桔?？傇碥諏?duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549移植裸鼠瘤生長(zhǎng)和STAT2的影響

易亞喬 ，葛金文 ，伍參榮 ，喻 嶸 ，田雪飛 ，陳 懿 ，鄧璽瑋 ，彭國(guó)璇

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)仲景學(xué)說教研室，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)重點(diǎn)學(xué)科，湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

桔?？傇碥諏?duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549移植裸鼠瘤生長(zhǎng)和STAT2的影響

易亞喬1，葛金文2，伍參榮2，喻 嶸1，田雪飛2，陳 懿2，鄧璽瑋3，彭國(guó)璇3

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)仲景學(xué)說教研室，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)重點(diǎn)學(xué)科，湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的 探討桔?？傇碥阵w內(nèi)抑制人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子2（signal transducer and activatorot transcription2，STAT2）的影響。方法 將荷人A549移植瘤BALB/c裸小鼠隨機(jī)分為模型組、環(huán)磷酰胺組、桔?？傇碥战M 1（5 mg/kg·d）、桔?？傇碥战M2（10 mg/kg·d）、桔?？傇碥战M 3（20 mg/kg·d）、桔?？傇碥战M4（25 mg/kg·d），分別治療觀察30 d，測(cè)量瘤體積與質(zhì)量，并用HE染色觀察各組移植瘤組織的病理形態(tài)結(jié)構(gòu)，用免疫組化法檢測(cè)瘤體細(xì)胞STAT2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 模型組與桔?？傇碥崭鹘M對(duì)人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549移植瘤抑制作用比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；桔梗總皂苷對(duì)移植瘤體積與抑瘤率均顯示出較好作用，桔梗總皂苷組4移植瘤的體積明顯小于模型組、桔?？傇碥掌渌鹘M，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；桔?？傇碥崭鹘M移植瘤體積大于環(huán)磷酰胺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；桔?？傇碥崭鹘MSTAT2表達(dá)由強(qiáng)到弱隨濃度的增加而減弱，成劑量依賴關(guān)系，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 桔?？傇碥諏?duì)A549肺移植瘤組織生長(zhǎng)有較好抑制作用，可能通過下調(diào)移植瘤組織STAT2蛋白表達(dá)來抑制瘤組織的生長(zhǎng)。

桔梗總皂苷；人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞；移植瘤；細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子2；裸鼠

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子家族在肺癌方面的研究主要集中在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子 3 （signal transducer and activatorot transcription3，STAT3），而細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子2（signal transducer and activatorot transcription2，STAT2）在肺癌組織中的表達(dá)，至今國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究極少。前期體外研究發(fā)現(xiàn)桔?？傇碥諏?duì)A549肺癌細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用[1]，為進(jìn)一步探討其體內(nèi)作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法檢測(cè)裸小鼠肺移植廇STAT2的表達(dá)，探討STAT2與肺癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系，旨在研究桔梗總皂苷抑制人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549裸小鼠移植瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥有效防治肺癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 BALB/c 6～8周齡裸小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量（20±2）g，雄性，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（湘）2009-2004。

1.1.2 藥物 環(huán)磷酰胺口服片（南通精華制藥有限公司，規(guī)格：50 mg/片，批號(hào)：010052803）；由湖南省中醫(yī)研究院中藥超微中心提供47 g桔?？傇碥辗郏?℃保存，供試驗(yàn)用。實(shí)驗(yàn)時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成1 mg/mL。陽性對(duì)照藥：環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20110921203）。

1.1.3 試劑 STAT2 96T上海研鑫生物科技有限公司購入，美國(guó)GBD產(chǎn)品。

1.1.4 細(xì)胞 人肺腺癌細(xì)胞株A549購于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)細(xì)胞庫。

1.1.5 儀器 酶標(biāo)儀MK3(LABSYS TEMS公司)；HeraeusBB15細(xì)胞培養(yǎng)箱、Thermo702低溫冰箱、Thermo Scientific Holten超凈工作臺(tái) (Thermo Scientific Forma 公司)；顯微鏡 Motic-BA400（Olympus公司，日本）；TGL-20M/TGL-20MC低溫離心機(jī)(長(zhǎng)沙平凡儀器儀表公司)等。

