治療自身免疫性疾病多肽藥物的研究進(jìn)展

汪雪峰，董利陽，王 鈞，倪鴻昌，蘇 川

（1.江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院中心實驗室，江蘇 鎮(zhèn)江 212002；2.南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省現(xiàn)代病原生物學(xué)重點(diǎn)實驗室，江蘇南京 210029）

目前的自身免疫病治療藥物大多是通過干擾固有和獲得性免疫反應(yīng)的非特異性免疫抑制劑，具有很強(qiáng)的毒副反應(yīng)［1］。因而，靶向于特定的分子途徑和細(xì)胞，特異地調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，重建機(jī)體的免疫耐受機(jī)制是治療自身免疫病發(fā)展的新趨勢。盡管應(yīng)用特異性抗原誘導(dǎo)免疫耐受治療自身免疫病，可高度選擇性抑制特定抗原的淋巴細(xì)胞克隆，而不影響機(jī)體正常的免疫功能，克服了傳統(tǒng)化學(xué)藥物的毒副反應(yīng)，并在一些疾病的動物模型上獲得了成功。但完整的抗原或蛋白免疫可能交叉連接IgE，從而活化過敏性個體體內(nèi)的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，引發(fā)嚴(yán)重的過敏反應(yīng)；或活化自身免疫病患者體內(nèi)的致病性B、T細(xì)胞，加劇病情惡化［2］。因而，鑒定具有治療作用的表位肽（僅是全長抗原的一個小片段），既能起到免疫治療作用，又可減少不良反應(yīng)，將是一種新的、很有前景的治療策略，成為自身免疫病防治研究的熱點(diǎn)。在多種自身免疫病的動物模型中，多肽免疫顯示出很好的治療效果［3－4］。本文就治療自身免疫病多肽藥物的研究進(jìn)展作一綜述。

1 抑制自身免疫反應(yīng)的候選多肽

1.1 自身抗原、抗體來源多肽 來自于自身抗原的多肽可用于治療自身免疫和炎癥性疾病，并在誘導(dǎo)或自發(fā)的自身免疫病小鼠模型中顯示出較好的治療效果。胰島素B鏈9－23氨基酸的多肽 （B：9－23；SHLVEALYLVCGERG）能保護(hù)非肥胖型糖尿?。╪onobese diabetic，NOD）小鼠避免糖尿病的發(fā)生［5］。NOD小鼠鼻內(nèi)給予B：9－23多肽治療，可明顯減少自發(fā)性胰島素自身抗體的產(chǎn)生，抑制胰島炎癥的發(fā)生，減輕高糖血癥，預(yù)防糖尿病的發(fā)生［6］。來自于人熱休克蛋白60（heatshock protein，Hsp60）437－460氨基酸的多肽P277（也稱作diaPep277），可抑制NOD小鼠胰島素依賴的糖尿病的發(fā)生，減少 IFN-γ的產(chǎn)生［7］。Hsp60的 diaPep277肽在1型糖尿病患者中分別進(jìn)行了隨機(jī)、雙盲的I、II期臨床實驗，結(jié)果表明，diaPep277肽是安全的，且能顯著地預(yù)防成人1型糖尿病患者胰島β細(xì)胞功能的破壞。但與安慰劑組相比，diaPep277肽治療患者的糖基化血紅蛋白水平和每日胰島素的攝取量無顯著性差異。目前正在進(jìn)行更大樣本量的III期臨床實驗［8］。

除了上述的自身抗原來源多肽外，自身抗體重鏈可變區(qū)（heavy chain variable region，VH）的互補(bǔ)決定區(qū) （complementary determining regions，CDRs）來源多肽，在狼瘡小鼠中也顯示出很好的治療效果。如15肽的pCons（FIEWNKLRFRQGLEW），是與多種不同DNA反應(yīng)的自身抗體VH區(qū)共有序列；pCons靜脈注射，可通過上調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 （regulatory T cells，Treg）的數(shù)量誘導(dǎo)耐受，系統(tǒng)性紅斑狼瘡 （systemic lupus erythematosus，SLE）－敏感小鼠口服 100μg pCons肽，可明顯減少蛋白尿和血清抗雙鏈DNA（anti-dsDNA）的抗體水平，延長小鼠存活時間，增加血清中轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor，TGF-β）的水平，結(jié)果表明，口服pCons肽是一種安全、有效的治療SLE傾向小鼠的方法，為人類SLE的治療提供了一種新的治療靶標(biāo)［9］。

