膽紅素對(duì)血清肌酐測(cè)定結(jié)果的干擾及原因分析

劉芳龍 劉 偉

（濰坊市市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濰坊 261021）

膽紅素對(duì)血清肌酐測(cè)定結(jié)果的干擾及原因分析

劉芳龍 劉 偉

（濰坊市市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濰坊 261021）

【摘要】目的研究膽紅素對(duì)血清肌酐測(cè)定結(jié)果的干擾及干擾原因的分析。方法從黃疸患者中隨機(jī)收集60份血清標(biāo)本。先分別通過(guò)酶法和堿性苦味酸法測(cè)定血清肌酐水平；再用鐵氰化鉀去除血清膽紅素，采用堿性苦味酸法作2次檢測(cè)。從同期體檢健康成年人隨機(jī)選血清標(biāo)本60份，分別通過(guò)上述3種方法測(cè)定血清肌酐作為正常對(duì)照組。結(jié)果酶法、堿性苦味酸法測(cè)定結(jié)果均偏低，但酶法總體變化不大；血清總膽紅素水平超過(guò)152 μmol/L后，隨著該水平升高，堿性苦味酸法結(jié)果偏低程度明顯高于酶法，t值均≥7.8，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論血清膽紅素水平對(duì)堿性苦味酸法測(cè)定血清肌酐時(shí)具有十分明顯的干擾，但對(duì)酶法測(cè)定血清肌酐無(wú)明顯的影響。

【關(guān)鍵詞】膽紅素；肌酐測(cè)定；干擾；原因分析

血清肌酐（Cr）在臨床檢驗(yàn)工作中常用來(lái)反應(yīng)與衡量患者的腎臟損害、腎小球?yàn)V過(guò)率等腎功能是否正常的一項(xiàng)指標(biāo)[1]。血清肌酐同時(shí)也是一項(xiàng)特異性較高的腎功能指標(biāo)。臨床上近幾年檢測(cè)血清肌酐多通過(guò)使用苦味酸法[2]。這種方法雖然較為簡(jiǎn)便，但是特異性不是很理想。酶法在最近幾年中用來(lái)測(cè)定血清肌酐水平也較普遍。本研究旨在研究膽紅素對(duì)血清肌酐測(cè)定結(jié)果的干擾及干擾原因的分析，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從2012年3月至2013年3月期間收治于我院的臨床黃疸患者中隨機(jī)收集60份血清標(biāo)本。該60例黃疸患者的年齡27～77歲，男性87例，女性79例。這些患者的病種主要集中在以下方面：腎病綜合征、慢性腎小球腎炎、慢性腎功能衰竭以及腎小球?yàn)V過(guò)功能異常等腎臟疾病。對(duì)比分析所有患者的一般臨床資料，P＞0.05，并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，從我院同期體檢的健康成年人中隨機(jī)選取200人的血清標(biāo)本60份，分別通過(guò)3種方法測(cè)定血清肌酐作為正常對(duì)照組。本次所有受試患者與健康成年人均已知情并同意作為研究對(duì)象。

1.2 試劑與儀器

酶法檢測(cè)血清肌酐的試劑采用北京豪邁公司產(chǎn)品。標(biāo)準(zhǔn)液采用奧林巴斯原裝標(biāo)注品。堿性苦味酸法檢測(cè)血清肌酐的試劑采用了R1：硼砂氫氧化鈉0.05 mol/L（0.5%）、R2：2.5 mol/L NaOH由本科自性配置。去除血清蛋紅素的鐵氰化鉀溶液采用了天津化學(xué)試劑一廠的產(chǎn)品，規(guī)格為2 mmol/L。采用了AU400（奧林巴斯）全自動(dòng)生化分析儀，另外還使用了721紫外分光光度計(jì)。