1.2 方法

1.2.1 造模 實(shí)驗(yàn)方法[2]以含有10%新生牛血清RPMI 1640培養(yǎng)基中，37℃ A549肺癌細(xì)胞、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁，長(zhǎng)滿細(xì)胞單層，用0.25%胰酶和 0.02%二胺四乙酸（EDTA）（1∶1）消化傳代。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549肺癌細(xì)胞，常規(guī)胰酶消化、洗滌、計(jì)數(shù)后，以PBS調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/mL，用一次性無菌注射器將A549腫瘤細(xì)胞移植于裸鼠前肢腋下皮下，每只裸鼠注射0.2 mL，常規(guī)飼養(yǎng)、觀測(cè)裸鼠成瘤的時(shí)間、成瘤率。待裸鼠瘤體生長(zhǎng)至直徑約5 mm時(shí)，開始藥物干預(yù)。

1.2.2 分組與給藥 采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型組，環(huán)磷酰胺組（10 mg/kg·d），桔?？傇碥战M 1、2、3、4（依次給予桔?？傇碥?5、10、20、25 mg/kg·d）。每只裸鼠每天經(jīng)口灌胃給藥1次，每次0.4 mL（給藥劑量按成人與大鼠間每公斤體質(zhì)量占體表面積比值算得)；模型組給予相同體積生理鹽水。

1.3 指標(biāo)評(píng)價(jià)

1.3.1 裸鼠移植瘤體積、質(zhì)量測(cè)定 各裸鼠從用藥第 10、15、20、25、30 天分別測(cè)量腫瘤的大小，用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的最長(zhǎng)徑及最寬徑。根據(jù)公式計(jì)算移植瘤體積V(mm3)=(最長(zhǎng)徑×短徑2)/2。

1.3.2 裸鼠移植瘤抑制率計(jì)算 用藥30 d后處死動(dòng)物，稱瘤質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率。 抑瘤率=（1-ET／EC）×100%（EC為對(duì)照組平均瘤質(zhì)量，ET為治療組平均瘤質(zhì)量）。

1.3.3 病理形態(tài)學(xué)觀察 待動(dòng)物處死后，取各組裸鼠移植瘤送病理切片，HE染色觀察病理結(jié)果。

1.3.4 裸鼠移植瘤STAT2蛋白表達(dá)的檢測(cè) 取移植瘤組織標(biāo)本石蠟包埋，切片，將STAT2抗體1∶100稀釋后，用免疫共沉淀試劑盒（Streptavidin-biotin immuno-perxidase complex kit），按照試劑盒操作說明檢測(cè)STAT2，陰性對(duì)照以封閉血清代替STAT2，其他操作步驟相同。蘇木素復(fù)染，光學(xué)顯微鏡下觀察，采用Motic Med 9.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)采集并記錄光密度值（每張切片隨機(jī)采集5個(gè)視野，測(cè)定每個(gè)視野下染色陽性區(qū)的平均光密度和面積），計(jì)算陽性區(qū)積分光密度，取其平均值用陽性區(qū)平均積分光密度值來表示STAT2免疫組化染色陽性的表達(dá)程度，積分光密度值越大，表示STAT2免疫組化染色陽性的表達(dá)程度越高。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 人肺癌A549細(xì)胞移植裸鼠成瘤率

A549細(xì)胞裸鼠移植術(shù)后2～3 d明顯可見質(zhì)軟結(jié)節(jié)，隨后腫瘤不斷增大。平均成瘤時(shí)間為（5±2）d。60只裸鼠全部成瘤，成瘤率為100%。

2.1.1 不同時(shí)間各組裸鼠移植瘤體積的比較 對(duì)人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549移植癌的抑制作用，用藥15 d后，桔?？傇碥崭鹘M與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同劑量的桔梗總皂苷對(duì)A459移植瘤的抑制作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），藥物對(duì)裸鼠移植瘤的抑制作用亦隨劑量的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)。桔梗總皂苷組4裸鼠移植瘤的體積明顯小于模型組，用藥20 d后，與桔?？傇碥?、2、3組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；桔梗總皂苷各組移植瘤體積大于環(huán)磷酰胺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)果見表 1～2。

