微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用效果

楊麗

微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用效果

楊麗

目的 探討微柱凝膠法對(duì)新生兒溶血病的檢測(cè)效果。方法 對(duì) 214 例疑似新生兒溶血病患兒采用微柱凝膠法檢測(cè) , 并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 214 例患兒中三項(xiàng)試驗(yàn)均為陽(yáng)性者約占 29.4% ；游離、釋放試驗(yàn)陽(yáng)性 , 直抗試驗(yàn)陰性者約占 50.5% ；直抗、釋放試驗(yàn)陽(yáng)性 , 游離試驗(yàn)陰性者約占 6.1% ；直抗、游離試驗(yàn)陰性 , 釋放試驗(yàn)陽(yáng)性者約占 3.3% ；確診患兒抗體釋放試驗(yàn)均為陽(yáng)性。結(jié)論 微柱凝膠法檢測(cè)新生兒溶血病血清用量少 , 影響因素少 , 靈敏度及特異性良好 , 結(jié)果易保存 , 臨床應(yīng)用效果滿意。

新生兒溶血病 ；微柱凝膠法 ；檢測(cè) ；效果

新生兒溶血病 (hemolytic disease of the newborn, HDN)黃疸可造成患兒大腦不可逆損害 , 生存質(zhì)量降低 , 早期確診對(duì)預(yù)后十分重要 , 微柱凝膠法血清學(xué)檢測(cè)靈敏度高 , 結(jié)果穩(wěn)定 , 2011 年 1 月 ～2013 年 11 月作者對(duì) 214 例新生兒溶血病疑似患兒采用微柱凝膠法檢測(cè) , 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 214例患兒中男 136例 , 女 78例 , 出生日齡 12 h~7 d, 均為 ABO血型系統(tǒng) , 臨床主要表現(xiàn)為黃疸、貧血、高膽紅素血癥、肝脾腫大等 , 排除感染、葡萄糖 -6-磷酸脫氫酶缺乏等可致溶血之疾病 , 初診疑似母嬰血型不合新生兒溶血病。新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn)：①患兒母親血清中有免疫性血型抗體 ；②血清總膽紅素 >229 μmol/L, 有貧血癥狀 ；③患兒血型與母親血型免疫性抗體一致 , 抗體釋放試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性 ；結(jié)合臨床表現(xiàn) , 可確診新生兒溶血病。

1. 2 檢測(cè)方法 微柱凝膠卡、專(zhuān)用孵育箱、專(zhuān)用離心機(jī)、抗人球蛋白檢測(cè)卡等由達(dá)亞美公司提供；ABO血型鑒定及新生兒溶血病三項(xiàng)血清學(xué)檢測(cè)嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［1］。

1. 2. 1 采用新生兒及母親抗凝血做 ABO血型鑒定 , 微柱凝膠卡加患兒 0.8%紅細(xì)胞懸液 50 μl, 離心 5 min后觀察直接抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果 , 紅細(xì)胞聚集在凝膠卡上或中部者為陽(yáng)性 ,紅細(xì)胞沉積凝膠卡底部者為陰性。

1. 2. 2 游離抗體試驗(yàn)及抗體釋放試驗(yàn) 在凝膠卡中分別加入患兒血清或紅細(xì)胞放散液 50 μl, 患兒紅細(xì)胞放散液按文獻(xiàn)制備 , 按標(biāo)記分別加入 0.8%A細(xì)胞、B細(xì)胞、O細(xì)胞懸液各50 μl, 置專(zhuān)用孵育器內(nèi) 37℃孵育 15 min后 , 離心 5 min, 觀察結(jié)果 , 陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)同上。

1. 3 檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)三項(xiàng)試驗(yàn)同時(shí)陽(yáng)性者可確診新生兒溶血?。晃赐瑫r(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性者以抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性為診斷標(biāo)準(zhǔn) ；直接抗人球蛋白試驗(yàn)和 (或 )游離抗體試驗(yàn)陽(yáng)性而抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性者 , 結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合分析。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù) , 計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差 ( x-±s)表示 , 采用 t檢驗(yàn) , 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以 P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 214例患兒中直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性者 81例 (37.9%),抗 體 游 離 試 驗(yàn) 陽(yáng) 性 170例 (79.4%), 抗 體 釋 放 試 驗(yàn) 陽(yáng) 性 193例 (90.2%)；抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性與臨床診斷符合率約 90.2% (193/214)。

2. 2 214例中三項(xiàng)試驗(yàn)均為陽(yáng)性者 63例 , 約占 29.4%；游離、釋放試驗(yàn)陽(yáng)性 , 直抗試驗(yàn)陰性者 108例 , 約占 50.5%；直抗、釋放試驗(yàn)陽(yáng)性 , 游離試驗(yàn)陰性者 13例 , 約占 6.1%；直抗、游離試驗(yàn)陰性 , 釋放試驗(yàn)陽(yáng)性者 7例 , 約占 3.3%；三項(xiàng)試驗(yàn)均為陰性者 9.8%。

