RP-HPLC法測(cè)定氨甲環(huán)酸緩釋片中氨甲環(huán)酸的含量

王瓊，李健和，湯玉蘭，胡焰，邱細(xì)敏

（1.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410012；2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙 410011）

RP-HPLC法測(cè)定氨甲環(huán)酸緩釋片中氨甲環(huán)酸的含量

王瓊1＊，李健和2，湯玉蘭2，胡焰2，邱細(xì)敏1#

（1.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410012；2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部，長(zhǎng)沙 410011）

目的：建立測(cè)定氨甲環(huán)酸緩釋片中氨甲環(huán)酸含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Diamonsil C18，流動(dòng)相為0.23%十二烷基硫酸鈉溶液-甲醇（60∶40，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，流速為0.8ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20μl。結(jié)果：氨甲環(huán)酸檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.5007～4.0056mg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9999）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD≤0.26%；平均回收率為98.84%，RSD＝0.51%（n＝9）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于氨甲環(huán)酸緩釋片中氨甲環(huán)酸的含量測(cè)定。

氨甲環(huán)酸緩釋片；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

氨甲環(huán)酸（Tranexamic acid）為合成的氨基酸類(lèi)抗纖溶藥，能競(jìng)爭(zhēng)性抑制纖維蛋白的賴(lài)氨酸與纖溶酶結(jié)合，從而抑制纖維蛋白凝塊的裂解，產(chǎn)生止血作用，臨床主要用于纖維蛋白溶解亢進(jìn)所致的各種出血[1]。該藥在歐洲和南太平洋地區(qū)用于治療月經(jīng)過(guò)多已有很多年。美國(guó)在2009年批準(zhǔn)氨甲環(huán)酸用于治療月經(jīng)過(guò)多[2-4]，新型口服氨甲環(huán)酸緩釋片（商品名：Lysteda）可減少因口服氨甲環(huán)酸導(dǎo)致的胃腸道不良反應(yīng)而提高患者耐受性，且療效良好[5-6]。在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上[7-10]，本研究采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測(cè)定自制氨甲環(huán)酸緩釋片中氨甲環(huán)酸的含量。

1 材料

1.1 儀器

1200 型HPLC儀，包括二極管陣列檢測(cè)器（DAD）、LC 3D色譜工作站等（美國(guó)Agilent公司）；AE200型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 藥品與試劑

氨甲環(huán)酸原料藥（湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：X1204003M）；氨甲環(huán)酸、氨甲苯酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100174-200402、100921-200701）；氨甲環(huán)酸緩釋片（中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部研制，規(guī)格：650mg/片，批號(hào)：20130312、20130314、20130316）；甲醇（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；其他試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.23%十二烷基硫酸鈉溶液-甲醇（60∶40，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；流速：0.8ml/min；進(jìn)樣量：20μl；柱溫：30℃。取氨甲環(huán)酸和氨甲苯酸，加水溶解并稀釋制成每1ml中含氨甲環(huán)酸0.2mg與氨甲苯酸2μg的溶液，取20μl注入HPLC儀，調(diào)節(jié)流速使氨甲環(huán)酸峰的保留時(shí)間約為13min，氨甲環(huán)酸峰與氨甲苯酸峰的分離度應(yīng)大于5.0。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白輔料溶液 按處方比例制備不含氨甲環(huán)酸的空白輔料樣品，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（按處方量約相當(dāng)于氨甲環(huán)酸0.1g），置于50ml量瓶中，加水適量溶解并稀釋至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用。

2.2.2 供試品溶液 取氨甲環(huán)酸緩釋片20片，研細(xì)，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氨甲環(huán)酸0.1g），置于50ml量瓶中，加水適量溶解并稀釋至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用。

2.2.3 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取氨甲環(huán)酸對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度約為10mg/ml的溶液，備用。

2.3 空白輔料干擾試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下空白輔料溶液、供試品溶液、對(duì)照品溶液各20μl，分別注入HPLC儀，記錄色譜，見(jiàn)圖1。由圖1可知，空白輔料對(duì)氨甲環(huán)酸含量測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖A.空白輔料；B.對(duì)照品；C.供試品Fig1 HPLC chromatogramsA.blank excipients；B.substance control；C.test samples

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度：10.014mg/ml）0.5、1.0、2.0，3.0、4.0ml，分別置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。取上述系列溶液各20μl，依次注入HPLC儀，記錄色譜。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y＝450.61x－1.6107（r＝0.9999）。結(jié)果表明，氨甲環(huán)酸檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.5007～4.0056mg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 檢測(cè)限和定量限