2.1.2 各組裸鼠移植瘤體質(zhì)量與抑瘤率比較 桔?？傇碥崭鹘M與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同劑量的桔?？傇碥諏?duì)A549移植瘤體質(zhì)量與抑制率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其抑制作用亦隨劑量的增加逐漸增強(qiáng)，結(jié)果分析與上述對(duì)腫瘤體積影響基本一致。見表2。

2.2 桔?？傇碥諏?duì)裸鼠移植瘤組織病理形態(tài)的影響

模型組瘤細(xì)胞體積大且大小不均，呈彌漫性分布，細(xì)胞圓形多角形，排列呈巢狀、團(tuán)塊或條索狀；核漿比例大，胞核深染，核分裂相多見；而環(huán)磷酰胺組、桔?？傇碥崭鹘M瘤細(xì)胞體積較模型組、桔?？傇碥崭鹘M減小，核漿比例明顯縮小，胞核染色較淺，核分裂相顯著減少，環(huán)磷酰胺組瘤體組織病理改善明顯優(yōu)于桔?？傇碥崭鹘M，結(jié)果見圖1。

2.3 桔梗總皂苷對(duì)裸鼠移植瘤STAT2表達(dá)的影響

模型組瘤細(xì)胞STAT2表達(dá)明顯高于環(huán)磷酰胺組、桔?？傇碥崭鹘M，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。環(huán)磷酰胺組STAT2表達(dá)明顯低于桔?？傇碥战M 1、2、3、4，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。 桔?？傇碥崭鹘MSTAT2表達(dá)由強(qiáng)到弱，成劑量依賴關(guān)系。結(jié)果見表3。

表1 不同時(shí)間各組裸鼠移植瘤體積的比較 （，mm3，n=10）

表1 不同時(shí)間各組裸鼠移植瘤體積的比較 （，mm3，n=10）

注：與模型組比較*P＜0.05；與環(huán)磷酰胺組比較△P＜0.05；與桔?？傇碥战M1比較＃P＜0.05；與桔?？傇碥战M2比較◇P＜0.05；與桔梗總皂苷組3比較▲P＜0.05；與桔?？傇碥战M4比較☆P＜0.05。表2同。

組 別模型組環(huán)磷酰胺組桔梗總皂苷組1桔?？傇碥战M2桔梗總皂苷組3桔?？傇碥战M4給藥量 mg/（kg·d）生理鹽水10 5 10 20 25 10 d 83.14±21.25 58.19±20.11*82.14±20.51△82.67±20.21△82.15±19.46△81.28±20.27△15 d 126.20±31.27 46.73±16.14*107.15±26.17*△◇▲☆98.27±30.21*△＃▲☆88.53±20.14*△◇79.72±22.01*△◇▲20 d 260.10±41.00 32.45±13.16*◇132.14±39.03*△◇▲☆101.10±41.00*△?！?8.25±21.03*△◇☆74.14±30.26*△#◇▲25 d 367.11±55.05 20.14±4.16*◇227.11±38.05*△◇▲☆117.11±34.05*△?！?5.11±30.11*△◇☆67.38±28.33*△#◇▲30 d 478.16±50.25 14.32±1.17*◇258.16±40.15*△◇▲☆128.16±32.30*△?！?4.06±26.09*△◇☆58.10±20.30*△#◇▲

表2 各組裸鼠移植瘤給藥30 d后體質(zhì)量和抑瘤率的比較（，n=10）

表2 各組裸鼠移植瘤給藥30 d后體質(zhì)量和抑瘤率的比較（，n=10）

組 別模型組環(huán)磷酰胺組桔?？傇碥战M1桔梗總皂苷組2桔?？傇碥战M3桔?？傇碥战M4給藥量 mg/（kg·d）生理鹽水10 5 10 20 25體質(zhì)量（g）5.01±1.21 1.21±0.32*＃◇▲☆3.68±1.18*△◇▲☆3.06±0.53*△?！?.64±0.51*△＃◇☆2.19±0.49*△?！蟆至雎剩?）0 76.26±2.64*?！?8.02±3.15*△◇▲☆39.21±4.65*△＃▲☆47.25±3.29*△?！蟆?7.42±3.85*△?！蟆?/p>

