨床應(yīng)用時間較長，在本次研究中發(fā)現(xiàn)醒脾解郁方可以明顯改善抑郁大鼠的糖水偏愛和曠場試驗中表現(xiàn)的抑郁行為，并與舍曲林效果相當；在逆轉(zhuǎn)血清5-HT、皮質(zhì)酮含量方面，也與舍曲林相當，其可以增高抑郁大鼠血清5-HT含量，降低血清皮質(zhì)酮的含量。抑郁癥機制尚不清楚，目前的抗抑郁藥也不能100%有效，除了上文論述的抑郁癥機制外，還涉氧化應(yīng)激、炎性因子等方面?，F(xiàn)在普遍認為中醫(yī)藥通過多靶點、多途徑、多層面在抑郁癥的治療中發(fā)揮作用，筆者等正在對醒脾解郁方在抑郁癥炎性因子方面的作用機制進行實驗研究。相信通過中醫(yī)藥對抑郁癥不同機制干預(yù)作用的探討，將進一步加深對抑郁癥相關(guān)機制的了解，并對提高抑郁癥的療效起到巨大作用。

［1］DAVIDSONR J，LEWIS D A，ALLOY L B，et al.Neural and behavior substrates of mood and mood regulation［J］.Biological psychiatry，2002，52（6）：478-502.

［2］張海男，胡隨瑜，陳澤奇，等.抑郁癥常見中醫(yī)證候類型第一輪專家問卷分析［J］.湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2002，27（6）：519-521.

［3］唐啟盛，曲淼，包祖曉，等.抑郁癥中醫(yī)證候規(guī)律及診療標準制定的研究［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，34（2）：77-81.

［4］李濤，梅妍，張鑫，等.關(guān)于抑郁癥辨證分型及常見癥狀的第1輪專家問卷分析［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，17（11）：1-2.

［5］Guo JY，Ruan YP，et al.Chronic treatment with celecoxib reverses chronic unpredictable stress-induced depressive-like behavior via reducing cyclooxygenase-2 expression in rat brain［J］.Eur J Pharmacol，2009，612（13）：54.

［6］Dang H，Chen Y，Liu X，et al.Antidepressant effects of ginseng total saponins in the forced swimming test and chronic mild stress models of depression［J］.Prog Neuropsycho-pharmacol Biol Psychiatrv，2009，33（8）：1417.

［7］毛慶秋，黃真.中藥治療抑郁癥的作用機制研究進展［J］.中國中藥雜志，2007，23（10）：877.

［8］姚李吉，沈洪.抗抑郁中醫(yī)方藥的實驗研究進展［J］.光明中醫(yī)，2008，23（5）：696.

［9］沈漁邨.精神病學(xué)［M］.5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：663.

［10］董瑞婕，吳愛勤.糖皮質(zhì)激素受體在抑郁癥病理機制中的地位［J］.上海精神醫(yī)學(xué)，2008，20（4）：243.

［11］Oquendo MA，Placidi GP，Malone KM，et al.Positron emission tomography of regional brain metabolic responses to a serotonergic challenge and lethality of suicide attempts in major depression［J］.Arch Gen Psychiatry，2003，60（1）：14-22.

［12］Duman RS，Heninger GR，Nestler EJ.Amolecular and cellular theory of depression［J］.Arch Gen Psychiatry，1997，54：597-606.

［13］Stockmeier CA，Mahajan GJ，Konick KLC，et al.Cellular changes in the postmortem hippocampus in major depression［J］.Biol Psychiatry，2004，56（9）：640-50.

［14］Lin YH，Liu AH，Xua Y，et al.Effect of chronic unpredictable mild stress on brain-pancreas：relative protein in rat brain and pancreas［J］. Behav Brain Res，2005，165（1）：63-71.

［15］許晶，李曉秋.慢性應(yīng)激抑郁模型的建立及其評價［J］.中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2003，12（1）：14-17.

［16］Ulrich-lai YM，F(xiàn)igueire do HF，Ostrander MM，et al.Chronic stress induces adrenal Hyperplasia and hypertrophy in a subregion-specific manner［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2006，291（5）：1965.

（2014-04-09收稿 責任編輯：曹柏）

The Effect of Xingpijieyu Decoction on Depressive Behavior and Serum 5-HT as well as Corticosterone of Depression Rats from Chronic Stress

Wang Chunye1，Guo Rongjuan2
（1 China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China；2 Dong Fang Hospital of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China）

Objective：To preliminarily explore the effect of Xingpijieyu decoction on depressive behavior and serum 5-HT and corticosterone on depression model rats.Methods：SD rats were randomly divided into 4 groups：normal group，model control group，sertraline control group，and traditional Chinese medicine（stone calamus，American ginseng，radix curcumae，cultivated land）group.21 days chronic unpredictable mild stress was adopted to establish the rat model of depression，using sucrose preference and open-field test to evaluate depression of rats，and compare the change of 5-HT and corticosterone form every groups of rats by ELISA.Results：After 21 days of chronic stress depression rats model made，compared with normal group，weight，preference for sugar water rate and open-field total distance of the model group were significantly decreased（P＜0.01），and serum corticosterone increased significantly（P＜0.01），serum 5-HT significantly decreased（P＜0.01）；Compared with model group，sertraline group and Chinese medicine group both could improve depressive behavior（P＜0.05），and reverse serum 5-HT and corticosterone significantly（P＜0.05）.Conclusion：Xingpijieyu Decoction can improve chronic unpredictable stress depression rats model depression function，which is the same as sertraline controls.Xingpijieyu decoction also could reverse erum 5-HT and corticosterone from depression rats，which might be related to its improvement of depression.

Chronic unpredictable stress；Depression；5-HT；Corticosterone；Xingpijieyu decoction

R332；R277.7

A

10.3969j.issn.1673-7202.2014.12.019

國家自然科學(xué)基金面上項目（編號：81273624）

王椿野（1981—），中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院博士后，研究方向：中醫(yī)心身醫(yī)學(xué)，E-mail：chaojichunye＠hotmail.com

郭蓉娟（1964—），女，博士，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)藥防治腦病基礎(chǔ)及臨床研究，E-mail：dfguorongjuan＠163.com