雷公藤多甙對(duì)老年大鼠腎小球腎炎的療效及炎癥指標(biāo)的影響

劉 珊 劉倫志 覃智慧 楊曉芬 (湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院腎內(nèi)科，恩施 445000)

雷公藤多甙對(duì)老年大鼠腎小球腎炎的療效及炎癥指標(biāo)的影響

劉 珊 劉倫志 覃智慧 楊曉芬 (湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院腎內(nèi)科，恩施 445000)

目的:觀察雷公藤多甙對(duì)老年大鼠腎小球腎炎的療效及炎癥指標(biāo)的影響。方法:將老年清潔級(jí)Wistar大鼠(18月齡)隨機(jī)分為雷公藤組、對(duì)照組、模型組，在雷公藤組及模型組大鼠上建立系膜增生性腎小球腎炎模型，雷公藤組采用雷公藤干預(yù)。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)12周后，模型組及雷公藤組大鼠24 h尿蛋白均顯著高于實(shí)驗(yàn)前及對(duì)照組水平(P＜0.05);雷公藤組24 h尿蛋白顯著小于模型組(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)12周后，模型組及雷公藤組TG、TC均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，同時(shí)ALB顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。雷公藤組大鼠TG及TC顯著低于模型組(P＜0.05)，但ALB顯著高于模型組(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)12周后，雷公藤組大鼠腎臟病理分級(jí)為0～1級(jí)的比例顯著高于模型組(χ2=6.667，P=0.010)。實(shí)驗(yàn)12周后，與對(duì)照組及雷公藤組相比較，模型組腎小球系膜TNF-α及IL-6表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)。結(jié)論:雷公藤多甙可以抑制老年腎小球腎炎大鼠腎小球系膜內(nèi)炎癥因子的表達(dá)，改善組織學(xué)表現(xiàn)及臨床癥狀。

腎小球腎炎;老年大鼠;雷公藤多甙;炎癥因子

系膜增生性腎小球腎炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN)是一種原發(fā)性腎臟自身免疫性疾病，其病理學(xué)特征為彌漫性腎小球系膜細(xì)胞增生及不同程度系膜基質(zhì)增多[1]。MsPGN發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，且無特效治療方法，疾病呈現(xiàn)進(jìn)行性發(fā)展[2]，是各種原發(fā)性腎臟疾病中較為常見的一種。但多數(shù)免疫抑制劑藥物對(duì)老年腎小球腎炎患者治療效果較差[3]。雷公藤多甙是一種具有抗炎、免疫抑制作用的中藥提取物，被用于治療腎小球腎炎多年[4]。我們嘗試在大鼠腎小球腎炎模型鼠上采用雷公藤多甙治療，以期為臨床研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇清潔級(jí)Wistar大鼠30只，體重(200±30)g，雌雄對(duì)半。采用標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)至18月齡(老年大鼠)。隨機(jī)分為模型組、對(duì)照組、雷公藤組，每組10只。

1.2 腎小球腎炎模型制備 將模型組及雷公藤組大鼠建立慢性系膜增生性腎小球腎炎模型。具體方法為:切除大鼠右側(cè)腎臟(誘導(dǎo)殘余腎形成高濾過、高灌注、高跨膜壓狀態(tài))，對(duì)照組行開腹手術(shù)但不切除腎臟。術(shù)后大鼠修養(yǎng)1周。模型組及雷公藤組大鼠接受弗氏佐劑(0.1 ml)及陽離子化牛血清白蛋白

(C-BSA)3 mg足墊皮下注射，1、2周末加強(qiáng)2次。第3周末，腹腔內(nèi)注射C-BSA 4次，劑量分別為0.5、1.0、1.5、3.0 mg，次日再加強(qiáng)注射 2.0 mg。此后每日注射C-BSA，逐步增加劑量(每日增加0.5 mg)至5.0 mg/日，繼而每周增加劑量1 mg/日至10 mg/日為止。對(duì)照組大鼠給予相應(yīng)劑量生理鹽水注射。

1.3 藥物干預(yù) 雷公藤組大鼠自造模第5周起進(jìn)行藥物干預(yù)。具體方法為:每日雷公藤多甙片[24 mg/(kg·d)]，溶于水后灌胃。

1.4 尿蛋白及血生化測(cè)定 于實(shí)驗(yàn)開始前1日及處死大鼠前1日(第12周)將大鼠置于金屬代謝籠收集24 h尿液。24 h尿蛋白=尿蛋白濃度×24 h尿量。處死大鼠時(shí)通過腹主動(dòng)脈采血，凍存待測(cè)。檢測(cè)指標(biāo)包括:尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、白蛋白(ALB)。

1.5 組織學(xué)觀察 處死大鼠時(shí)摘取腎臟行HE染色，光鏡下觀察大鼠腎臟病理并分級(jí)。具體分為4級(jí):0級(jí):正常;Ⅰ級(jí):系膜增生呈現(xiàn)階段性分布，但寬度小于毛細(xì)血管直徑;Ⅱ級(jí):系膜增生呈現(xiàn)彌漫性分布，寬度大于毛細(xì)血管直徑;Ⅲ級(jí):系膜增寬呈現(xiàn)彌漫狀分布，且呈現(xiàn)團(tuán)塊狀聚集。