1.2 細(xì)胞因子來源多肽 細(xì)胞因子來源多肽可中和炎癥性細(xì)胞因子與其受體的相互作用，抑制自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。Bertin-Maghit等［10］報 道，來 自 于 IL-1β的 多 肽 （YCYISTSQAEHKPVFLGC）免疫小鼠，可保護(hù)小鼠避免膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。來自于IL-2／IL-23 P40亞單位的9肽結(jié)合乙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis B core antigen，HBcAg）組成異聚體，治療大腸炎小鼠，可減少小鼠急、慢性大腸炎的發(fā)生，減輕腸道炎癥，增加小鼠體重［11］。來自于IL-23p19亞單位的多肽與鑰孔血藍(lán)蛋白（keyhole limpet hemocyanin，KLH）結(jié)合，組成異聚體，治療關(guān)節(jié)炎小鼠，可明顯減輕小鼠膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎發(fā)生［12］。細(xì)胞因子來源多肽與KLH結(jié)合物正在進(jìn)行類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE、克羅恩?。–rohn′s disease）及1型糖尿病的臨床實驗［13］。

1．3 T細(xì)胞受體的變異性肽配體（altered peptide ligands，APLs） 一些T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）的變異性肽配體（altered peptide ligands，APLs）可抑制自身免疫反應(yīng)。APLs來自于自身抗原序列，通過氨基酸替代或骨架修飾，改變TCR作用的殘基。APLs結(jié)合于MHC分子和TCR作用后，能特異地拮抗或抑制T細(xì)胞的活化，削弱T細(xì)胞的功能；或改變T細(xì)胞極化信號，改變其Th1／Th2表型和細(xì)胞因子分泌等。APLs已用于治療不同的自身免疫病動物模型。其氨基酸羧基端與氨基端（CO-NH2）反向變異的多肽能拮抗蛋白酶的降解，具有較高的穩(wěn)定性和治療價值，已成功用于實驗性腦脊髓膜炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）、糖尿病和關(guān)節(jié)炎小鼠的治療?？诜履X炎的髓磷脂堿基蛋白（myelin basic protein，MBP）87－99氨基酸的反向變型模擬物多肽，能明顯減輕小鼠自身免疫性腦脊髓炎的癥狀，延遲疾病發(fā)生［14］。MBP 83－99的APL治療多發(fā)性硬化癥 （multiple sclerosis，MS）的II期臨床實驗表明，APL治療可使MBP特異的T細(xì)胞從Th1向Th2方向分化，但低劑量的APL可減輕大腦損傷，高劑量APL加速M(fèi)S進(jìn)展，APL存在安全隱患［15］。免疫調(diào)節(jié)性的十肽菌素RDP58（delmitide acetate），是一種來自于HLA I類分子的十個氨基酸短肽，其CO-NH2的反向序列多肽口服，可有效減輕潰瘍性大腸炎患者的臨床癥狀［16］。而且，RDP58已被成功用于EAE、間質(zhì)性膀胱炎（interstitial cystitis）小鼠的治療，它可以通過干擾pre-MAPK MyD88-IRAK4-TRAF6信號，抑制 TNF-α、IFN-γ、IL-12及IL-2致炎性細(xì)胞因子的合成［17］。迄今為止，大約有400名患者和志愿者接受了RDP58治療，證明RDP58是安全的、且耐受性較好。

格拉默的醋酸鹽（Glatiramer acetate，GA），也稱作Cop-1，一個由谷氨酸（Glu）、賴氨酸（Lys）、酪氨酸（Tyr）和丙氨酸（Ala）組成的隨機(jī)多肽（GLAT），可與MBP交叉反應(yīng)，抑制多種動物模型EAE的發(fā)生。GA可延緩MS患者的疾病進(jìn)程，減少疾病復(fù)發(fā)，而且無免疫抑制性和其它毒性，已在1995年被美國FDA授權(quán)，用于成千上萬MS患者的治療［18］。GA也能預(yù)防移植物抗宿主病（graft-vs-host disease，GVHD）的移植排斥反應(yīng)，能有效預(yù)防實驗葡萄膜視網(wǎng)膜炎和炎癥性腸病等其它自身免疫病的發(fā)生，但GA對NZB／W的狼瘡小鼠無效［19］。

