隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)方法研究進(jìn)展

張 冰，張 杰，許 杰，何惠君，巴圖艾德尼

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原學(xué)教研室，烏魯木齊 830054；2.新疆醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)2010-2班；3.新疆醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)2011-6班）

隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)方法研究進(jìn)展

張 冰1，張 杰2，許 杰2，何惠君3，巴圖艾德尼3

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原學(xué)教研室，烏魯木齊 830054；2.新疆醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)2010-2班；3.新疆醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)2011-6班）

隱孢子蟲(chóng)是一種能引起人、畜和野生動(dòng)物共同感染的原蟲(chóng)。由于隱孢子蟲(chóng)卵囊很小，在光鏡下觀察缺乏明顯的特征，檢測(cè)比較困難，為尋找高效的檢測(cè)方法，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)方面進(jìn)行了大量的研究。文章綜述了近年來(lái)用于檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)的主要方法，并初步分析了各種方法的優(yōu)、缺點(diǎn)。

隱孢子蟲(chóng)；檢測(cè)方法

隱孢子蟲(chóng)（Cryptosporidium spp.）是體積微小的球蟲(chóng)類寄生蟲(chóng)，可寄生于包括人在內(nèi)的各類脊椎動(dòng)物消化道上皮細(xì)胞、消化道，引起腹瀉等癥狀；同時(shí)，在腸外其他部位感染或自身感染，如口腔、眼結(jié)膜、陰道、子宮、呼吸道、膽囊、淋巴結(jié)和睪丸等部位。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者做了大量的研究工作，已建立了該病的病原學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等檢測(cè)方法。本文從3個(gè)方面就這些檢測(cè)方法作一綜述。

1 隱孢子蟲(chóng)的傳統(tǒng)檢測(cè)方法

1.1 鏡檢法

周圣文等［1］用飽和蔗糖漂浮法檢測(cè)小白鼠糞便中的隱孢子蟲(chóng)，之后又進(jìn)行了犢牛的隱孢子蟲(chóng)調(diào)查。目前除用上述方法外，還有飽和鹽水、飽和硫酸鎂、飽和硫酸鋅、甲醛-乙醚沉淀法、甘油漂浮-G3耐酸漏斗過(guò)濾濃集法等。研究證明，所有漂浮法中飽和蔗糖法和甘油漂浮-G3耐酸漏斗過(guò)濾濃集法的回收率相近，但由于飽和蔗糖的粘度較大，卵囊不易與雜質(zhì)分離，所以卵囊純度不高。

1.2 染色法

1.2.1 金胺-酚染色法［2］新鮮或甲醛固定后的標(biāo)本均可采用此法，染色后在熒光顯微鏡下觀察。此法簡(jiǎn)單、敏感，適用于批量標(biāo)本的初篩。

1.2.2 改良抗酸染色法［3］此法是隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)中較常用的方法［4］，但由于在糞便中存在紅色抗酸顆粒和一些易染成紅色的相似原蟲(chóng)，很難鑒別，造成特異性降低。

1.2.3 金胺-酚改良抗酸復(fù)染法 韓范等［5］將金胺-酚染色法與改良酸染色法結(jié)合，使檢測(cè)的敏感性和卵囊檢出率提高。目前，該方法被廣泛應(yīng)用于隱孢子蟲(chóng)病的流行病學(xué)調(diào)查和診斷中。

1.2.4 血清混合粘附法 由于采用鏡檢的大多數(shù)標(biāo)本通過(guò)2.5%的重鉻酸鉀保存、涂片染色、自來(lái)水沖洗，易造成假陰性，因此目前采用血清混合粘附法來(lái)解決此問(wèn)題。血清混合粘附法先在玻片上滴加一滴血清，然后加上糞液與血清混勻、涂片，進(jìn)行染色。此法明顯提高了其他染色方法的的陽(yáng)性檢出率，對(duì)隱孢子蟲(chóng)病的流行病調(diào)查診斷及研究都有重要意義。

2 隱孢子蟲(chóng)免疫學(xué)檢測(cè)方法

2.1 免疫熒光檢測(cè)

免疫熒光檢測(cè)有直接免疫熒光測(cè)定（direct immunofluorescence assay，DFA）和間接免疫熒光測(cè)定（indirect immunofluorescence assay，IFA）兩種技術(shù)。許多隱孢子蟲(chóng)單克隆抗體識(shí)別的抗原表位在卵囊表面，基于單克隆抗體可與卵囊壁的特異性結(jié)合反應(yīng)，可以用DFA和IFA來(lái)檢測(cè)糞便涂片和環(huán)境樣品中的卵囊［6］。該法特異性強(qiáng)、靈敏度高，國(guó)外已經(jīng)制備出相應(yīng)的商品化試劑盒［7］。