1.3 方法

從2012年3月至2013年3月期間收治于我院的臨床黃疸患者中隨機(jī)選取60份血清標(biāo)本。先直接分別通過(guò)酶法和堿性苦味酸法測(cè)定他們的血清肌酐水平；再用鐵氰化鉀去除血清膽紅素后，再采用堿性苦味酸法作二次檢測(cè)。將前后兩次血清肌酐的測(cè)定結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比對(duì)兩次檢測(cè)結(jié)果間的差異，作探討與分析。

1.3.1 酶法測(cè)定血清肌酐

偶連酶促反應(yīng)的原理：肌酐和H2O在肌酐酶的催化下生成了肌酸和尿素。而生成的肌酸和H2O在肌酸酶的催化下生成了尿素和肌氨酸。而肌氨酸和H2O、O2在肌氨酸氧化酶的催化作用下生成了甘氨酸、甲醛以及H2O2。而生成的H2O2再耦聯(lián)Trinder反應(yīng)。通過(guò)比色法進(jìn)行測(cè)定，設(shè)定主波長(zhǎng)為546 nm，副波長(zhǎng)為700 nm。樣本量為5.9 U/L，R1為150 U/L，R2為100 U/L，終點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3.2 堿性苦味酸法測(cè)定血清肌酐

該方法利用了堿性苦味酸與血清肌酐發(fā)生jaffe反應(yīng)，能夠生成橙黃色的苦味酸肌酐復(fù)合物。通過(guò)分光光度計(jì)在520 nm的波長(zhǎng)下檢測(cè)其吸光度，與血清肌酐的含量呈正比例關(guān)系。其中溫度控制在37 ℃（水?。ㄩL(zhǎng)為520 nm，樣本量為0.4 mL，R1為5.5 mL的硼砂氫氧化鈉溶液，R2為2.5 mol/L，0.15 mL的NaOH溶液。在10 min內(nèi)使用721分光光度計(jì)進(jìn)行比色，使用速率法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3.3 去除膽紅素后堿性苦味酸法測(cè)定血清肌酐

該測(cè)定方法在AU400（奧林巴斯）全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定。溫度控制在37 ℃，波長(zhǎng)為520 nm。通過(guò)使用鐵氰化鉀去除血清膽紅素的影響來(lái)測(cè)定血清肌酐。樣本量為0.4 mL，鐵氰化鉀溶液為2.5 mL，苦味酸試劑R1為5.5 mL，R2為2.5 mol/L的NaOH溶液。反應(yīng)進(jìn)行10 min，通過(guò)721分光光度計(jì)進(jìn)行比色，使用速率法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究所得的所有臨床數(shù)據(jù)采用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。通過(guò)使用t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，對(duì)前后兩次檢測(cè)的血清肌酐測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，觀察前后的差異。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置為0.05，當(dāng)P＜0.05時(shí)，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 200名正常健康成人的血清肌酐測(cè)定結(jié)果

200名正常健康成人的血清肌酐測(cè)定結(jié)果都在正常范圍內(nèi)（7.3± 3.1）μmol/L，酶法肌酐（88±21.3）μmol/L，堿性苦味酸法肌酐（87.5±20.9）μmol/L，肌酐）（89.8±21.1）μmol/L，且3種方法測(cè)定的血清肌酐水平均無(wú)明顯的差異，t=0.013，P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 酶法測(cè)定60份黃疸患者血清標(biāo)本的血清肌酐水平

當(dāng)血清總膽紅素水平在152 μmol/L內(nèi)時(shí)，3種方法的差異并不大，堿性苦味酸法測(cè)定結(jié)果整體均偏低，酶法測(cè)定結(jié)果雖偏低，但總體變化不大。當(dāng)血清總膽紅素水平升高超過(guò)152 μmol/L后，隨著該水平的升高，堿性苦味酸法測(cè)定結(jié)果偏低程度明顯高于酶法。堿性苦味酸法結(jié)果與消除影響后測(cè)定結(jié)果相比，t值均≥7.8，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