1.6 腎小球系膜炎癥因子表達(dá) 處死大鼠后留取腎小球系膜組織采用Western blot檢測(cè)系膜組織腫瘤壞死因子 α(TNF-α)及白介素6(IL-6)的表達(dá)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x-±s表示，比較采用t檢驗(yàn)。率的比較使用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組24 h尿蛋白定量測(cè)定 詳細(xì)情況見表1。對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)12周時(shí)24 h尿蛋白定量測(cè)定無顯著差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)前3組大鼠24 h尿蛋白定量檢測(cè)相比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。12周后，模型組及雷公藤組大鼠24 h尿蛋白均顯著高于實(shí)驗(yàn)前及對(duì)照組水平(P＜0.05);雷公藤組24 h尿蛋白顯著小于模型組(P＜0.05)。

2.2 各組腎功能、血脂、血漿蛋白水平的比較 詳見表2。實(shí)驗(yàn)12周后，3組大鼠在BUN及Scr上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。模型組及雷公藤組TG、TC均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，同時(shí)ALB顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。雷公藤組大鼠TG及TC顯著低于模型組(P＜0.05)，但ALB顯著高于模型組(P ＜0.05)。

2.3 各組大鼠腎臟病理分級(jí) 各組大鼠腎臟病理組織圖片見圖1(H＆E染色)，病理分級(jí)見表3，實(shí)驗(yàn)12周后，雷公藤組大鼠腎臟病理分級(jí)為0～1級(jí)的比例顯著高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 6.667，P=0.010)。

2.4 各組大鼠腎小球系膜TNF-α及IL-6的表達(dá)

與對(duì)照組及雷公藤組相比較，模型組腎小球系膜TNF-α及IL-6表達(dá)量顯著升高，見圖2。

表1 各組24 h尿蛋白定量測(cè)定(mg/d)Tab.1 Determination of 24 h urine protein quantitative in each group(mg/d)

圖1 各組大鼠腎臟病理Fig.1 Renal pathology of each group

表2 各組腎功能、血脂、血漿蛋白水平的比較Tab.2 Compare of renal function，blood fat and plasma proteins among three groups

表3 各組大鼠腎臟病理分級(jí)Tab.3 Classification of renal pathology in each group

圖2 各組大鼠腎小球系膜TNF-α及IL-6的表達(dá)Fig.2 Compare of levels of TNF-α and IL-6 in glomerular mesangial among three groups

3 討論

本研究嘗試在老年大鼠上模擬系膜增生性腎小球腎炎，并采用雷公藤多甙進(jìn)行干預(yù)，旨在為老年腎小球腎炎的臨床研究提供參考。在動(dòng)脈模型建立上借助單側(cè)腎臟切除的方法建立殘存腎臟的高濾過、高跨膜壓、高灌注狀態(tài)，這縮短了動(dòng)物模型建立所需時(shí)間。同時(shí)使得原本分布于雙側(cè)腎臟的循環(huán)免疫復(fù)合物集中于單側(cè)殘余腎，其臨床及免疫學(xué)指標(biāo)改變更為明顯。該動(dòng)物模型的組織學(xué)改變、臨床癥狀與人腎小球腎炎極為相似，符合我們的實(shí)驗(yàn)要求。

老年腎小球腎炎患者對(duì)藥物的耐受性較差，反應(yīng)欠靈敏[5]。雷公藤多甙是從中藥雷公藤中提取的單體物質(zhì)，其具有較強(qiáng)的免疫抑制、抗炎等作用。其在臨床上被廣泛用于治療風(fēng)濕性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病及腎炎[6]。有研究表明其可以延緩腎小球硬化、減輕腎小球肥大[7]。在提高腎小球血流量的同時(shí)，不增加腎小球內(nèi)壓力[7]。免疫學(xué)研究表明，雷公藤多甙通過多種途徑抑制免疫應(yīng)答反應(yīng)，其可以誘導(dǎo)CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡，激活抑制性T淋巴細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能受到抑制后，其下游的IL-6及TNF-α表達(dá)量將會(huì)下降[8]。從而減輕腎臟內(nèi)過度的炎癥反應(yīng)，減緩疾病的進(jìn)程。理論上，雷公藤是治療腎小球腎炎的理想藥物[9]。

