思茅松化學(xué)成分研究

施貴榮，郭美仙，李冬梅，劉 熙，楊 靜，劉光明

(1.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)院，云南大理 671000;2.大理州食品藥品檢驗(yàn)所，云南大理 671000)

思茅松Pinus kesiya R.松塔為松科Pinaceae松屬Pinus植物的球果，可入藥。經(jīng)體內(nèi)、體外藥理研究表明，松屬植物的松塔提取物有抗腫瘤、抗HIV、抗氧化、抗菌等作用［1-5］。思茅松主產(chǎn)于云南思茅、德宏、臨滄、西雙版納等地，現(xiàn)在已經(jīng)引種栽培至大理、紅河、文山、楚雄、昆明等地區(qū)，資源十分豐富;但對(duì)思茅松的研究利用較少，其松塔常被當(dāng)作燃料燒掉。為了開發(fā)利用這一資源，前期實(shí)驗(yàn)對(duì)思茅松的化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究并進(jìn)行了報(bào)道［6-7］;在前期的基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)對(duì)思茅松松塔化學(xué)成分進(jìn)行研究，從其乙醇提取物中分離得到7個(gè)二萜類化合物。

1 材料與儀器

Bruker AM-400MHz核磁儀 (Nicolet公司)，B686A型中壓液相色譜儀 (瑞士Büchi公司)，柱色譜硅膠 (80～100目，100～200目，200～300目)及薄層色譜硅膠GF254(青島海洋化工廠)，反相RP-18(50 μm)(日本 YMC公司)，Sephadex LH-20(Pharmacia公司)，其他試劑均為分析純。

樣品于2010年8月采自云南省思茅市，原植物由大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院周濃副教授鑒定為思茅松，樣品標(biāo)本保存在大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥學(xué)教研室。

2 提取與分離

思茅松松塔干燥，粉碎，取樣8 kg用95%乙醇在室溫條件下冷浸提取3次，每次48 h;合并3次提取液濃縮回收乙醇，加蒸餾水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑得石油醚組分 (40 g)、乙酸乙酯組分 (130 g)、正丁醇組分 (77 g)。取乙酸乙酯萃取組分100 g溶解于丙酮，用硅膠 (80～100目)拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫 (V/V，20∶1，10∶1，8∶2，7∶3，6∶4，5∶5，0∶10)，得到7個(gè)流份FrA～G。流份FrB(26 g)經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫 (V/V，10∶1，9∶1，8∶2，7∶3，6∶4，5∶5)，得流份FrB1～B6;流份FrB3、FrB4、FrB5、FrB6經(jīng) Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇，1∶1)柱層析，反復(fù)硅膠柱層析 (流動(dòng)相分別為環(huán)己烷-乙酸乙酯、環(huán)己烷-異丙醇、三氯甲烷-丙酮等)得化合物 (1)(5 mg)、(2)(7 mg)、(3)(18 mg)、(4)(15 mg)。流份FrD(15 g)經(jīng)中壓液相色譜 (MPLC)處理，填充材料為反相RP-18，用甲醇-水梯度洗脫 (V/V，3∶7，4∶6，5∶5，6∶4，7∶3，10∶0)，得流份 FrD1～D6;其中FrD2和FrD3經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)柱層析，反復(fù)硅膠柱層析 (流動(dòng)相分別為環(huán)己烷-乙酸乙酯、環(huán)己烷-異丙醇、三氯甲烷-丙酮等)得化合物 (5)(70 mg)、(6)(50 mg)、(7)(14 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:C21H30O3，白色粉末，易溶于三氯甲烷。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:7.21(1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，7.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-12)，7.01(1H，s，H-14)，2.81(2H，m，H-7)，2.36，1.52(2H，m，H-1)，2.14(1H，s，H-19)，1.73(2H，m，H-2)，1.45(3H，s，H-16)，1.45(3H，s，H-17)，1.22(3H，s，H-19)，1.19(3H，s，H-20)，3.05(3H，s，-OCH3)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.7(t，C-1)，18.4(t，C-2)，36.7(t，C-3)，47.4(s，C-4)，44.4(d，C-5)，21.7(t，C-6)，30.2(t，C-7)，134.6(s，C-8)，147.8(s，C-9)，36.8(s，C-10)，124.1(d，C-11)，123.1(d，C-12)，142.5(s，C-13)，126.4(d，C-14)，76.6(s，C-15)，27.9(q，C-16)，27.7(q，C-17)，185.1(s，C-18)，16.2(q，C-19)，25.2(q，C-20)，50.6(q，-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為15-methoxydehydroabietic acid。

