銀黃制劑中主要成分定量控制方法的研究進(jìn)展

徐 玫， 張忠泉， 王璟奕， 王藝偉， 趙苗苗

（1.河南大學(xué)藥學(xué)院， 河南 開封 475004； 2.河南大學(xué)教育科學(xué)學(xué)院， 河南 開封 475004）

銀黃制劑中主要成分定量控制方法的研究進(jìn)展

徐 玫1， 張忠泉1， 王璟奕2， 王藝偉1， 趙苗苗1

（1.河南大學(xué)藥學(xué)院， 河南 開封 475004； 2.河南大學(xué)教育科學(xué)學(xué)院， 河南 開封 475004）

目的 銀黃制劑是由金銀花、黃芩提取物加工而成的一種中藥制劑，具有清熱解毒消炎的功效。各類銀黃制劑中的主藥成分金銀花提取物 （以綠原酸計(jì)）、 黃芩提取物 （以黃芩苷計(jì)） 的量不同， 其體內(nèi)作用效果也不同［1］。 現(xiàn)市面上銷售的銀黃制劑有十余種，不同制劑類型的分析方法不盡相同，本文通過大量文獻(xiàn)的查閱，對(duì)各種劑型的定量控制方法進(jìn)行歸納，同時(shí)從技術(shù)改進(jìn)及新方法、新技術(shù)兩方面進(jìn)行了總結(jié)，為今后各種劑型成分定量控制方法的發(fā)展提供了參考。

銀黃制劑；黃芩苷；綠原酸

1 藥典收載的銀黃制劑的成分定量控制方法

《中國藥典》 2010 年版［2］只收載銀黃口服液、 銀黃顆粒沖劑兩種劑型， 均采用 HPLC法對(duì)其中綠原酸及黃芩苷的量分別進(jìn)行測(cè)定。

金銀花提取物：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4%磷酸溶液 （10 ∶90） 為流動(dòng)相； 檢測(cè)波長為327 nm； 理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不少于 2 000。

黃芩提取物：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸 （50 ∶50 ∶0.2 ） 為 流 動(dòng) 相； 檢 測(cè) 波 長 為274 nm； 理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不少于 2 500。

2 藥典未收載的銀黃制劑的成分定量控制方法

2.1 分別測(cè)定

2.1.1 分別測(cè)定單組分 陳靜等［3］利用 HPLC法測(cè)定銀黃含化片中黃芩苷的量； 劉艷等［4］建立 HPLC法測(cè)定銀黃滴丸中黃芩苷的量； 黃家衛(wèi)等［5］建立 HPLC測(cè)定銀黃噴霧劑中黃芩苷含有量的方法； 金錄勝等［6］采用 RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方銀黃灌注液中黃芩苷的量，以控制該制劑的質(zhì)量。李廣勝等［7］采用 HPLC法測(cè)定銀黃膠囊中綠原酸的量； 盧鵬偉等［8］利用 HPLC法測(cè)定銀黃含化片中綠原酸的量； 稅丕先等［9］采用 HPLC法測(cè)定銀黃注射液中綠原酸的量； 高詠莉［10］建立 HPLC測(cè)定銀黃片中綠原酸含有量的方法； 畢宏巖［11］采用 HPLC法測(cè)定銀黃滴丸中綠原酸的量； 劉衛(wèi)東［12］采用 HPLC法測(cè)定銀黃口崩片中綠原酸的量， 并對(duì)方法學(xué)進(jìn)行了考察。 丁芳林等［13］建立高效液相色譜 -電噴霧質(zhì)譜（HPLC/ESI/MS） 聯(lián)用測(cè)定銀黃顆粒中綠原酸的量， 該法具有靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)、定性定量準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

2.1.2 分別測(cè)定兩組分 趙秀香等［14］則采用 HPLC法分別測(cè)定銀黃注射液中綠原酸與黃芩苷的量。綜合單組分的測(cè)定，對(duì)銀黃制劑中兩種有效成分，分別進(jìn)行測(cè)定。但操作仍較繁瑣，很多研究者建立了同時(shí)測(cè)定黃芩苷、綠原酸的量的方法。

2.2 同時(shí)測(cè)定 郭新社等［15］建立了同時(shí)測(cè)定銀黃口服液中黃芩苷和綠原酸的 HPLC法； 譚生建等［16］也建立 HPLC法同時(shí)測(cè)定銀黃口服液中綠原酸和黃芩苷的方法，簡化了操作步驟。 陳雄泉等［17］采用 HPLC梯度洗脫單波長檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定銀黃顆粒、銀黃含化片、銀黃片中綠原酸和黃芩苷。 李堅(jiān)等［18］采用 RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定銀黃含化片中的黃芩苷和綠原酸； 宋粉云等［19］用毛細(xì)管電泳法同時(shí)測(cè)定銀黃膠囊及銀黃顆粒中黃芩苷和綠原酸。 翟淑平等［20］采用HPLC梯度洗脫單波長檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定銀黃膠囊及銀黃顆粒中的綠原酸和黃芩苷； 謝東等［21］采用 HPLC法， 以梯度洗脫同時(shí)測(cè)定銀黃軟膠囊中綠原酸和黃芩苷； 呂凌等［22］采用 RP-HPLC梯度洗脫同時(shí)測(cè)定銀黃咀嚼片中綠原酸和黃芩苷。