2. 3 214例中確診新生兒溶血病 193例 , 確診患兒抗體釋放試驗(yàn)均為陽(yáng)性 , 其中母、嬰血型 O-A者 92例 (47.7%), 母、嬰血型 O-B者 101例 (52.3%), 兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

新生兒溶血病為患兒母體內(nèi)存在與胎兒紅細(xì)胞不相匹配的 IgG 血型抗體 , 引起同種被動(dòng)免疫性疾病。母嬰血型不合致母體內(nèi)免疫系統(tǒng)被動(dòng)激活 , 產(chǎn)生對(duì)應(yīng)胎兒紅細(xì)胞抗原的特異性同種免疫抗體 IgG, 經(jīng)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)與其紅細(xì)胞結(jié)合 , 引發(fā)同種免疫性溶血反應(yīng) , 為新生兒溶血病的主要原因 ,臨床以 ABO 血型系統(tǒng)所致同種免疫性溶血病最常見(jiàn) , 其次為 Rh 血型系統(tǒng) , 多發(fā)于胎兒及新生兒 , 引起患兒高膽紅素血癥、貧血、水腫、肝脾腫大等臨床表現(xiàn) , 重者可致膽紅素腦病 ,有一定的致殘率和病死率［2］。

新生兒溶血病確診依賴(lài)于直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)及抗體釋放試驗(yàn) , 三項(xiàng)試驗(yàn)的臨床意義不同 , 抗體釋放試驗(yàn)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)為新生兒溶血病確診試驗(yàn) , 而游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)患兒血清中血型抗體 , 檢測(cè)結(jié)果有助于患兒預(yù)后評(píng)估 , 三項(xiàng)試驗(yàn)以抗體釋放試驗(yàn)最具診斷價(jià)值 , 直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)陰性者 , 抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性即可診斷新生兒溶血?。?］。

患兒體內(nèi)游離抗體及致敏紅細(xì)胞隨發(fā)病時(shí)間延長(zhǎng)而減少 , 大部分血型抗體以抗原抗體復(fù)合物形式存在 , 失去免疫反應(yīng)性 , 導(dǎo)致檢出陽(yáng)性率降低［4］, 檢測(cè)越早者陽(yáng)性率越高。新生兒溶血癥狀較重者 , 血中抗體滴度較高 , 直接抗人球蛋白試驗(yàn)多為強(qiáng)陽(yáng)性 , 結(jié)合患兒臨床表現(xiàn)等 , 有助于確診新生兒同種免疫性溶血病 , 排除其他原因所致黃疸。

微柱凝膠法檢測(cè)可調(diào)節(jié)凝膠濃度 , 控制凝膠間隙 , 離心后的抗體致敏紅細(xì)胞存留于微柱上段 , 或分布于凝膠中 , 未致敏紅細(xì)胞經(jīng)凝膠間隙至微柱底部 , 形成不同強(qiáng)度凝集反應(yīng) ,離心效果使得凝集、未凝集細(xì)胞分層及陽(yáng)性、陰性區(qū)分較為明顯 , 對(duì) ABO 血型系統(tǒng)新生兒溶血病檢測(cè)靈敏度略高于試管法 , 凝集強(qiáng)度高于試管法 , 對(duì) ABO 血型系統(tǒng)、Rh 血型系統(tǒng)新生兒溶血病患兒 IgG 抗體特異性檢測(cè)與試管法檢測(cè)結(jié)果一致［5］。與試管法檢測(cè)比較 , 具有血清用量少 , 檢測(cè)結(jié)果影響因素少 , 靈敏度高 , 結(jié)果易保存 , 步驟減少 , 操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。

本研究中三項(xiàng)試驗(yàn)均為陽(yáng)性者約占 29.4% ；游離、釋放試驗(yàn)陽(yáng)性 , 直抗試驗(yàn)陰性者約占 50.5%；直抗、釋放試驗(yàn)陽(yáng)性 ,游離試驗(yàn)陰性者約占 6.1% ；直抗、游離試驗(yàn)陰性 , 釋放試驗(yàn)陽(yáng)性者約占 3.3% ；確診患兒抗體釋放試驗(yàn)均為陽(yáng)性 , 靈敏度及特異性良好 , 應(yīng)用效果滿意。

［1］葉應(yīng)嫵 ,王毓三 ,申子瑜 .全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程 .第 3 版 .北京 : 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司 , 2006:267-268 .

［2］劉穎 .新生兒 Rh 血型不合溶血病基囚診斷及治療進(jìn)展 .中華新生兒科雜志 , 2012,27(6):428.

［3］柳美秀 ,陳超 ,華愛(ài)蘭 .新生兒母嬰血型不合溶血病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù) .中國(guó)新生兒雜志 , 2011,26(3):204-205.

［4］吳紅 ,熊莉 ,孫瑜 ,等 . 63 例新生兒溶血病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析 .江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) , 2009,49(1):124-126.

［5］張勇萍 ,安寧 ,李娜 ,等 .微柱凝膠法與試管法檢測(cè)新生兒溶血病免疫性抗體的比較 .臨床血液學(xué)雜志 , 2011,24(12):697-701.

2014-04-16］

464000 信陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科