化合物2:C19H28O，無(wú)色油狀物，易溶于三氯甲烷。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:7.20(1H，d，J=8.2 Hz，H-11)，7.02(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-12)，6.81(1H，s，H-14)，2.91(2H，m，H-7)，2.81(1H，m，H-15)，2.26(1H，m，H-1a)，2.14(2H，m，H-6)，1.88(1H，m，H-3a)，1.67(2H，m，H-6)，1.61(1H，m，H-5)，1.44(1H，m，H-1b)，1.40(1H，m，H-3b)，1.25(3H，s，H-20)，1.23(3H，d，J=7.0 Hz，H-16)，1.23(3H，d，J=7.0 Hz，H-17)，1.16(3H，s，H-19)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.9(t，C-1)，20.4(t，C-2)，42.5(t，C-3)，72.5(s，C-4)，52.2(d，C-5)，17.9(t，C-6)，30.2(t，C-7)，134.7(s，C-8)，146.2(s，C-9)，38.1(s，C-10)，124.5(d，C-11)，123.8(d，C-12)，145.4(d，C-13)，126.8(d，C-14)，33.4(s，C-15)，23.8(q，C-16)，23.9(q，C-17)，22.8(q，C-19)，24.4(q，C-20).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物 2 為 18-nor-abieta-8，11，13-trien-4-ol。

化合物3:C20H28O3，白色粉末，易溶于三氯甲烷。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:7.29(1H，s，H-14)，7.22(1H，m，H-12)，7.14(1H，m，H-11)，4.83(1H，d，J=3.2 Hz，H-7)，2.89(1H，m，H-15)，2.48(2H，d，J=12.8 Hz，H-5)，2.33(1H，t，J=10.0 Hz，H-1a)，2.25(1H，m，H-6a)，1.85(1H，m，H-3a)，1.83(2H，m，H-2)，1.67～1.79(2H，m，H-3b，6b)，1.54(1H，m，H-1b)，1.28(3H，s，H-20)，1.24(3H，s，H-16)，1.28(3H，s，H-17)，1.18(3H，s，H-19)。13CNMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.7(t，C-1)，18.6(t，C-2)，36.2(t，C-3)，47.0(s，C-4)，39.8(d，C-5)，30.8(t，C-6)，68.3(d，C-7)，135.5(s，C-8)，146.7(s，C-9)，37.4(s，C-10)，124.3(d，C-11)，126.7(d，C-12)，146.6(s，C-13)，128.3(d，C-14)，33.6(d，C-15)，23.9(q，C-16)，24.1(q，C-17)，182.5(s，C-18)，16.3(q，C-19)，24.2(q，C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為7α-hydroxydehydroabietic acid。

化合物4:C20H28O3，白色粉末，易溶于三氯甲烷。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:7.40(1H，s，H-14)，7.18(1H，m，H-12)，7.12(1H，m，H-11)，4.93(1H，dd，J=7.4，9.8 Hz，H-7)，2.90(1H，m，H-15)，2.49(2H，d，J=6.9 Hz，H-5)，2.37(1H，t，J=12 Hz，H-1 a)，2.29(1H，m，H-6a)，1.90(1H，m，H-3a)，1.81(2H，m，H-2)，1.72～1.75(2H，m，H-3b，6b)，1.48(1H，m，H-1b)，1.31(3H，s，H-20)，1.27(3H，s，H-16)，1.27(3H，s，H-17)，1.25(3H，s，H-19)。13CNMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.5(t，C-1)，18.4(t，C-2)，36.2(t，C-3)，47.1(s，C-4)，43.3(d，C-5)，32.8(t，C-6)，70.7(d，C-7)，137.4(s，C-8)，146.6(s，C-9)，37.9(s，C-10)，125.2(d，C-11)，124.2(d，C-12)，146.6(s，C-13)，125.9(d，C-14)，33.7(d，C-15)，23.9(q，C-16)，24.1(q，C-17)，184.0(s，C-18)，16.2(q，C-19)，25.5(q，C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為7β-hydroxy dehydroabietic acid。

化合物5:C20H28O4，白色粉末，易溶于丙酮。1H-NMR(400 MHz，CD3COCD3)δ:7.50(1H，s，H-14)，7.38(1H，dd，J=8.1 Hz，H-12)，7.24(1H，dd，J=8.1 Hz，H-11)，4.74(1H，d，J=4.0 Hz，H-7)，2.56(1H，d，J=12.8 Hz，H-5)，2.38(1H，d，J=12.8 Hz，H-1a)，2.10(1H，m，H-6a)，1.90(1H，m，H-3a)，1.84(2H，m，H-2)，1.65～1.75(2H，m，H-3b，6b)，1.46(1H，m，H-1b)，1.50(3 H，s，H-16)，1.50(3H，s，H-17)，1.27(3H，s，H-19)，1.17(3H，s，H-20)。13C-NMR(100 MHz，CD3COCD3)δ:37.8(t，C-1)，18.6(t，C-2)，36.2(t，C-3)，46.6(s，C-4)，39.7(d，C-5)，31.1(t，C-6)，66.9(d，C-7)，136.6(s，C-8)，147.5(s，C-9)，37.2(s，C-10)，123.2(d，C-11)，124.1(d，C-12)，146.8(s，C-13)，126.4(d，C-14)，70.9(s，C-15)，31.5(q，C-16)，31.5(q，C-17)，178.7(s，C-18)，16.2(q，C-19)，23.7(q，C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為7α，15-dihydroxydehydroabietic acid。