2.2 酶免疫分析法

酶免疫分析法（enzyme immunoassay，EIA）分為均相和非均相兩種類型，非均相較常用，包括液相與固相免疫測(cè)定法，固相免疫測(cè)定法的代表技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。

EIA可作為檢測(cè)HIV陽(yáng)性或艾滋病患者糞便樣品中的隱孢子蟲(chóng)特殊糞抗原的免疫學(xué)方法。

目前，國(guó)外已有EIA商品化試劑盒，是用酶標(biāo)記抗體來(lái)檢測(cè)抗原，用于檢測(cè)糞便樣品中的隱孢子蟲(chóng)卵囊［8］。

2.3 免疫層析法

免疫層析法（immunochromatography，IC）為實(shí)驗(yàn)室提供了方便的檢測(cè)糞便樣品中卵囊的方法。據(jù)報(bào)道特異度高達(dá)98%～100%，在無(wú)癥狀感染及檢測(cè)不到卵囊的病例中應(yīng)用，意義重大［9］。Chan等［10］證明IC的敏感性與染色方法相同甚至更好。目前國(guó)外已研制出IC商品化試劑盒，用來(lái)檢測(cè)糞便樣品中的卵囊抗原。

2.4 酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)印

酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)?。╡nzyme-linked immunoelectrotransfer blot，EITB）又稱Westem免疫印跡試驗(yàn)，該法可以從大分子多肽水平對(duì)隱孢子蟲(chóng)抗原組分及其免疫活性進(jìn)行檢測(cè)和分析，已用于隱孢子蟲(chóng)病的臨床診斷及特異性抗原和抗體的分析［11］。有報(bào)道采用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離出的相對(duì)分子質(zhì)量（Mr）為23 000的隱孢子蟲(chóng)子孢子抗原。隨著技術(shù)的完善，EITB可望成為高度敏感和特異的診斷隱孢子蟲(chóng)病和區(qū)別隱孢子蟲(chóng)感染期的有效方法。

2.5 免疫磁珠分離法

免疫磁珠分離法（immunomagnetic beads separation，IMS）雖然不是常規(guī)的臨床和獸用診斷技術(shù)，但是當(dāng)研究一些特殊的感染病例，尤其是在臨床癥狀和流行病學(xué)風(fēng)險(xiǎn)因子懷疑指標(biāo)很高的情況下，則選用IMS方法［12］。

2.6 流式細(xì)胞儀技術(shù)

流式細(xì)胞儀（flowcytometry，F(xiàn)C）技術(shù)適用于大規(guī)模的樣品檢測(cè)，特別是感染程度較低和無(wú)癥狀帶蟲(chóng)者的檢測(cè)，并且還可以用于檢測(cè)卵囊的活力［13］。

理想的隱孢子蟲(chóng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法，應(yīng)有足夠的敏感性，能檢測(cè)出絕大多數(shù)感染宿主；有很好的特異性，很少與其他寄生蟲(chóng)發(fā)生交叉反應(yīng)，健康動(dòng)物無(wú)假陽(yáng)性；方法簡(jiǎn)便易行，經(jīng)濟(jì)快捷，可在基層推廣應(yīng)用。目前，國(guó)外已有多種免疫學(xué)檢測(cè)的商品化試劑盒上市，在糞便、水質(zhì)、食物和環(huán)境樣品檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。國(guó)內(nèi)已建立了多種隱孢子蟲(chóng)免疫學(xué)檢測(cè)方法，同時(shí)有些技術(shù)仍未完善，有待進(jìn)一步改進(jìn)和提高。

3 隱孢子蟲(chóng)分子生物學(xué)檢測(cè)方法

3.1 基因分型標(biāo)記

3.1.1 基因型分型工具 自Laxer首次運(yùn)用PCR技術(shù)檢測(cè)糞便樣品中隱孢子蟲(chóng)以來(lái)，許多研究者均以PCR方法檢測(cè)臨床及環(huán)境樣本中的隱孢子蟲(chóng)卵囊。目前，常作為分子標(biāo)記的基因位點(diǎn)主要有小亞基核糖體rRNA（SSUrRNA）、70-kDa熱休克蛋白（HSP70）、卵囊壁蛋白（COWP）、肌動(dòng)蛋白（actin）、乙酰輔酶A合成酶、二氫葉酸還原酶-胸苷酸合成酶（DHFR-ts）、血小板反應(yīng)蛋白-相關(guān)黏附蛋白（PRAP-C1和PRAP-C2）等編碼基因，以及一些微衛(wèi)星序列（SSR-1）［14］。

3.1.1.1 18S rRNA基因 隱孢子蟲(chóng)18S基因具有高度保守性，易于PCR引物設(shè)計(jì)，幾乎能鑒別區(qū)分所有隱孢子蟲(chóng)種類，是目前運(yùn)用最廣的基因位點(diǎn)之一［15］。早期隱孢子蟲(chóng)種大都基于18SrRNA基因鑒定而命名，后來(lái)經(jīng)其他基因位點(diǎn)鑒定仍然成立。