圖1 各組裸鼠移植瘤形態(tài)病理顯微觀察圖（HE染色×200）

表3 各組裸鼠移植瘤STAT2光密度值測(cè)定結(jié)果比較（，n=10）

表3 各組裸鼠移植瘤STAT2光密度值測(cè)定結(jié)果比較（，n=10）

注：與模型組比較*P＜0.05；與環(huán)磷酰胺組比較△P＜0.05；與桔?？傇碥战M1比較＃P＜0.05；與桔?？傇碥战M2比較◇P＜0.05；與桔?？傇碥战M3比較▲P＜0.05。

組 別模型組環(huán)磷酰胺組桔?？傇碥战M1桔梗總皂苷組2桔?？傇碥战M3桔?？傇碥战M4給藥量 mg/（kg·d）生理鹽水10 5 10 20 25 STAT2（OD）66.78±12.146 6.12±2.32*?！蟆?0.68±10.13*△▲46.25±9.53*△▲30.17±8.59*△?！?0.36±8.49*△?！蟆?/p>

模型組瘤細(xì)胞中STAT2蛋白表達(dá)較多，光鏡可見棕黃色顆粒明顯，呈強(qiáng)陽性表達(dá)；而桔?？傇碥崭鹘M棕黃色顆粒較少，呈弱陽性表達(dá)；環(huán)磷酸酰胺STAT2蛋白幾乎無表達(dá)。因?yàn)镾TAT2蛋白異常激活將導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖和凋亡障礙，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，相比模型組，桔梗總皂苷各組明顯下調(diào)STAT2蛋白的表達(dá)，且不同濃度的桔梗總皂苷對(duì)下調(diào)STAT2蛋白的作用有差異，結(jié)果見圖2。

圖2 各組裸鼠移植瘤腫塊STAT2表達(dá)的光鏡圖（免疫組化染色×400）

3 討論

肺癌為全世界發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一[3]，中醫(yī)藥在內(nèi)的多學(xué)科綜合治療及其機(jī)制研究已成為肺癌防治研究的熱點(diǎn)[4-5]。目前對(duì)于腫瘤發(fā)生機(jī)制的研究主要集中在腫瘤相關(guān)基因的克隆、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路以及細(xì)胞周期調(diào)控三大領(lǐng)域。其中，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵點(diǎn)—信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcription，STATs)成為近年來研究的熱點(diǎn)。研究認(rèn)為：STAT家族是具有高度同源性的轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的信號(hào)向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和凋亡有密切關(guān)系。通過參與對(duì)調(diào)控細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子，蛋白激酶和抗凋亡基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，對(duì)抗細(xì)胞凋亡，參與腫瘤的發(fā)生。STATs主要參與介導(dǎo)細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，調(diào)控靶基因的表達(dá)，進(jìn)而影響著細(xì)胞的增殖、分化、衰老和凋亡，對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有重要作用[6]；STATs異常激活將導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖和凋亡障礙，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[7]；STAT2基因在腫瘤發(fā)展中呈現(xiàn)高表達(dá)[8]，即STAT2蛋白表達(dá)上調(diào)，腫瘤的發(fā)展越明顯。反之，表達(dá)減少，則可說明干預(yù)作用越好。

