臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制的影響因素和具體措施

（白城市婦幼保健院，吉林 白城 137000）

臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制的影響因素和具體措施

洪雁

（白城市婦幼保健院，吉林 白城 137000）

臨床免疫檢驗(yàn)；質(zhì)量控制；影響因素；具體措施

質(zhì)量控制直接影響免疫檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。免疫學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制與其他臨床檢驗(yàn)一樣，對(duì)于保證各種免疫檢驗(yàn)質(zhì)量，使其具有較高的可重復(fù)性、準(zhǔn)確性以及各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的可比性都有十分重要的意義。在臨床免疫檢驗(yàn)中，影響檢驗(yàn)質(zhì)量的因素較多，找出相關(guān)影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素并采取有針對(duì)性的質(zhì)量控制措施，有利于提高免疫檢驗(yàn)結(jié)果的精確性，對(duì)提高多種疾病的準(zhǔn)確有效診斷具有重要的臨床價(jià)值。為此，筆者分析影響臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量的因素，并提出檢驗(yàn)前、中和后的質(zhì)量控制措施，以保證檢驗(yàn)質(zhì)量。

1 影響素的分析

國(guó)內(nèi)開展的各項(xiàng)免疫學(xué)檢驗(yàn)，均要求使用國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局準(zhǔn)入和批準(zhǔn)的儀器和試劑。這樣做不僅能更加統(tǒng)一、規(guī)范各項(xiàng)檢驗(yàn)，各實(shí)驗(yàn)室之間檢查結(jié)果更具可比性，而且也可避免很多不必要的醫(yī)療糾紛。由此，分析影響臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制的因素主要包括以下幾個(gè)方面。

1.1 檢測(cè)試劑和設(shè)備：在免疫檢測(cè)工作中，選用的試劑是否合理，檢測(cè)儀器和設(shè)備是否得到良好的保養(yǎng)和較高的精確度，均會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果。如在檢測(cè)前，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所用的分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、恒溫箱、濕度計(jì)等精密儀器如果沒(méi)有準(zhǔn)確校正，檢測(cè)結(jié)果會(huì)直接產(chǎn)生偏差；如果沒(méi)有嚴(yán)格把關(guān)檢測(cè)所用試劑的生產(chǎn)廠家，較難保證試劑的性能良好，直接影響檢測(cè)結(jié)果與質(zhì)量。

1.2 標(biāo)本因素：在采集、運(yùn)輸和儲(chǔ)存標(biāo)本的各個(gè)中間環(huán)節(jié)中，均存在影響檢測(cè)質(zhì)量的相關(guān)因素。標(biāo)本采集是最基礎(chǔ)的因素。如在采集血液標(biāo)本時(shí)，采集的姿勢(shì)是否符合要求，采血時(shí)間是否合理等，均會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。標(biāo)本的運(yùn)輸過(guò)程中，一旦出現(xiàn)失誤，會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本效能部分失去，影響檢測(cè)結(jié)果和質(zhì)量。在存儲(chǔ)過(guò)程中，如溫度過(guò)高會(huì)使標(biāo)本失效，難以保證檢測(cè)質(zhì)量。另外，在標(biāo)本檢測(cè)過(guò)程中，如不能恰當(dāng)處理樣本中的干擾因素，導(dǎo)致樣本檢測(cè)過(guò)程中受到過(guò)多干擾因素的影響，將難以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[1]。

1.3 檢驗(yàn)人員因素：免疫檢驗(yàn)質(zhì)量與檢驗(yàn)操作者有著重要的相關(guān)性。檢驗(yàn)人員是否具有較高的基本專業(yè)知識(shí)和技能，是否具備較高的責(zé)任意識(shí)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，操作技術(shù)是否是熟練，是否認(rèn)真綜合性分析檢驗(yàn)結(jié)果，均會(huì)不同程度地影響檢驗(yàn)質(zhì)量。

2 檢驗(yàn)前的質(zhì)量控制

2.1 加強(qiáng)設(shè)備維護(hù)和管理，嚴(yán)格保證試劑質(zhì)量：儀器設(shè)備和試劑均需有國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局進(jìn)口準(zhǔn)入證或生產(chǎn)許可證并在限期內(nèi)使用，試劑應(yīng)按要求的條件進(jìn)行保存。

在免疫檢驗(yàn)中所用的各種設(shè)備和儀器，要注意加強(qiáng)日常的管理和維護(hù)，定期不定期檢查儀器設(shè)備的精密度，給予專業(yè)性保養(yǎng)，保證檢驗(yàn)儀器性能良好，保證檢測(cè)結(jié)果的精確性和可靠性。一旦發(fā)現(xiàn)儀器誤差，應(yīng)及時(shí)予以校正；尤其對(duì)于各種精密儀器，應(yīng)縮短檢測(cè)的時(shí)間間隔，并保證每次檢查嚴(yán)格到位。