以信噪比（S/N）為3∶1計(jì)算，氨甲環(huán)酸的最低檢測(cè)限為1.024μg；以信噪比（S/N）為10∶1計(jì)算，氨甲環(huán)酸的定量限為3.413μg。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下經(jīng)稀釋的質(zhì)量濃度為2.0028mg/ml的對(duì)照品溶液20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果，氨甲環(huán)酸峰面積的RSD＝0.16%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液（批號(hào)：20130312）適量，分別于放置0、2、4、8、12、24h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果，氨甲環(huán)酸峰面積的RSD＝0.26%，表明供試品溶液在24h內(nèi)質(zhì)量基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20130312）20片，研細(xì)，取細(xì)粉適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，氨甲環(huán)酸的平均含量為98.97%，RSD＝0.12%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

取對(duì)照品適量（40、50、60mg），每種量各3份，按氨甲環(huán)酸緩釋片處方量加入空白輔料，分別置于25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20μl，測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab1 Results of recovery tests（n＝9）

2.10 樣品含量測(cè)定

取樣品20片，研細(xì)，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氨甲環(huán)酸0.1g），置于50ml量瓶中，加水適量，振搖使氨甲環(huán)酸溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20μl注入HPLC儀，測(cè)定峰面積；另取氨甲環(huán)酸對(duì)照品，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含2mg的溶液，同法測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)氨甲環(huán)酸在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在220nm處有較大吸收值，故本研究檢測(cè)波長(zhǎng)選擇220nm。

3.2 溶劑的選擇

氨甲環(huán)酸在水中溶解度很好，故選擇水作為溶劑。

3.3 流動(dòng)相的選擇

選擇不同比例（80∶20、60∶40、50∶50、40∶60）的0.23%十二烷基硫酸鈉溶液（取磷酸二氫鈉18.3g，加水800ml溶解，加三乙胺8.3ml混勻，再加入2.3g十二烷基硫酸鈉，溶解混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5，加水至1000ml，搖勻）-甲醇進(jìn)樣試驗(yàn)，結(jié)果表明，以0.23%十二烷基硫酸鈉溶液-甲醇（60∶40，V/V）作為流動(dòng)相時(shí)，氨甲環(huán)酸保留時(shí)間約為13min，主峰對(duì)稱(chēng)性較好，與雜質(zhì)峰能達(dá)到基線分離。流動(dòng)相中加入三乙胺作為峰形改善劑，可抑制拖尾。用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5時(shí)，主成分的出峰時(shí)間適宜，峰形較好，而且不會(huì)對(duì)色譜柱造成損害，同時(shí)還能夠提高藥物的穩(wěn)定性。

3.4 色譜柱的選擇

分別選用不同廠家的色譜柱：依利特C18（200mm×4.6mm，5μm）、Shim-pack C18（150mm×4.6mm，5μm）、Phenomenex C18（250mm×4.6mm，5μm）、Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，當(dāng)選用Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）時(shí)，氨甲環(huán)酸的峰形對(duì)稱(chēng)性較好，且能與相鄰雜質(zhì)峰完全分離。

綜上所述，本方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于氨甲環(huán)酸緩釋片中氨甲環(huán)酸的含量測(cè)定。根據(jù)本研究所用的測(cè)定方法及測(cè)定結(jié)果，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，并參照《中國(guó)藥典》2010年版（二部）對(duì)片劑的一般規(guī)定要求，擬訂本品含量限度為：含氨甲環(huán)酸（C8H15NO2）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%。

[1] 張象麟.氨甲環(huán)酸[M]//國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心.藥物臨床信息參考.成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2008：828-829.

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Content Determination of Tranexamic Acid in Tranexamic Acid Sustained-release Tablets by RP-HPLC

WANG Qiong1，LI Jian-he2，TANG Yu-lan2，HU Yan2，QIU Xi-min1
（1.Medical College，Hunan Normal University，Changsha 410012，China；2.Dept.of Pharmacy，The Second Xiangya Hospital of Central South University，Changsha 410011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of tranexamic acid in Tranexamic acid sustained-release tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The separation was performed on a Diamonsil C18column with mobile phase consisted of 0.23%sodium laurilsulfate-methanol（60∶40，V/V））at the detection wavelength of 220nm and the flow rate of 0.8mL/min.The column temperature was set at 30℃，and sample size was 20μl.RESULTS：The linear range of tranexamic acid were 0.5007-4.0056mg/ml（r＝0.9999）with an average recovery of 98.84%（RSD＝0.51%，n＝9）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 0.26%.CONCLUSIONS：The method is accurate，simple，specific and reproducible，and can be used for the content determination of tranexamic acid in Tranexamic acid sustained-release tablets.

Tranexamic acid sustained-release tablets；RP-HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2014）16-1522-03

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2014.16.29

＊碩士研究生。研究方向：藥物分析。E-mail：lanling307@sina.com

#通信作者：副教授。研究方向：藥物分析。E-mail：qiuximin123@163.com

2013-06-06

2014-03-09）