胃癌患者外周血及癌組織中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Foxp3的表達(dá)意義

盧 芩 俞 婷 張有珍 陳 霞

(東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院消化科，江蘇 南京 210009)

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究證明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)如CD4+CD25+T細(xì)胞在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、各種抗腫瘤治療及預(yù)測(cè)預(yù)后的過程中有十分重要的意義〔1〕。Foxp3與Tregs的發(fā)育、功能維持和表達(dá)存在一定的關(guān)系〔2〕。本研究通過測(cè)定胃癌患者外周血及癌組織中Tregs和Foxp3水平，了解Tregs和Foxp3水平在胃癌中的意義。

1 資料和方法

1.1一般資料 隨機(jī)選取我院2010年4月至2013年8月住院治療的40例經(jīng)胃鏡或手術(shù)病理證實(shí)的胃癌患者，所有患者在入選前均未進(jìn)行相關(guān)的抗腫瘤治療，其中男26例，女14例，年齡31～70〔平均(56.72±1.18)〕歲。參照2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟/美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(UICC/AJCC)分期標(biāo)準(zhǔn)〔3〕進(jìn)行胃癌TNM 分期，Ⅰ+Ⅱ期10例，Ⅲ期23例，Ⅳ期7例；分化程度：低分化18例，中分化10 例，高分化12例；腫瘤部位：賁門及胃底11例，胃體9例，幽門及胃竇20例；腫瘤大?。褐睆?5 cm者15 例，直徑≥5 cm者25 例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例。另選取我院同時(shí)期的23例健康體檢者，其中男14例，女9例，年齡35～72〔平均(60.47±3.09)〕歲。兩組一般資料(年齡、性別等)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。所有研究對(duì)象均對(duì)本研究?jī)?nèi)容知曉，并簽署知情同意書。

1.2檢測(cè)方法 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的表達(dá)水平：入院第二日清晨采集靜脈血液5 ml，根據(jù)文獻(xiàn)〔4〕的方法制備細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞染色，然后用Becton Dikison FACS Calibur 流式細(xì)胞儀測(cè)定淋巴細(xì)胞表面熒光素的熒光強(qiáng)度，在FITC-CD4/PE-CD25參數(shù)圖上計(jì)算CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞占所有CD4+細(xì)胞的比例。采用免疫組化法檢測(cè)胃癌及癌旁組織中Foxp3+T細(xì)胞的表達(dá)水平：術(shù)后留取癌組織，另在距腫瘤邊緣>5 cm處取癌旁組織標(biāo)本，將癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本制成石蠟塊，采用文獻(xiàn)〔5〕的方法進(jìn)行免疫組化染色，染色后置于顯微鏡上觀察，細(xì)胞核呈棕色為陽(yáng)性細(xì)胞，取5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果取平均值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件，采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組外周血中CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的表達(dá)水平比較 胃癌組外周血CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分比為(6.72±1.20)%，顯著高于對(duì)照組(3.52±1.03)%(t=10.712，P=0.000)。

2.2胃癌與癌旁組織中Foxp3+T細(xì)胞的表達(dá)水平比較 胃癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞有(70.82±12.17)個(gè)/mm2，顯著高于癌旁組織(20.47±10.21)個(gè)/mm2(t=20.046，P=0.000)。另外，顯微鏡下可見胃癌組織形態(tài)發(fā)生改變，而癌旁組織腺體結(jié)構(gòu)正常，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少。

2.3胃癌外周血中CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞及癌組織中Foxp3+T細(xì)胞表達(dá)水平的影響因素分析 胃癌TNM分期越高，患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分比和癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞水平越高(P<0.05)；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分比和癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞水平均高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；胃癌分化程度越低，癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞水平越高(P<0.05)。胃癌外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分比與分化程度不同、腫瘤部位和腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05)；癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞水平與腫瘤部位和腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05)。

2.4胃癌外周血CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞和癌組織中Foxp3+T細(xì)胞的關(guān)系 胃癌外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分比和癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞水平呈顯著正相關(guān)(r=0.850，P<0.05)。

3 討 論

胃癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多階段、多因素參與的過程，與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，惡性腫瘤患者往往會(huì)出現(xiàn)機(jī)體免疫功能狀態(tài)低下和紊亂，主要原因?yàn)槊庖吖δ苁д{(diào)，其中患者的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)尤其至關(guān)重要，反之患者的免疫狀態(tài)在一定程度上可預(yù)示著腫瘤的發(fā)展和預(yù)后〔6〕。研究證明：宿主對(duì)機(jī)體內(nèi)發(fā)生的腫瘤組織存在自發(fā)性抵抗，且以細(xì)胞免疫為主。細(xì)胞免疫一般由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，T淋巴細(xì)胞不僅是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，而且在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用〔7〕。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)：Tregs在肺癌、胃腸道腫瘤、卵巢癌等多種腫瘤患者的外周血和腫瘤局部存在著數(shù)量增加現(xiàn)象，其可能的機(jī)制：一方面，Tregs數(shù)量增加可限制免疫反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能受損，抑制腫瘤免疫效應(yīng)，腫瘤細(xì)胞得到保護(hù)而不斷生長(zhǎng)；另一方面，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)過程中可分泌一些免疫抑制因子如腫瘤壞死因子(TGF-β)、白細(xì)胞介素(IL-10)等，作用于機(jī)體從而促進(jìn)Tregs的增殖。因此，Tregs的表達(dá)水平在人類腫瘤的免疫調(diào)節(jié)和治療中的有著重要的意義〔8〕。

CD4+CD25+作為Tregs的一員，具有免疫抑制和免疫無(wú)能兩大特性，不僅能抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)，還能抑制自身免疫性疾病的發(fā)生，可維持機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定性〔9〕。Foxp3為叉頭狀/翅膀狀螺旋回轉(zhuǎn)錄因子，在Tregs細(xì)胞表面特異表達(dá)，對(duì)CD4+CD25+T細(xì)胞的發(fā)育和功能發(fā)揮起著重要作用，可作為CD4+CD25+T細(xì)胞的功能特異性標(biāo)志和特異性鑒定。小鼠實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：將小鼠的Foxp3基因敲除后，其體內(nèi)產(chǎn)生的CD4+CD25+T細(xì)胞不具備調(diào)節(jié)功能，而轉(zhuǎn)染了Foxp3基因的CD4+CD25-細(xì)胞不但可產(chǎn)生CD4+CD25+nTreg，而且在體外可抑制原態(tài)T淋巴細(xì)胞的增殖，減少小鼠自身免疫疾病的發(fā)生性。由此表明，F(xiàn)oxp3是誘導(dǎo)產(chǎn)生Tregs細(xì)胞的一種關(guān)鍵因子，是細(xì)胞發(fā)育的一個(gè)重要開關(guān)〔10，11〕。

本次研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞與腫瘤免疫逃逸有關(guān)，腫瘤產(chǎn)生后，體內(nèi)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞百分比將會(huì)升高，細(xì)胞發(fā)生癌變可導(dǎo)致組織Foxp3+T細(xì)胞水平升高；另外，外周血CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的表達(dá)與胃癌分期、是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，分期越高、表達(dá)量越高、轉(zhuǎn)移的可能性大；癌組織中的Foxp3+T細(xì)胞水平與胃癌TNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度有關(guān)，分期越高、分化程度越低、表達(dá)量越高、轉(zhuǎn)移的可能性大。進(jìn)一步驗(yàn)證了胃癌組織的Foxp3+T細(xì)胞水平越高，外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞表達(dá)越高。

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