目前市場(chǎng)上的試劑種類繁多，質(zhì)量參差不齊，應(yīng)慎重選擇，并鑒定其性能，在合格的情況下方可使用。要嚴(yán)格保證各種檢驗(yàn)試劑質(zhì)量，選購(gòu)時(shí)嚴(yán)格進(jìn)行驗(yàn)收，盡量避免頻繁更換試劑生產(chǎn)廠家，防止對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不利影響[2]。如果實(shí)在需要更換，也必須做比對(duì)試驗(yàn)。要注意試劑的有效期和保存條件[3]。要定期檢查試劑是否在有效期內(nèi)，保證每一批號(hào)試劑在下一次檢查前有效，按照要求進(jìn)行保存，避免因試劑失效對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

2.2 合理選擇試驗(yàn)方法和正常上限值：同一檢測(cè)目的常常有很多免疫學(xué)檢測(cè)方法，但并非都符合要求。一種理想的免疫學(xué)試驗(yàn)方法必須具有較高的敏感性、特異性、符合率、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值，應(yīng)在嚴(yán)格選擇患者和非患者對(duì)照測(cè)定的基礎(chǔ)上，逐一用上述指標(biāo)評(píng)價(jià)每一種試驗(yàn)方法。只有符合要求的方法，才能用于常規(guī)免疫學(xué)檢驗(yàn)。

恰當(dāng)設(shè)置正常上限值，直接關(guān)系到試驗(yàn)的敏感性與特異性。設(shè)置不恰當(dāng)，易產(chǎn)生大量的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。確定正常上限的原則是要兼顧試驗(yàn)的特異性與敏感性，以免誤診和漏診。心通常采用ROC曲線來(lái)確定，即選用曲線敏感性和特異性都處于最優(yōu)水平又搭配最好的臨界（cut-off）值作為正常值上限。

2.3 嚴(yán)格做好標(biāo)本采集至檢驗(yàn)前各環(huán)節(jié)工作：采集標(biāo)本時(shí)，要保持采集姿勢(shì)、時(shí)間等影響因素的準(zhǔn)確性，囑患者認(rèn)真遵守標(biāo)本采集前的基本要求，如抽血一般在空腹12 h后進(jìn)行，采集血液前2周應(yīng)盡量保證規(guī)律性的作息和飲食習(xí)慣等。要合理選擇穩(wěn)定劑和抗凝劑。對(duì)于一些藥物或激素類測(cè)定的血液標(biāo)本，體位變化和采血時(shí)間或影響檢驗(yàn)結(jié)果[4]，在采集時(shí)要特別注意。如果在造成4～46點(diǎn)之間采集血液標(biāo)本，檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一個(gè)峰值，促卵泡激素、生長(zhǎng)激素和粗黃體激素會(huì)以陣發(fā)性的方式釋放出來(lái)[5]。對(duì)于此類標(biāo)本，應(yīng)連續(xù)采集數(shù)份標(biāo)本，以其中間值作為測(cè)定值。

在標(biāo)本運(yùn)輸過(guò)程中，盡量減少外界因素干擾，對(duì)于因特定目的需用的尿液、糞便和腦脊液等，應(yīng)防止在處理前標(biāo)本出現(xiàn)變性現(xiàn)象。

對(duì)于需要儲(chǔ)存處理的血液標(biāo)本，一般需要按照要求放置于冰箱中，注意嚴(yán)格掌握保存的適宜溫度；同時(shí)，應(yīng)詳細(xì)標(biāo)注清楚標(biāo)本對(duì)應(yīng)患者的姓名、性別、年齡等基本信息，以防張冠李戴。

在標(biāo)本送檢時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格驗(yàn)收標(biāo)本，避免不合格標(biāo)本進(jìn)入檢驗(yàn)流程[6]。應(yīng)按規(guī)定合理處置樣本中的干擾因素，至標(biāo)本符合檢驗(yàn)要求時(shí)方可進(jìn)行檢驗(yàn)處理，以盡量減少檢驗(yàn)誤差。

2.4 提高檢驗(yàn)人員的綜合素質(zhì)：應(yīng)注意加強(qiáng)包括專業(yè)知識(shí)、專業(yè)技能和職業(yè)素養(yǎng)等檢驗(yàn)人員的培訓(xùn)工作，使之具備熟練的操作技術(shù)和較高的責(zé)任意識(shí)，能在檢驗(yàn)中嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致，認(rèn)真完成每一項(xiàng)檢驗(yàn)的操作細(xì)節(jié)，以保證較高的檢驗(yàn)質(zhì)量。

3 檢驗(yàn)中的質(zhì)量控制

在檢驗(yàn)中，要保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，應(yīng)做到：①保證基質(zhì)和待測(cè)樣本的一致；②準(zhǔn)備進(jìn)行藥物檢測(cè)的濃度要與試驗(yàn)水平一致；③確保沒(méi)有已知的污染危險(xiǎn)性；④檢驗(yàn)過(guò)程要符合說(shuō)明書內(nèi)容，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行[5]。同時(shí)還應(yīng)做到：

