蒽酮-硫酸法測(cè)定蒙藥蕁麻多糖的含量

蔡 芳 趙 陽(yáng) 董珉翔 白音夫*

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;

2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

蕁麻為被子植物門(mén)蕁麻科(Urticaceae)蕁麻屬(Urtica Linn.)1年生或多年生草本植物。莖高60～200cm，葉對(duì)生，雌雄同株或異株。蒙名哈拉海(意為“有刺”)，是蒙古族習(xí)用的藥食同源植物，味辛、苦、濕、澀，營(yíng)養(yǎng)豐富［1］。莖葉上的蜇毛有毒性(過(guò)敏反應(yīng))，它的毒性使皮膚接觸后立刻引起刺激性皮炎，如瘙癢、嚴(yán)重?zé)齻?、紅腫等?？菟澜?jīng)霜或經(jīng)人工處理后為優(yōu)質(zhì)飼料。其含有黃酮類、有機(jī)酸類、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油、萜類、木脂素、多糖等化學(xué)成分［2］。目前該藥材暫無(wú)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文對(duì)蕁麻有效成分多糖進(jìn)行含量測(cè)定，該法可為蕁麻藥材提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法。

1 試驗(yàn)材料

葡萄糖、蒽酮、硫酸均為AR(市售)。210型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)(日本島津)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制、顯色劑的配制及蒽酮-硫酸法最大吸收波長(zhǎng)的選擇:取葡萄糖約6mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，即為葡萄糖對(duì)照品溶液(60μg·mL-1)。蒽酮溶于硫酸中，配制成0.5%濃度。棕色瓶保存。精密吸取0.6mL對(duì)照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，加入0.5%的蒽酮硫酸溶液4mL，混勻，同法制的陰性溶液，振搖10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷卻30min，同法制得陰性對(duì)照溶液，在可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)200～800nm范圍內(nèi)測(cè)定吸收度，結(jié)果最大吸收波長(zhǎng)λmax=615nm。

2.2 線性化范圍試驗(yàn):精密吸取 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL葡萄糖對(duì)照品溶液，加蒸餾水至 2.0mL，加入 0.5%的蒽酮溶液4mL，混勻，振搖10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷卻30min，在可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)615nm，處測(cè)定吸收度。經(jīng)回歸處理回歸方程如下A=-0.1120+0.0005x ，r=0.999。在 12.0 ～72.0μg·mL-1范圍內(nèi)葡萄糖量與吸收度成一條不通過(guò)原點(diǎn)的直線，供試品溶液測(cè)定可采用外標(biāo)兩點(diǎn)法定量。

2.3 供試品溶液的制備:取蕁麻粉末(80目，105℃干燥3h，)約2g，精密稱定，加水 100 mL，回流提取 3 次，每次30min。合并提取液，濃縮至50mL，加95%乙醇至含量85%，攪拌30min，放置24h，過(guò)濾，殘?jiān)?5%的乙醇洗滌，然后用丙酮洗滌，自然干燥后用水溶解轉(zhuǎn)移至100mL量瓶?jī)?nèi)，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液。精密吸取0.25mL供試品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，測(cè)定吸收度。

2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取0.6mL葡萄糖對(duì)照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度5 次，吸收度分別為 0.272，0.274，0.277，0.275，0.277，RSD=0.77%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取自然干燥的同批蕁麻6份，每份2.5g，按2.3項(xiàng)下操作、測(cè)定。測(cè)定多糖平均結(jié)果6.6g%，RSD=2.9%.

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取0.6mL葡萄糖對(duì)照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度，每隔20min測(cè)定1次。結(jié)果，RSD=1.53%，在2h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率的測(cè)定:取蕁麻粉末(80目，105℃干燥2h，)約1.0g，6份，精密稱定，其中一份不加葡萄糖對(duì)照品，作為隨行對(duì)照，其余5份分別加入精密稱定的葡萄糖對(duì)照品50mg，余下操作按“2.3供試品溶液制備”方法處理，得到5份加樣回收率供試品溶液。精密吸取0.25mL各加樣回收率供試品溶液，按上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度。平均回收率=109.22，RSD=3.54%.

2.9 供試品溶液的制備及含量測(cè)定:取不同產(chǎn)地蕁麻粉末(80 目，105℃干燥 3h，)約 2.5g，精密稱定，加水100 mL，回流提取3次，每次30min。合并提取液，濃縮至50mL，加95%乙醇至含量85%，攪拌30min，放置24h，過(guò)濾，殘?jiān)?5%的乙醇洗滌，然后用丙酮洗滌，自然干燥后用水溶解轉(zhuǎn)移至100mL量瓶?jī)?nèi)，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液。精密吸取0.25mL供試品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算不同產(chǎn)地蕁麻中多糖含量，內(nèi)蒙古大青山、蠻汗山、南天門(mén)、四子王旗多糖含量分別為6.21%、6.76%、4.34%、6.22%%，平均含量為5.9%。

3 討論

硫酸-蒽酮法是測(cè)定多糖含量的較為常用的方法，其原理為多糖類在濃硫酸作用下先水解為單糖分子，并迅速脫水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物再與蒽酮結(jié)合成有色化合物以比色法在適當(dāng)波長(zhǎng)測(cè)定多糖含量。本文采用加水回流提取多糖，提取液加乙醇至85%沉淀，沉淀物用85%乙醇、丙酮洗滌，自然干燥，樣品為白色粉末，用蒽酮-硫酸顯色法測(cè)定多糖含量。測(cè)定結(jié)果，不同產(chǎn)地蕁麻多糖平均含量為5.9%。

［1］內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古中草藥［M］.內(nèi)蒙古人民出版社，1972;470-472

［2］李寧，張慶林.蕁麻屬植物的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)新藥雜志，2007，16(21):1746-1750