化合物6:C20H28O4，白色粉末，易溶于丙酮。1H-NMR(400 MHz，CD3COCD3)δ:7.50(1H，s，H-14)，7.38(1H，dd，J=1.6，8.1 Hz，H-12)，7.24(1H，dd，J=8.1 Hz，H-11)，4.76(1H，t，J=8.4Hz，H-7)，2.56(1H，d，J=12.8 Hz，H-5)，2.25(1H，d，J=12.8 Hz，H-1a)，2.07(1H，m，H-6a)，1.91(1H，m，H-3a)，1.82～1.87(2H，m，H-2)，1.65～1.73(2H，m，H-3b，6b)，1.46(1H，m，H-1b)，1.49(3H，s，H-16)，1.49(3H，s，H-17)，1.30(3H，s，H-19)，1.28(3H，s，H-20)。13C-NMR(100 MHz，CD3COCD3)δ:38.1(t，C-1)，18.3(t，C-2)，36.4(t，C-3)，46.6(s，C-4)，43.7(d，C-5)，32.5(t，C-6)，70.2(d，C-7)，138.4(s，C-8)，147.5(s，C-9)，37.5(s，C-10)，123.4(d，C-11)，123.5(d，C-12)，146.8(s，C-13)，123.8(d，C-14)，71.0(s，C-15)，31.5(q，C-16)，31.5(q，C-17)，178.7(s，C-18)，16.1(q，C-19)，24.9(q，C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為7β，15-dihydroxydehydroabietic acid。

化合物7:C19H28O3，白色粉末 (甲醇);1HNMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-14)，7.37(1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-12)，7.27(1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，4.82(1H，s，H-7)，2.32(1H，m，H-6a)，2.24(1H，m，H-1a)，1.96(1H，d，J=4.4 Hz，H-5)，1.87(1H，m，H-6b)，1.77(1 H，m，H-3a)，1.61(2H，m，H-2)，1.42(1H，m，H-1b)，1.10(1H，m，H-3b)，1.53(6H，s，H-16，17)，1.22(3H，s，H-19)，1.11(3H，s，H-20)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:37.6(t，C-1)，20.1(t，C-2)，42.0(t，C-3)，71.3(s，C-4)，45.8(d，C-5)，27.2(t，C-6)，67.3(d，C-7)，135.5(s，C-8)，147.1(s，C-9)，38.3(s，C-10)，124.2(d，C-11)，123.9(d，C-12)，146.8(s，C-13)，126.4(d，C-14)，71.4(s，C-15)，30.5(q，C-16)，30.5(q，C-17)，21.4(q，C-19)，22.6(q，C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為18-norabieta-8，11，13-teiene-4α，7α，15-triol。

［1］Sakagami H，Kushida T，Oizumi T，et al.Distribution of lignin-carbohydrate complex in plant kingdom and its functionality as alternative medicine［J］.Pharmacol Ther，2010，128(1):91-105.

［2］Süntar I，Tumen I，Ustün O，et al.Appraisal on the wound healing and anti-inflammatory activities of the essential oils obtained from the cones and needles of Pinus species by in vivo and in vitro experimental models［J］.J Ethnopharmacol，2011，139(2):533-540.

［3］Sakagami H，Hashimoto K，Suzuki F，et al.Molecular requirements of lignin-carbohydrate complexes for expression of unique biological activities［J］.Phytochemistry，2005，66(17):2108-2120.

［4］張 宇，王 莉，傅宇明，等.樟子松松塔抗氧化及抗炎作用研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(6):1549.

［5］劉光明，呂永俊，李好枝，等.云南松松塔中抗HIV活性成分的研究初報(bào)［J］.大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，8(2):69-71.

［6］施貴榮，馬慧敏，鄧應(yīng)飛，等.思茅松不同部位莽草酸含量的HPLC測(cè)定［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志 ，2013，19(10):109-111.

［7］施貴榮，李冬梅，劉 熙，等.思茅松松塔化學(xué)成分的初步研究［J］.大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，12(9):4-6.

［8］Wang B，Ju J，He X F，et al.Three new terpenoids from Pinus yunnanensis［J］.Helv Chim Acta，2010，93(3):490-496.

［9］Lee C K，F(xiàn)ang J M，Cheng Y S.Norditerpenes from Juniperus chinensis［J］.Phytochemistry，1995，39(2):391-394.

［10］Ayer W A，Mingj B S.Acids from blue-stain diseased lodgepole pine［J］.Can J Bot，1988，67:1426-1428.

［11］Priz S，Müllner U，Heilmann J，et al.Oxidation products of abietic acid and its methyl ester［J］.J Nat Prod，2002，65(11):1530-1534.

［12］Ohmoto T，Kanatani K，Yamaguchi K.Constituents of pollen.XIII.constituents of Cedrus deodara Loud［J］.Chem Pharm Bull，1987，35(1):229-234.

［13］Ohtsu H，Tanaka R，In Y，et al.Abietane diterpenoinds from the cones of Larix kaempferi and their inhibitory effect on epstein-barr virus activation［J］.Planta Med，2001，67(1):55-60.