同時(shí)測(cè)定兩種有效成分的量，一定程度上節(jié)省了時(shí)間及資源；相比以測(cè)定其中一種成分的量評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量，同時(shí)測(cè)定兩種主要成分含有量的標(biāo)準(zhǔn)就顯得更加全面、科學(xué)。

3 分析方法改進(jìn)

測(cè)定銀黃制劑中黃芩苷的色譜條件多為 ODS柱、 甲醇-水-磷酸 （冰醋酸） 為流動(dòng)相［3］， 但黃芩苷色譜峰參數(shù)不夠理想。 劉艷等［23］為控制銀黃滴丸的質(zhì)量， 采用 HPLC法測(cè)定黃芩苷的量， 參考文獻(xiàn) ［24］ 改進(jìn)了技術(shù)； 選擇［Kromasil ODS-AP（200 mm×4.6 mm， 5 μm）］ 色譜 柱、乙腈-水-四氫呋喃-磷酸 （22 ∶76 ∶2 ∶0.1） 為流動(dòng)相， 檢測(cè)波長 274 nm； 很好地實(shí)現(xiàn)了黃芩苷與其他黃酮類物質(zhì)的分離，使測(cè)定結(jié)果更接近于真實(shí)值，提高了定量測(cè)定的準(zhǔn)確性。

李堅(jiān)［25］應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助褶合曲線分析法， 采用 UV法同時(shí)測(cè)定綠原酸和黃芩苷的量。 褶合光譜法［26］是一種以Glenn 氏正交函數(shù)法為基礎(chǔ)， 并包容了導(dǎo)數(shù)光譜法的一種新的數(shù)學(xué)變換方法。褶合光譜上的每一個(gè)值，都與一段波長區(qū)間內(nèi)物質(zhì)的吸光特性相對(duì)應(yīng)，同樣具有定性定量的特征；即紫外分光光度法中吸光度與濃度的線性關(guān)系轉(zhuǎn)變成數(shù)學(xué)分量與濃度的線性關(guān)系，利用褶合曲線之間的差異形式來量化，從而為物質(zhì)的定性定量提供了理論基礎(chǔ)。褶合曲線分析法檢測(cè)銀黃含片中綠原酸和黃芩苷的量，簡便、快速，結(jié)果可靠。其優(yōu)點(diǎn)是可以不經(jīng)分離直接測(cè)定混合物中各組分的量，從而避免化學(xué)分離過程中產(chǎn)生的誤差。

銳利等［27］采用多波長數(shù)據(jù)線性回歸法， 對(duì)銀黃注射液中兩種主要成分黃芩苷、綠原酸進(jìn)行測(cè)定。確定了黃芩苷、綠原酸的測(cè)定波長分別是 272、 274、 276、 278、 280、 282 nm。 張婷等［1］采用 HPLC-MS/MS 法同時(shí)測(cè)定銀黃顆粒劑中綠原酸和黃芩苷，方法快速簡便、精密度好、靈敏度高，比單純高效液相的方法更為精準(zhǔn)。 楊克迪等［28］利用 HPLCDAD實(shí)現(xiàn)了同時(shí)測(cè)定銀黃顆粒中綠原酸、 黃芩苷； DAD檢測(cè)器具有程序可變波長功能，該法克服了綠原酸、黃芩苷的相互干擾，結(jié)果更能反映其在制劑中真實(shí)含有量。

白雁等［29］以 HPLC分析值為參照， 采用近紅外漫反射光譜 （NIRS） 技術(shù)采集 100 批銀黃顆粒樣品的 NIRS， 獲得銀黃顆粒樣品的 NIRS 信息， 結(jié)合偏最小二乘法 （PLS） 建立了黃芩苷和綠原酸量的校正模型；實(shí)現(xiàn)了大批量銀黃顆粒樣品的快速分析。

楊菲等［30］建立一測(cè)多評(píng)法測(cè)定銀黃制劑中黃芩黃酮類成分的分析方法。 一測(cè)多評(píng) （QAMS） 中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式是 2005 年 Wang等［31］率先提出的； QAMS 法較可靠， 可作為一個(gè)新的質(zhì)量評(píng)價(jià)模式用于銀黃制劑中黃酮類成分的定量測(cè)定。

4 分析方法進(jìn)展

目前多采用測(cè)定銀黃制劑中黃芩苷、綠原酸兩種成分的量， 達(dá)到定量控制的目的。 陳鋼等［32］的研究中提到由于綠原酸類成分在儲(chǔ)存過程中其異構(gòu)體之間會(huì)相互轉(zhuǎn)換，特別是綠原酸的量會(huì)有所下降，黃芩苷類也會(huì)降解為其苷元黃芩素，說明僅測(cè)定其中黃芩苷和綠原酸兩種成分并不能全面客觀地反映銀黃制劑內(nèi)在的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