我們的研究顯示，12周后，模型組及雷公藤組大鼠24 h尿蛋白均顯著高于實(shí)驗(yàn)前及對(duì)照組水平，而雷公藤組24 h尿蛋白顯著小于模型組。尿蛋白量是衡量腎臟受損的主要臨床指標(biāo)，這說明雷公藤在改善老年腎小球腎炎大鼠的臨床癥狀上具有確切療效。在實(shí)驗(yàn)12周后，模型組及雷公藤組TG、TC均顯著高于對(duì)照組，同時(shí)ALB顯著低于對(duì)照組。雷公藤組大鼠TG及TC顯著低于模型組，但ALB顯著高于模型組。這說明雷公藤在改善腎小球腎炎大鼠腎功能的同時(shí)，具有維持營養(yǎng)狀況及調(diào)節(jié)血脂的作用。進(jìn)一步組織學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)12周后雷公藤組大鼠腎臟病理分級(jí)為0～1級(jí)的比例顯著高于模型組。分子學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤組大鼠腎小球系膜TNF-α及IL-6表達(dá)量顯著低于模型組，與對(duì)照組相比無顯著差異。這提示我們，雷公藤可能通過抑制系膜內(nèi)炎癥因子的表達(dá)而減輕腎臟內(nèi)過度炎癥反應(yīng)。

綜上所述，我們的研究顯示雷公藤多甙可以抑制老年腎小球腎炎大鼠腎小球系膜內(nèi)炎癥因子的表達(dá)，改善組織學(xué)表現(xiàn)及臨床癥狀。

[1]Liu H，Zhang XP，Yi ZW.Efficacy of antisense monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)in a rat model of mesangial proliferative glomerulonephritis[J]. Ren Fail，2013，35(10): 1418-1428.

[2]Kosaka S，Osada S，Kaneko T，et al.Cutaneous vasculitis and glomerulonephritis associated with C4 deficiency[J].Clin Exp Dermatol，2013，38(5):492-495.

[3]Fujiwara T，Komatsuda A，Ohtani H，et al.Proliferative glomerulonephritis with monoclonal IgG deposits in a patient with autoimmune hemolytic anemia[J].Clin Nephrol，2013，79(6): 494-498.

[4]Ren J，Wu X，Liao N，et al.Prevention of postoperative recurrence of Crohn′s disease:Tripterygium wilfordii polyglycoside versus mesalazine[J].J Int Med Res，2013，41(1):176-187.

[5]Fang W，Peng F，Yi T，et al.Biological activity and safety of Tripterygium extract prepared by sodium carbonate extraction[J].Molecules，2012，17(9):11113-11123.

[6]Li CJ，Xie FG，Yang JZ，et al.Two sesquiterpene pyridine alkaloids and a triterpenoid saponin from the root barks of Tripterygium hypoglaucum[J].J Asian Nat Prod Res，2012，14(10): 973-980.

[7]Xue M，Jiang ZZ，Wu T，et al.Protective effects of tripterygium glycoside-loaded solid lipid nanoparticles on male reproductive toxicity in rats[J].Arzneimittelforschung，2011，61(10):571-576.

[8]Fu Y，Zhao Z，Wu Y，et al.Therapeutic mechanisms of Tongmai Dasheng Tablet on tripterygium glycosides induced rat model for premature ovarian failure[J].J Ethnopharmacol，2012，139(1): 26-33.

[9]Li J，Lu Y，Xiao C，et al.Comparison of toxic reaction of Tripterygium wilfordii multiglycoside in normal and adjuvant arthritic rats[J].J Ethnopharmacol，2011，135(2):270-277.

[收稿2014-01-10 修回2014-02-19]

(編輯 倪 鵬)

Analyse curative effect and immune indices of tripterygium glycosides on aged glomerulonephritis rats

LIU Shan，LIU Lun-Zhi，TAN Zhi-Hui，YANG Xiao-Fen.Renal Department of Internal Medicine，Hubei Institute for Nationalities Affiliated People Hospital，Enshi 445000，China

Objective:To analyse the curative effect and immune indices of tripterygium glycosides on glomerulonephritis rats.MethodsAged Wistar rats were randomly divided into 3 groups，Group A:glomerulonephritis model rats

tripterygium glycosides treatment;Group B:healthy Wistar rats received no treatment;Group C:glomerulonephritis model rats received no treatment.Results12 weeks after experiment，Group A and Group C had higher levels of 24-hour urine protein than Group B and these of preexperiment(P ＜0.05).Group A had a lower level of 24-hour urine protein than Group C(P ＜0.05).Group A and Group C had higher levels of TG，TC than Group B，with lower levels of ALB than Group B(P ＜0.05).Group A had lower levels of TG，TC than Group C，but a higher level of ALB than Group C(P ＜0.05).Group A had a higher rate of 0-1 grades in pathology grade than group C(χ2=6.667，P=0.010).Group C had higher levels of TNF-α and IL-6 than Group B and Group A(P ＜ 0.05).ConclusionTripterygium glycosides can reduce the urine protein excretion of rats that with mesangial proliferative glomerulonephritis，rectify dyslipidosis，raise plasma-albumin，decrease the protein expression of TNF-α and IL-6 in glomerulus.

Glomerulonephritis;Aged rats;Tripterygium glycosides;Inflammatory factor

R392.9 R364.7

A

1000-484X(2014)05-0627-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.012

劉 姍(1979年-)，女，主治醫(yī)師，主要從事腎小球腎炎的診治方面研究，E-mail:huanghuaying_es@163.com。

·生物治療·