3.1 保證儀器設(shè)備和試劑符合要求：檢驗(yàn)中必須保證檢測(cè)儀器設(shè)備處于規(guī)定的工作狀態(tài)，保證所需試劑性能的穩(wěn)定性。對(duì)于配制而成的試劑，要保證成分和性能的合理性和穩(wěn)定性。

3.2 室內(nèi)環(huán)境因素達(dá)標(biāo)：對(duì)樣本進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制檢驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境微小氣候，保證室內(nèi)有較為適宜的溫濕度，嚴(yán)格保證室內(nèi)無(wú)菌化，室內(nèi)的通風(fēng)、照明等均應(yīng)達(dá)到檢驗(yàn)項(xiàng)目所需要的既定要求。

3.3 常用臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制要點(diǎn)[7]：①單向免疫擴(kuò)散、火箭免疫電泳試驗(yàn)（測(cè)定Ig、補(bǔ)體成分、其他蛋白成分）：每塊擴(kuò)散板上均應(yīng)用參考品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。②補(bǔ)體溶血活性（CH50、AP50）測(cè)定：應(yīng)將混合的新鮮豚鼠血清滴定效價(jià)后，小量分裝，-30 ℃保存，每次試驗(yàn)時(shí)用作質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。③細(xì)胞免疫（花環(huán)試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、膜表面免疫球蛋白、T細(xì)胞亞群等）試驗(yàn)：通過(guò)預(yù)試驗(yàn)選擇合格供者，自靜脈取血分離淋巴細(xì)胞，混懸于細(xì)胞冷凍保存液中，小量分裝后放置于液氮中保存，在每批試驗(yàn)中用作質(zhì)量控制。流式細(xì)胞儀測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用配套的的質(zhì)控物。④免疫復(fù)合物測(cè)定：每批試驗(yàn)用熱聚合人IgG進(jìn)行質(zhì)量控制。⑤熒光抗體試驗(yàn)：每批試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陽(yáng)性與陰性對(duì)照，熒光抗體的最適工作濃度應(yīng)經(jīng)常用強(qiáng)陽(yáng)性、陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性對(duì)照血清核定。⑥酶免疫試驗(yàn)：免疫組化法應(yīng)準(zhǔn)確選擇最適檢樣濃度和最適酶標(biāo)抗體濃度，每批試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陽(yáng)性與陰性對(duì)照。ELISA法均應(yīng)用酶聯(lián)檢測(cè)儀測(cè)定吸光度判定結(jié)果。每批試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性與陰性對(duì)照。定量測(cè)定時(shí)每批試驗(yàn)均應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。血清標(biāo)本應(yīng)避免溶血和細(xì)菌污染，以防止過(guò)氧化物酶樣物質(zhì)造成的假陽(yáng)性。標(biāo)本應(yīng)新鮮，4 ℃保存不宜超過(guò)5 d，以免因標(biāo)本中的IgG聚合導(dǎo)致本底加深，影響判斷。⑦放射免疫與發(fā)光免疫試驗(yàn)：每批試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性與陰性對(duì)照，并應(yīng)用參考品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4 檢驗(yàn)后的質(zhì)量控制

檢驗(yàn)工作結(jié)束后，相關(guān)工作人員應(yīng)保證嚴(yán)格進(jìn)行信息核對(duì)和記錄等，具體內(nèi)容包括儀器的審核、信息的核對(duì)和錄入以及填寫檢驗(yàn)報(bào)告單等。結(jié)果應(yīng)由2名以上檢驗(yàn)人員進(jìn)行核對(duì)和分析，并聽取臨床醫(yī)師的意見，以便及時(shí)彌補(bǔ)檢驗(yàn)工作中的疏漏，盡量減少和避免對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，以免誤導(dǎo)臨床實(shí)踐。注意將檢驗(yàn)結(jié)果按照要求留存適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，以便需要時(shí)能隨時(shí)查對(duì)。

能否有效控制免疫檢測(cè)質(zhì)量，直接影響能否對(duì)多種疾病進(jìn)行臨床合理診斷，而免疫檢驗(yàn)質(zhì)量受到多種因素的影響，檢驗(yàn)設(shè)備和試劑、標(biāo)本因素和檢驗(yàn)人員等因素，均是影響檢驗(yàn)質(zhì)量的重要因素，應(yīng)在檢驗(yàn)前、中和后的各個(gè)環(huán)節(jié)，加強(qiáng)對(duì)以上因素的嚴(yán)格控制，保證檢驗(yàn)按照既定的要求嚴(yán)格進(jìn)行，并保證各個(gè)檢驗(yàn)細(xì)節(jié)的科學(xué)性和合理性，盡量減少檢驗(yàn)中誤差的產(chǎn)生，提高免疫檢驗(yàn)質(zhì)量。

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