青少年暴力行為與多巴胺β羥化酶基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)分析

鄒志禮，蒙華慶△，胡 華▲，周 波，馬中銳，張洪銀

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心理衛(wèi)生中心 400016；2.四川省人民醫(yī)院心身醫(yī)學(xué)中心,成都 610072)

近年來，青少年暴力攻擊行為已成為世界性的公共衛(wèi)生問題，它不僅影響青少年本身的學(xué)習(xí)和社會(huì)功能，而且還影響家庭及社會(huì)的和諧穩(wěn)定。引起學(xué)者們對(duì)此的廣泛關(guān)注，目前，對(duì)其進(jìn)行了多方面的研究。在遺傳的研究中涉及到一系列的基因多態(tài)性，如：5-HT受體、5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體(5-HTT)、多巴胺受體、兒茶酚胺氧化甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)、單胺氧化酶A(MOMA)等相關(guān)基因[1-6]，但結(jié)果卻不盡相同。多巴胺β羥化酶(dopamine-β-hydroxylase，DβH)是DA合成去甲腎上腺素的限速酶，其活性對(duì)兒茶酚胺的代謝產(chǎn)生重要的影響。先前學(xué)者發(fā)現(xiàn)DβH基因5′側(cè)翼區(qū)的-1021C→T多態(tài)性與血漿中的DβH活性相關(guān)[7]。同時(shí)有學(xué)者報(bào)道有行為問題的兒童血清中DβH水平較對(duì)照組低[8]。由此可以推測(cè)DβH基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)的差異可能與暴力行為的易感性有關(guān)。因此，本研究選取DβH基因與青少年暴力行為進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據(jù)官方記錄將新入的男性青少年服教人員分為暴力罪犯和非暴力罪犯。再根據(jù)修訂版外顯攻擊行為量表[9](MOAS)篩查，將MOAS加權(quán)分大于或等于4分，體力攻擊大于或等于1分定為有暴力行為，MOAS加權(quán)分小于4分，體力攻擊為0分定為無暴力行為。入組標(biāo)準(zhǔn)：所有受試者均為男性，漢族，年齡16～18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)DSM-IV排除青少年期抑郁癥、精神分裂癥等、家屬中有精神疾病史、嚴(yán)重軀體疾病及腦外傷、物質(zhì)或藥物依賴史。(1)暴力組：官方記錄為暴力型違法亂紀(jì)的青少年，共107例，MOAS加權(quán)分大于或等于4分，且體力攻擊大于或等于1分，年齡(16.5±0.6)歲。(2)非暴力組：官方記錄為非暴力型違法亂紀(jì)的青少年，共107例，

表1 3組DβH基因rs1611115多態(tài)性基因型和等位基因頻率的比較[n(%)]

表2 3組DβH基因rs739398多態(tài)性基因型和等位基因頻率的比較[n(%)]

MOAS加權(quán)分小于4分，且體力攻擊為0分，年齡(16.6±0.6)歲。(3)對(duì)照組：為重慶市渝中區(qū)高級(jí)職業(yè)學(xué)校的學(xué)生，共107例，MOAS加權(quán)分小于4分，且體力攻擊為0分，既往無犯罪記錄，滿足上述入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，年齡(16.5±0.6)歲。3組在年齡上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，本研究通過重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1DNA的提取 所有受試者于清晨采集肘靜脈血3 mL置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，使用美國(guó)Omega生物技術(shù)公司的DNA試劑盒提取DNA。

1.2.2單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型 所有樣本在上海天昊生物公司完成。本研究采用SNaPshot SNP分型技術(shù)對(duì)所有樣本進(jìn)行SNP位點(diǎn)分型。引物通過在線Primer3 軟件設(shè)計(jì)。

1.2.3PCR循環(huán)程序 先95 ℃預(yù)變性2 min，在第一相循環(huán)94 ℃變性20 s，起始退火溫度65 ℃ 40 s，后每增加1個(gè)循環(huán)下降0.5 ℃，72 ℃延伸90 s，共11個(gè)循環(huán)，終退火溫度為59 ℃。第2相循環(huán)94 ℃變性20 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸1.5 min，共24個(gè)循環(huán)，72 ℃總延伸2 min，4 ℃保存。 PCR產(chǎn)物通過HotStarTaq進(jìn)行多重PCR獲得，PCR產(chǎn)物通過蝦堿酶(SAP)和外切酶Ⅰ(EXOⅠ)純化后再使用SNaPshot Multiplex試劑盒進(jìn)行延伸反應(yīng)。

1.2.4延伸循環(huán)程序 先96 ℃預(yù)變性1 min，在第一相循環(huán)96 ℃變性10 s，退火溫度52 ℃ 5 s，60 ℃延伸30 s，共28個(gè)循環(huán)，4 ℃保存。延伸產(chǎn)物用SAP純化后在ABI3130XL上樣。SNP分型、ABI3130XL測(cè)序儀上收集的原始數(shù)據(jù)均采用GeneMapper4.0(美國(guó)Appliedbiosystems公司)來分析。