桔梗具有化痰止咳、排膿消癰的功效，臨床常用于肺系疾?。ㄉ虾粑栏腥?、肺膿腫、肺癌等）的治療[9]，前期通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)桔?？傇碥諏?duì)肺癌細(xì)胞A549的生長(zhǎng)有抑制及誘導(dǎo)凋亡作用。該研究表明桔梗總皂苷對(duì)移植瘤體積與抑瘤率均顯示出較好的抑制作用，桔?？傇碥諏?duì)裸鼠機(jī)體移植瘤的抑制作用及抑瘤率亦隨劑量的增加抑制作用逐漸增強(qiáng)；對(duì)裸鼠移植瘤組織病理形態(tài)學(xué)的改變是瘤細(xì)胞體積較模型組減小，核漿比例明顯縮小，胞核染色較淺，核分裂相顯著減少，環(huán)磷酰胺組瘤體組織病理改善雖明顯優(yōu)于桔?？傇碥崭鹘M，但存在一定的藥物副作用，在抑瘤的同時(shí)會(huì)出現(xiàn)較多的不良反應(yīng)。相對(duì)桔?？傇碥眨瑢?duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著很好的抑制作用，副作用不明顯、桔?？傇碥赵诿庖哒{(diào)節(jié)的特異性免疫應(yīng)答和非特異性免疫應(yīng)答兩方面均有顯著的藥理活性，在這方面明顯優(yōu)于環(huán)磷酰胺[10]。采用免疫組化法觀察移植瘤模型組瘤組織細(xì)胞STAT2蛋白表達(dá)明顯高于環(huán)磷酰胺組、桔?？傇碥崭鹘M，提示STAT2確實(shí)參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展；桔?？傇碥漳芙档鸵浦擦鼋M織STAT2蛋白表達(dá)，同時(shí)也證明桔?？傇碥沼袑?duì)A549肺移植瘤有較好抑制作用，桔梗單味中藥可聯(lián)合其它中藥和中藥提取的有效成分共同且多靶點(diǎn)治療腫瘤（如黃芪、紫杉醇），為臨床腫瘤藥理研究提供進(jìn)一步思路，值得進(jìn)一步探討。

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（本文編輯 徐愛良）

Effects of total platycodins on the growth of transplantation tumor of human lung adenocarcinoma A549 and STAT2 expression in nude mice

YI Yaqiao1,GE Jinwen2,WU Canrong2,YU Rong1,TIAN Xuefei2,CHEN Yi2,DENG Xiwei3,PENG Guoxuan3
(1.Teaching and research office of Zhongjing Theory,Hunan University of CM,Changsha,Hunan 410208,China;2.Key discipline of Integrated Chinese and Western medicine,Hunan University of CM,Changsha,Hunan 410208,China;3.College of Clinical Medicine,Hunan University of CM,Changsha,Hunan 410208,China)

Objective To investigate the inhibition effects of total platycodins on thetransplantation tumor growth of human lung adenocarcinoma cell line A549 and STAT2 expression in nude mice.Methods The BALB/c nude mice bearing human A549 lung cancer were randomly divided into modelgroup,cyclophosphamide group,platycodins group 1(5 mg/kg·d),platycodinsgroup 2(10 mg/kg·d),platycodinsgroup 3(20 mg/kg·d)and platycodins group 4(25 mg/kg·d).They were treated and observed for 30 days,and tumor volume and tumor mass were tested,morphology and the tumor tissues were observed by H-E staining,STAT2 expression was detected by immunohis to chemistry. Results There were significant differences between model group and each total platycodins group in the growth of the transplantation tumor of human lung adenocarcinoma cell line A549 in nude mice(P＜0.05).There were better inhibition effects on transplantation tumor sizes and tumor inhibition rates in all total platycodins groups.The transplantation tumor sizes in platycodins group 4 was significantly lower than those of model group and other platycodins groups(P＜0.05);transplantation tumor sizes in all total platycodins groups were greater than that of cyclophosphamide group(P＜0.05);STAT2 expression in platycodins groups were reduced gradually with the increasing of total platycodins(P＜0.05)and showed concentration-dependent effects.Conclusion Platycodins have good inhibition effects on A549 lung tumor,which maybe related with the down-regulation of STAT2 expression.

Total platycodins;human lung adenocarcinoma A549 cell;transplantation tumor;cell signal transducer and transcription activator 2;nude mice

R285.5；R734.2

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.03.003.007.05

2013－11－22

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30801496）；湖南省科技廳資助項(xiàng)目（2013TT2025）;湖南省教育廳科研基金重點(diǎn)項(xiàng)目（10A089）；湖南省教育廳青年基金資助項(xiàng)目（13B083）。

易亞喬，女，碩士，講師，主要從事腫瘤及心腦血管疾病中西結(jié)合防治研究。