血清膽紅素對(duì)臨床測(cè)定肌酐的幾種常用方法均有不同程度的干擾，是目前最常見的干擾因素[3]。如何減少、消除該干擾，成為了廣大同行研究的重點(diǎn)和關(guān)注點(diǎn)。本次研究中，200名正常健康成人的血清肌酐測(cè)定結(jié)果都在正常范圍內(nèi)，且3種方法測(cè)定的血清肌酐水平均無(wú)明顯的差異。但從數(shù)據(jù)來(lái)看，仍可看出血清膽紅素對(duì)測(cè)定結(jié)果存在一定的干擾的，酶法和堿性苦味酸法稍稍偏低于消除了膽紅素干擾后測(cè)定的結(jié)果。但堿性苦味酸法測(cè)定結(jié)果整體均偏低，證實(shí)其檢測(cè)收到了血清膽紅素的干擾。酶法測(cè)定結(jié)果雖偏低，但總體變化不大，提示酶法測(cè)定血清肌酐水平受血清膽紅素的干擾較小。此外，當(dāng)血清總膽紅素水平升高超過(guò)152 μmol/L后，出現(xiàn)了明顯的變化。隨著該水平的升高，堿性苦味酸法測(cè)定結(jié)果偏低程度明顯高于酶法，說(shuō)明在高水平血清膽紅素表達(dá)時(shí)，堿性苦味酸法收到的干擾較酶法測(cè)定血清肌酐水平更多。

由于臨床操作比較復(fù)雜，不利于多樣本的高通量全自動(dòng)分析。但我們又同時(shí)需要保證某些因膽紅素水平較高而對(duì)血清肌酐水平測(cè)定結(jié)果影響較大的情況盡可能地減少，使臨床血清肌酐水平檢測(cè)結(jié)果更加客觀、準(zhǔn)確。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了高膽紅素水平患者檢測(cè)血清肌酐水平需要被重視的事實(shí)。本次研究通過(guò)在預(yù)處理中加入鐵氰化鉀消除血清膽紅素的影響，取得了良好的效果。這種方法相對(duì)簡(jiǎn)單、易行，對(duì)儀器和試劑的要求并不高。大多數(shù)醫(yī)院都可實(shí)現(xiàn)這些操作[4]。但是相對(duì)來(lái)說(shuō)，添加了新的試劑，也可能會(huì)對(duì)結(jié)果造成新的干擾[5]。因此，為了使檢測(cè)結(jié)果相對(duì)更準(zhǔn)確，因結(jié)合實(shí)際情況選擇更合適的方法。

綜上所述，血清膽紅素水平對(duì)堿性苦味酸法測(cè)定血清肌酐時(shí)具有十分明顯的干擾。而血清膽紅素對(duì)酶法測(cè)定血清肌酐歲無(wú)明顯的影響，但血清肌酐的測(cè)定結(jié)果仍偏低。為了使檢測(cè)結(jié)果更客觀，更具有臨床參考價(jià)值，應(yīng)首先除去血清膽紅素的干擾，再進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)也要考慮到其他的影響因素，以得到相對(duì)更準(zhǔn)確的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

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[2] 劉衛(wèi)平,陳敏,胡望平.除蛋白速率法測(cè)定高膽紅素血漿中肌酐[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2008,12(3):132-133.

[3] 王卉妍.膽紅素對(duì)酶法和堿性苦味酸法測(cè)定肌酐的影響[J].醫(yī)療裝備,2009,22(12):39-40.

[4] 陳偉英,毛遠(yuǎn)麗,陳小倩,等.膽紅素氧化酶消除血清肌酐測(cè)定中膽紅素的干擾[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2010,25(2):188-189.

[5] 賴麗英,余慧玲,王黎明.改進(jìn)堿性苦味酸法在血清肌酐測(cè)定中的應(yīng)用[J].吉林醫(yī)學(xué),2010,31(7):936-937.

中圖分類號(hào)：R446.112

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2014）15-0230-02