1.2.5Hardy-Weinberg(H-W)平衡吻合度檢驗(yàn) 為了保證本研究樣本能代表重慶地區(qū)的人群分布，采用χ2檢驗(yàn)分別對(duì)3組DβH基因rs739398和rs1611115多態(tài)性的各基因型分布進(jìn)行了H-W遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1H-W平衡吻合度檢驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果發(fā)現(xiàn)3組中2個(gè)SNP位點(diǎn)的χ2值為0.164～2.439(P均>0.05)，符合H-W平衡法則。

2.23組DβH基因rs1611115基因型及等位基因頻率的比較 χ2檢驗(yàn)顯示3組在rs1611115位點(diǎn)基因型及等位基因頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩兩比較顯示暴力組與非暴力組在基因型及等位基因頻率上差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.931、0.000；P>0.05)；而與對(duì)照組比較，在基因型上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=8.025、10.224；P<0.05)，在等位基因頻率上差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=7.754、7.754；P<0.05)，見表1。

2.33組DβH基因rs739398多態(tài)性的基因型及等位基因頻率的比較 χ2檢驗(yàn)顯示3組在rs739398位點(diǎn)基因型和基因頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩兩比較顯示暴力組與非暴力組在基因型及等位基因頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.353、0.876；P>0.05)；與對(duì)照組比較，在基因型上差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.731、0.541；P均>0.05)；在等位基因頻率上差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.174、0.021；P>0.05)，見表2。

3 討 論

DβH是多巴胺合成去甲腎上腺素的限速酶，對(duì)兒茶酚胺的代謝產(chǎn)生重要的影響。2003年白平等[10]發(fā)現(xiàn)46例暴力型罪犯的血漿去甲腎上腺素水平明顯增高，這些研究表明DβH活性的改變可能與沖動(dòng)和攻擊行為相關(guān)。編碼DβH的基因定位于9q34，長(zhǎng)度接近23 kb，有12個(gè)內(nèi)含子。本研究發(fā)現(xiàn)DβH基因rs1611115多態(tài)性無論是暴力組還是非暴力組青少年的CC基因型均少于對(duì)照組，提示這一多態(tài)性位點(diǎn)與暴力行為無關(guān)，但提示與暴力和非暴力青少年犯罪均有關(guān)。Hess等[11]研究發(fā)現(xiàn)，低活性的DβH-1021TT基因型可能與沖動(dòng)、攻擊行為等相關(guān)的人格特征有關(guān)。DβH對(duì)去甲腎上腺素的合成具有限速作用，這可能使腦內(nèi)多巴胺和去甲腎上腺素的水平發(fā)生改變，從而增加一些異常行為及精神疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。但本研究未發(fā)現(xiàn)暴力組與非暴力組青少年存在差異，對(duì)于青少年罪犯這一特殊群體來說，無論是暴力罪犯還是非暴力罪犯都可能存在著沖動(dòng)、攻擊等個(gè)性特征，既往的研究也證實(shí)了男性青少年罪犯較對(duì)照組具有較高的沖動(dòng)行為[12]。因此，未來可以在普通人群中盡可能將暴力攻擊行為純化做進(jìn)一步研究。

本研究未發(fā)現(xiàn)DβH基因rs739398多態(tài)性與青少年暴力行為存在關(guān)聯(lián)。這可能與DβH-1021C/T或與之連鎖的其他多態(tài)性是影響DβH活性最主要的多態(tài)性有關(guān)[13]。Grigorenko等[14]將179名青少年罪犯分為暴力罪犯和非暴力罪犯組，并選取了COMT、DβH、MAOA 及MAOB基因共12個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)單個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)在組別中存在差異。同時(shí)既往在MAOA、COMT、5-HTT的研究中結(jié)合不同的環(huán)境因素進(jìn)行了分析[15-17]，并發(fā)現(xiàn)環(huán)境因素在其中起著重要的作用，尤其是童年有過受虐經(jīng)歷的成年人，攜帶低活性的MAOA等位基因比攜帶高活性MAOA等位基因者更容易發(fā)生暴力攻擊行為。因此，暴力攻擊行為可能與基因與環(huán)境共同作用有關(guān)，未來需進(jìn)一步聯(lián)合多基因或環(huán)境因素進(jìn)行分析研究。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)青少年暴力和非暴力犯罪都與DβH基因rs1611115多態(tài)性存在關(guān)聯(lián)，未發(fā)現(xiàn)DβH基因rs739398多態(tài)性與青少年暴力行為有關(guān)。未來將盡可能擴(kuò)大樣本量，將暴力行為純化，結(jié)合環(huán)境因素、多基因、多位點(diǎn)進(jìn)行交互分析。

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