馬雙成等［33］用 HPLC法同時(shí)測(cè)定綠原酸類 6 個(gè)成分的量，方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于中藥材中該類成分的測(cè)定。Chen 等［34］用高效液相色譜 -二極管陣列 （ HPLC-DAD） 聯(lián)合質(zhì)譜， 實(shí)現(xiàn)9種生物活性成分 （綠原酸、 咖啡酸、 木犀草苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、木犀草素、漢黃芩素和木蝴蝶素 A） 的同時(shí)測(cè)定。 何兵等［35］建立了同時(shí)測(cè)定銀黃含片中10 個(gè)活性成分 （即銀黃含片中6 種綠原酸類有機(jī)酸和黃芩苷類4種黃酮）的量；采用梯度洗脫、分段變波長測(cè)定， 即采用 DAD檢測(cè)器在 190 ～380 nm范圍內(nèi)分別掃描混合對(duì)照品溶液中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸 B、 異綠原酸 A、 異綠原酸 C、 黃芩苷、 漢黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素色譜峰的紫外吸收，再采用分段變波長檢測(cè)法對(duì)此10種化學(xué)成分進(jìn)行測(cè)定。

劉燕［36］采用氣相色譜法測(cè)定銀黃含片中薄荷腦的量，以評(píng)價(jià)銀黃含片的質(zhì)量；結(jié)果發(fā)現(xiàn)外標(biāo)法測(cè)定薄荷腦方法簡單可行，對(duì)3批不同的樣品所測(cè)得的薄荷惱的量無顯著差異， 方法可靠， 結(jié)果可信。 韋漢燕等［37］建立高效液相色譜測(cè)定銀黃顆粒中另一個(gè)有效成分咖啡酸的方法，為完善銀黃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。 黃家衛(wèi)等［38］選用麝香草酚、香荊芥酚作為指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制， 建立 HPLC法測(cè)定銀黃噴霧劑中麝香草酚及香荊芥酚的量。 韋娟［39］建立銀黃膠囊中木犀草苷的定量測(cè)定方法，以控制銀黃膠囊質(zhì)量。

趙剛等［40］考慮到金銀花和黃芩富含黃酮類和皂苷類等多種化學(xué)成分，僅測(cè)定其中兩種成分不能全面客觀地反映其內(nèi)在的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 建立了銀黃制劑的 HPLC-ELSD指紋圖譜，對(duì)銀黃制劑中有效成分進(jìn)行全面綜合分析，并利用聚類分析和主成分分析法對(duì)圖譜進(jìn)行化學(xué)模式識(shí)別，無需對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行定量。 首次建立銀黃制劑的 HPLC-ELSD指紋圖譜，對(duì)不同廠家和批次銀黃制劑的質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

5 現(xiàn)狀與展望

目前 《中國藥典》 收錄的定量測(cè)定方法測(cè)定的對(duì)象只有黃芩苷、綠原酸，劑型只有銀黃口服液和銀黃顆粒沖劑，所用的方法也只有 《中國藥典》 2010 年版的 HPLC法。

文獻(xiàn)中收載的方法有 HPLC法、 HPLC-MS/MS 法、 毛細(xì)管電泳法、 HPLC-DAD、 HPLC-ELSD指紋圖譜等； 還有與數(shù)學(xué)技術(shù)結(jié)合的綜合測(cè)定分析法，如結(jié)合了計(jì)算機(jī)褶合曲線分析法、 一測(cè)多評(píng)法、 NIRS 結(jié)合 PLS 快速分析法。 同時(shí)對(duì)于銀黃制劑的成分定量控制不止停留在綠原酸和黃芩苷兩種主要成分上，對(duì)其中的多種成分都有涉及，如對(duì)其中的綠原酸類、黃芩苷類，銀黃含片中揮發(fā)成分薄荷腦、銀黃噴霧劑中麝香草酚和香荊芥酚、銀黃顆粒中另一個(gè)有效成分咖啡酸、銀黃膠囊中木犀草苷等。

一測(cè)多評(píng)法作為適宜于中藥特點(diǎn)的多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式和新方法，會(huì)越來越多地應(yīng)用于中藥及中成藥的科研和生產(chǎn)實(shí)際， 成為未來中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的發(fā)展方向。 NIRS 結(jié)合 PLS 快速分析法提供了一個(gè)銀黃制劑的成分定量控制的新方法。未來對(duì)銀黃制劑中多種成分同時(shí)測(cè)定的方法將得到更多研究，對(duì)于銀黃制劑的成分定量控制也將更全面、更科學(xué)。

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R927.1

： A

： 1001-1528（2014）05-1045-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.035

2013-07-15

河南大學(xué) 2010 年度大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目 （2010）

徐 玫 （1963—） ， 女， 碩士生導(dǎo)師， 研究方向： 藥物質(zhì)量控制。 Tel： 13837825996， E-mail： kf-xm@126.com