2 多肽藥物抑制自身免疫反應(yīng)的作用機(jī)制

2.1 促進(jìn)活化細(xì)胞的凋亡 據(jù)報道，U1-70K snRNP（U1-70K）蛋白剪接體的131－151氨基酸識別狼瘡患者和狼瘡小鼠CD4＋T細(xì)胞表位。其140位絲氨酸（Ser140）磷酸化的多肽類似物（稱作P140）識別MRL／lpr狼瘡小鼠CD4＋T細(xì)胞的作用更強(qiáng)［20］。P140能同時識別小鼠的MHC分子和人HLA分子，是一種泛宿主表位多肽，靜脈注射后，能明顯延長MRL／lpr小鼠的存活時間，減少小鼠蛋白尿，減輕皮炎、脈管炎癥狀及血清中抗DNA的抗體水平。并且以顆粒酶B及caspase依賴的凋亡方式減少 αβTCR＋／CD3＋／CD4－／CD8－／B220＋雙陰性 T細(xì)胞、活化的 T、B細(xì)胞的數(shù)量［21］。而且，P140結(jié)合于細(xì)胞表面受體，即組成性地表達(dá)伴侶分子HSC70／Hsp73／HSP70－8蛋白。這種伴侶分子高度保守，表達(dá)于多種組織，尤其在MRL／lpr小鼠的免疫細(xì)胞表面表達(dá)豐富。HSC70或作為MHC分子的伴侶分子，或在伴侶分子介導(dǎo)的自噬過程中改變MHC分子提呈的抗原肽至CD4＋T細(xì)胞，導(dǎo)致MRL／lpr小鼠內(nèi)源性的自身抗原提呈過程終止，減少T細(xì)胞的致敏和反應(yīng)，最終影響其自身免疫反應(yīng)過程［22］。

2．2 誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）的產(chǎn)生

具免疫抑制作用的Treg細(xì)胞是形成外周免疫耐受的重要方式，在自身免疫病的致病機(jī)制中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明，多種抑制自身免疫反應(yīng)的多肽，其抑制機(jī)制與誘導(dǎo)Treg細(xì)胞有關(guān)。Sundstedt等［23］報道，MBP氨基端乙?；?肽治療EAE小鼠，可抑制抗原特異性CD4＋T細(xì)胞的增殖反應(yīng)，減少IL-2、IL-4、IFN-γ的產(chǎn)生，增加IL-10的產(chǎn)生，增加的IL-10可誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，介導(dǎo)旁抑制，抑制EAE小鼠的炎癥反應(yīng)。已進(jìn)入1型糖尿?、笃谂R床治療的P277，以及被FDA批準(zhǔn)用于MS治療的GA，均被證明可通過誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，抑制自身免疫病理反應(yīng)［24－25］。來自于自身抗體的pCons多肽，以p38 MAPK依賴的方式誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，抑制抗DNA抗體 （anti-DNA）的產(chǎn)生，促進(jìn)Treg細(xì)胞對效應(yīng)T細(xì)胞的抑制，從而保護(hù) NZB／W狼瘡小鼠避免 SLE的發(fā)生［26］。人抗DNA抗體的互補(bǔ)決定區(qū)hCDR1肽可通過誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，抑制小鼠及SLE患者IFN-α的表達(dá)，減少疾病的活動狀態(tài)［27］。

2．3 誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性的Ⅱ型抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cells，APCs） 多肽治療抑制自身免疫的另一個作用機(jī)制是影響APCs的功能，改變APCs使其成為非致炎作用的II型調(diào)節(jié)性APCs。與未治療的MS患者相比，GA治療的MS患者其樹突狀細(xì)胞 （dendritic cells，DCs）產(chǎn)生更多的IL-10，分泌更少的TNF-α和IL-12；GA抑制單核細(xì)胞的活性，促進(jìn)抗炎的Ⅱ型單核細(xì)胞產(chǎn)生，Ⅱ型單核細(xì)胞增加IL-10、TGF-β的分泌，減少IL-12和TNF-α的產(chǎn)生，過繼轉(zhuǎn)移這種Ⅱ型單核細(xì)胞可保護(hù)小鼠避免 EAE的發(fā)生［28］。血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）處理的小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞 （bonemarrow-derived DC，BMDC）呈耐受表型，低表達(dá)CD40、CD80、CD86及 MHCII分子；與未處理的 DCs相比，VIP處理的DCs產(chǎn)生低水平的TNF-α和IL-12，分泌高水平的IL-10，小鼠靜脈注射VIP處理的DCs后，可抑制膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎及MOG35－55肽誘導(dǎo)的EAE的發(fā)生［29］。

3 結(jié)語

合成多肽可干預(yù)多種自身免疫反應(yīng)越來越受到廣泛關(guān)注，成為自身免疫病治療的潛在藥物候選。多肽氨基酸序列中引入假肽鍵或氨基端羧基端反向修飾等，可增加多肽藥物的穩(wěn)定性，提高其生物活性；多肽治療可避免全長蛋白免疫原性引起的過敏反應(yīng)，安全性較好，在自身免疫及慢性炎癥性疾病中具有廣闊的應(yīng)用前景，但其作用機(jī)制仍未完全闡明。因而，在未來的研究中，需要進(jìn)一步研究其作用機(jī)制及其治療過程中的毒副反應(yīng)，提高自身免疫病多肽類藥物的安全性及其治療效應(yīng)，為自身免疫病抗炎藥物的發(fā)展提供新的作用靶標(biāo)。

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