中風中醫(yī)證型動物模型的研究概述*

范金花 胡國恒 樂金海

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007）

中風中醫(yī)證型動物模型的研究概述*

范金花1胡國恒2樂金海1

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007）

中風中醫(yī)證候動物模型綜述

中風具有致殘率高、預(yù)后差、易復發(fā)的特點，在全球已成為第一致殘和第二致死原因的疾?。?-2］，給社會和家庭造成巨大的經(jīng)濟負擔。長期以來中風的西醫(yī)治療措施雖多，但尚缺乏理想的、安全的藥物［3］。隨著現(xiàn)代實驗技術(shù)的應(yīng)用，通過動物實驗來探索中醫(yī)藥的作用機理已成為一個重要方法，亦是熱點。目前，中醫(yī)藥研發(fā)及中醫(yī)基礎(chǔ)研究所用的動物模型仍以疾病動物為主，與中醫(yī)的辨證論治理論不全相符，因此迫切需要具有中醫(yī)特色的病證結(jié)合動物模型出現(xiàn)，研究制備中醫(yī)病證結(jié)合動物模型顯得尤為重要。筆者就中風臨床常見的5種中醫(yī)證型動物模型制備方法闡述如下，以期為中醫(yī)藥辨證治療中風的動物實驗研究提供方法和依據(jù)。

1 中醫(yī)分型模型制作法

1.1氣虛血瘀證趙輝等提出的多因素復合制作氣虛血瘀證腦缺血模型制作方法，采用月齡（18±3）個月的大鼠分別予以饑餓、疲勞、寒濕、驚慌憂恐、高脂飲食處理，連續(xù)刺激10 d，第11日采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈制成大鼠腦缺血模型。造模后大鼠出現(xiàn)氣虛癥狀、血瘀癥狀［4］。張允嶺等參照趙輝等提出的多因素復合制作氣虛血瘀證腦缺血模型制作方法，并根據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗”的理論，以勞為主，采用大鼠負重后分批放入圓形游泳池，水溫控制在（20±1）℃，強迫其不停游泳直至力竭后撈出，每天力竭性游泳1次，持續(xù)21 d。然后采用改良Z-longa線栓法建立MCAO局灶性腦缺血再灌注模型。模型動物表現(xiàn)出少動或不動，無力抵抗，偏癱，舌色紫黯、舌下絡(luò)脈青紫粗長等腦缺血氣虛血瘀證的表征，血液流變學檢測提示模型大鼠血液黏度增高、血小板聚集性增高，腦組織形態(tài)學符合腦缺血改變特征［4-6］。徐亞林等［7］采用每只大鼠每天喂食高膽固醇飼料同時按給予強地松口服，按此方法喂養(yǎng)4周，第3周時大鼠出現(xiàn)精神委頓，背毛枯槁、豎立、脫落，尾巴遠端

及四肢發(fā)涼、蜷縮，活動減少，耐疲勞時間減少，攻擊性及對抗性減弱，舌體胖大等氣虛癥狀。同時出現(xiàn)舌質(zhì)暗紅、四肢爪甲青紫、皮膚出現(xiàn)絲狀紅縷等血瘀癥狀，然后采用線栓法制造局灶性腦缺血氣虛血瘀證動物模型，模型動物通過對神經(jīng)功能缺損征的判斷及對大鼠腦經(jīng)TTC染色，出現(xiàn)邊界清楚、范圍較恒定的蒼白色梗死灶，示造模成功［7］。多數(shù)文獻都是利用激素具有刺激骨髓造血的功能，使紅細胞和血紅蛋白含量增加，大劑量也可使血小板增多，提高纖維蛋白原濃度，縮短凝血時間等作用制造動物血瘀模型，如苗明三等采用注射地塞米松的方法制造大鼠血瘀模型，每日于大鼠后腿內(nèi)側(cè)肌注地塞米松溶液，連續(xù)注射10 d。實驗表明全血黏度值顯著增高，血液凝聚時間明顯縮短提示大鼠血瘀模型復制成功，然后麻醉動物分離兩側(cè)頸總動脈作結(jié)扎術(shù)，造腦缺血血瘀模型［8］。氣虛血瘀證是臨床諸多疾病的常見證型，在缺血性中風中表現(xiàn)尤為突出，此類模型在制作缺血性中風模型運用最多，研究亦是最多，被認為是經(jīng)典的中風模型，趙輝的多因素復合制作氣虛血瘀證腦缺血模型制作方法應(yīng)用最多。如徐丹等參照趙輝多因素復合制作此證型的中風模型探討復元膠囊對氣虛血瘀證大鼠血栓前狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用［9］。根據(jù)中醫(yī)病因病機來造模，人工模擬了可致氣虛血瘀的因素，如“人過四十，陰氣自半”，大鼠月齡為18個月相當于人類45～60歲，故使用此月齡的大鼠，符合中醫(yī)的辨證思維及臨床實際情況，但其優(yōu)劣沒有設(shè)置對比實驗來評價。

1.2 肝陽化風證謝映等采用灌附子湯4周，然后采用（1）線栓法造成大腦中動脈阻塞，復制缺血性肝陽化風模型；（2）RoSenberg方法誘導腦出血復制成腦出血肝陽化風模型［10］。但此法沒有宏觀觀察肝陽化風的表現(xiàn)，亦沒有行微觀指標的觀察，模型的成功率、死亡率及重現(xiàn)率亦沒有體現(xiàn)。熊新貴等認為高鹽飲食復制的高血壓動物模型在許多方面與人類高血壓相似，且近

年研究表明附子有明顯的升壓作用，故采取飲用高滲鹽水同時灌服附子湯的方法復制血壓肝陽上亢證模型，從激惹程度的觀察，旋轉(zhuǎn)時間的測定，血壓測定等幾個方面觀察，發(fā)現(xiàn)模型動物出現(xiàn)煩躁易激惹、互相打斗、毛色逐漸失去光澤，甚至部分大鼠雙眼結(jié)膜顏色加深變紅，消瘦、口渴、飲水量明顯增多（提示口渴），大便干結(jié)，旋轉(zhuǎn)時間明顯縮短（提示頭暈），血壓增高，肝陽上亢證造模完成的第7周用Ⅶ型膠原酶誘導腦出血，其具體操作方法參照Rosenberg方法制成肝陽化風型出血性中風模型。模型動物具有與人類肝陽上亢證相似的某些臨床特征，腦內(nèi)注入膠原酶后，出現(xiàn)偏癱等神經(jīng)缺損癥狀，在光鏡和電鏡檢查下，顯示腦組織呈出血性損傷改變，與臨床上高血壓腦出血患者病理改變和神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)都非常類似［11］。中風肝陽化風證型在臨床上出現(xiàn)較多，一般患者素體肝旺，或是情志不遂，肝郁化火，或是嗜食辛辣刺激之品，而致肝陽上亢，陽亢化風則可見半身不遂，言語不利，口舌歪斜，易怒，便結(jié)尿黃等癥狀，據(jù)筆者查閱文獻情況來看肝陽化風中風動物模型研究不多。

1.3 痰瘀互結(jié)型李衛(wèi)民等根據(jù)缺血性中風的病因，此病的發(fā)病與年齡、高脂飲食有密切關(guān)系，選用中老齡大鼠，采用高脂飲食，具體方法為采用高脂飼料喂養(yǎng)，同時予以脂肪乳劑灌胃1個月，次日結(jié)扎左側(cè)頸總動脈的方法，制作缺血性中風痰瘀互結(jié)證模型［12］。模型動物出現(xiàn)同側(cè)面癱、對側(cè)偏癱、偏身感覺障礙等是模型成功的主要標志，且出現(xiàn)體質(zhì)量明顯增加，活動減少，毛發(fā)失去光澤，反應(yīng)遲鈍，舌有瘀點瘀斑，尾巴呈紫色等為痰瘀的部分證候，與此證候臨床表現(xiàn)基本接近。同時檢測血脂、血液黏度、血漿纖維蛋白原、血沉等指標，發(fā)現(xiàn)其均明顯升高，表明模型大鼠血液流變性下降，痰瘀癥狀客觀存在，且發(fā)現(xiàn)TXB2升高與痰瘀互結(jié)證缺血性中風以TXB2升高為特征認識基本一致。由于現(xiàn)代多數(shù)人過食肥甘厚味，影響脾胃運化，脾失健運，聚濕生痰致使痰濁內(nèi)生，氣機受阻，阻滯脈絡(luò)導致血液運行遲緩，最終痰濁瘀血互結(jié)而發(fā)本病。痰瘀互結(jié)是缺血生中風的主要病機，貫穿本病的全過程［13］，中風病臨床辨證中痰瘀互結(jié)型亦是多見。建立最利于研究的痰瘀互結(jié)模型不可或缺，在研究中應(yīng)用時應(yīng)根據(jù)疾病的特點、不同的情況選用最適合的方法對其進行改進。

1.4 腎虛痰瘀型何華等先參照略作改進的Longa等的線栓法制作腦梗死模型，術(shù)后24 h對模型動物采用貓嚇鼠法及高脂飲食造模，具體方法為：術(shù)后24 h將鼠籠直接置于中間僅僅隔一層鐵絲網(wǎng)的貓籠下，貓有時可觸及到大鼠，同時播放有兇狠貓叫聲的磁帶，每日上、下午各恐嚇2 h，同時術(shù)后24 h喂高脂飼料20g，火腿腸14g，連用25 d，模型動物除了出現(xiàn)對側(cè)前肢內(nèi)收，無力，爬行時向左側(cè)傾斜等偏癱癥狀外，還出現(xiàn)毛發(fā)卷曲黯淡無澤、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、嗜睡、表情驚恐，飲食減少，二便失禁等腎虛痰瘀的證候表現(xiàn)［14］。何華等采用自然衰老大鼠（22月齡）按Tamura的方法稍加改進，行右側(cè)大腦中動脈近端電凝術(shù)，制成缺血性腦缺血模型［15］。且用青齡大鼠做對比，自然衰老大鼠除了出現(xiàn)典型的偏癱癥狀外可見毛稀豎立、黯淡無澤、弓背、懶動、對抗性減弱、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、采食飲水明顯減少、睡眠增多、陰囊皺縮、睪丸回升、舌質(zhì)及尾部皮色暗或紫、眼球暗紅等腎虛痰瘀證候，然而青齡大鼠未見上述腎虛痰瘀證候；表示本造模方法成功。中醫(yī)學認為腎為先天之本，主持人體生長發(fā)育、生殖及調(diào)節(jié)機體代謝，與現(xiàn)代醫(yī)學的神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、生殖等多個系統(tǒng)有密切關(guān)系。臨床上與腎虛相關(guān)的疾病較多，選擇合適的方法制造腎虛模型必然會對相關(guān)疾病的研究提供很大的幫助［16］。隨著人口老齡化程度加速，即自然衰老，臟氣虧損，腎精暗耗，精血虧乏，髓海不足，腦脈虛損，易陰虛生風夾痰瘀阻脈絡(luò)；近年來此型在中風發(fā)病和轉(zhuǎn)歸中的作用，愈來愈受到人們的重視。為深入研究中風后遺癥腎虛痰瘀病機，建立良好穩(wěn)定的腎虛痰瘀病證模型在中醫(yī)藥現(xiàn)代化發(fā)展中非常重要。

1.5 肝腎陰虛證張娟等先采用激怒方法建立中醫(yī)肝腎陰虛模型［17］。具體方法為每日定時將實驗大鼠均雙后肢束縛，固定于蓋網(wǎng)上，每2只一籠，以引起明顯激怒，表現(xiàn)為粗叫、扭打和嘶咬，每日1次，首次維持應(yīng)激20min，以后隔日增加10min，共20 d，對大鼠精神、毛發(fā)、大便、舌質(zhì)、眼球、尾尖等進行評分，評定肝腎陰虛程度，如大鼠出現(xiàn)精神萎靡、閉眼或是瞇眼、低頭、縮頸、弓背、毛發(fā)豎立、身體卷曲、少動、相互靠攏靜臥、反應(yīng)遲鈍、體重明顯減輕，提示中醫(yī)肝腎陰虛模型建立成功，然后采用線栓法［18］制作右側(cè)大腦中動脈阻塞模型，病與證的造模因素有機結(jié)合，體現(xiàn)了中醫(yī)病證結(jié)合的特點?，F(xiàn)代醫(yī)學理論認為肝腎精血之盛衰與神經(jīng)元密切相關(guān)，中醫(yī)范疇的“腦髓”似應(yīng)涵蓋神經(jīng)元、神經(jīng)細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、基質(zhì)細胞、胞外基質(zhì)等腦內(nèi)基本結(jié)構(gòu)和功能單位［19］。中藥“補肝腎益髓”是否能促進神經(jīng)元細胞能量代謝和利用，激活內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子生成增多及促進神經(jīng)干細胞再生，動物實驗研究必不可少，此證型動物模型良好的建立可為肝腎精血之盛衰與神經(jīng)元之間的關(guān)系探討提供重要的平臺。

2 結(jié)語

綜上所述，建立病證結(jié)合動物模型使其不再只使用疾病模型，且需符合具有中醫(yī)特色證型的造模方法。筆者總結(jié)了中風臨床上常見證型的動物模型制備法，發(fā)現(xiàn)目前針對中醫(yī)證型中風模型研究存在幾個方面的問題。第一，造模過程中人為因素占的比例大，且受各種不可避免飼養(yǎng)環(huán)境因素影響及倫理學的制約，不完全符合人類疾病發(fā)展的規(guī)律；第二，近年來病證結(jié)合模型研究少，且中醫(yī)各家分型不統(tǒng)一，給造模帶來不便；第三，大多以主觀檢測指標為主，模型缺乏造模成功的客觀檢測標準，且其優(yōu)劣缺乏對比。劉會賢等總結(jié)出：第一，中醫(yī)要堅持中醫(yī)自己的發(fā)展規(guī)律，病證結(jié)合動物模型有篩選模擬研究的病機特異性指標，建立評價體系，使病證結(jié)合模型有理有據(jù)；第二，利用已制備完善的動物模型進行藥物治療干預(yù)或?qū)χ兴幮滤庍M行評價時，亦可借鑒這些特異性指標［20］。

在中醫(yī)理論指導下，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學技術(shù)，使觀察指標量化及標準化，對證深入研究，逐步完善研究制備中醫(yī)病證結(jié)合動物模型，并嘗試進行其他病證結(jié)合動物模型的研制，滿足基礎(chǔ)醫(yī)學及臨床醫(yī)學研究的需求，為中醫(yī)科研的發(fā)展提供了廣闊的前景，讓中醫(yī)藥更好地為人類服務(wù)。

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R255.2

A

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2013-07-20）

·綜述·