3.1.1.2 HSPs熱休克蛋白家族（heat shock proteins，

HSPs）在隱孢子蟲(chóng)基因型檢測(cè)中應(yīng)用較廣。通過(guò)對(duì)該位點(diǎn)補(bǔ)充分析，已確立許多獨(dú)立種和基因型。Feng等［16］運(yùn)用HSP90基因位點(diǎn)，成功建立了一套基因分型方法，該方法能準(zhǔn)確區(qū)分感染人的隱孢子蟲(chóng)種。

3.1.1.3 actin基因 肌動(dòng)蛋白與18SrRNA基因分析結(jié)果相一致，但對(duì)卵囊量較小的BTP2分析，actin位點(diǎn)未能擴(kuò)增出目的片段。因actin基因位點(diǎn)同一基因型內(nèi)變異小，從而限制其廣泛運(yùn)用［17］。

3.1.1.4 cowp基因 Leoni等［18］在英國(guó)歷行15年的流行病學(xué)調(diào)查研究中，發(fā)現(xiàn)2例C.andersoni，利用18S rRNA和cowp基因的序列分析，均為C.andersoni。由于其特異性差，基于cowp基因的分型工具應(yīng)用相對(duì)較少。

3.1.1.5 微管蛋白β 微管蛋白（β-tubulin）基因微管已被用于原生動(dòng)物的各級(jí)分類水平上的系統(tǒng)發(fā)育研究。這種方法可特異地分辨出C.parvum基因I型和Ⅱ型,且敏感性高，單卵囊即可檢出。

3.1.1.6 其他基因 在檢測(cè)C.parvum基因型方面，基于DHFR基因的多重等位基因特異性PCR（MAS-PCR）方法和cowp基因PCR-RFIP與18SrRNA基因巢氏RFIP方法具有同樣的敏感性和特異性，并能檢測(cè)到多種基因型感染。

3.1.2 基因亞型分型標(biāo)記 隨著分子生物學(xué)研究發(fā)展，亞型分析工具越來(lái)越多地應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)研?；騺喰头中凸ぞ甙l(fā)展過(guò)程中主要使用以下遺傳性靶基因位點(diǎn)，包括微衛(wèi)星和小衛(wèi)星、60 kDa糖蛋白（GP60）基因、雙鏈RNA成分（ds-RNA）和rRNA內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-2）。

3.1.2.1 GP 60基因 GP 60是隱孢子蟲(chóng)基因組中最具多態(tài)性的標(biāo)記基因，是應(yīng)用最廣泛的隱孢子蟲(chóng)亞型靶基因。GP 60基因序列分析在C.parrum人和?；蛐桶l(fā)現(xiàn)有近100個(gè)GP 60基因亞型，表明這項(xiàng)技術(shù)具有非常高的分辨力。

3.1.2.2 微衛(wèi)星序列 Strong等［19］發(fā)現(xiàn)C.hominis分離株的4個(gè)等位基因，在每個(gè)等位基因內(nèi)，根據(jù)多個(gè)三聯(lián)核苷酸串聯(lián)重復(fù)分為不同基因亞型。因此，微衛(wèi)星位點(diǎn)分析對(duì)于隱孢子蟲(chóng)流行病學(xué)、傳播途徑及種群結(jié)構(gòu)研究很有幫助。

3.1.2.3 ds-RNA和轉(zhuǎn)錄間隔子ITS ds-RNA和ITS-2的SSCP序列分析也用于C.parvum和C.hominis亞型分析。ITS分為ITS-1和ITS-2兩個(gè)區(qū)域，ITS-2（GenBank assession no．AF015774）含有5個(gè)拷貝數(shù)的高度變異區(qū)域最適合基因亞型分析［20］。Tiangtip等［21］對(duì)隱孢子蟲(chóng)MS2、MS3和MS4基因進(jìn)行研究，其序列分析表明CR2和CR9分離株屬于C.meleagridis，它們有相同的ITS序列；而CR8屬于C.muris，ITS存在差異。

3.1.2.4 其他位點(diǎn) 其他位點(diǎn)在C.homimis、C.parvum、C. meleagridis多位點(diǎn)分析（MLST）方面，6號(hào)染色體上GP60、CP47、CP56、TSP8（ML2）、RPGR、Mucinl、CP56、MSC67、DZ-HRGP、ZPT等位點(diǎn)，2號(hào)染色體上HSP70小衛(wèi)星位點(diǎn)等均具有較高特異性［22］。

3.1.3 工具酶 目前尚無(wú)隱孢子蟲(chóng)種類鑒定的標(biāo)準(zhǔn)遺傳位點(diǎn)。構(gòu)建隱孢子蟲(chóng)DNA限制性內(nèi)切酶圖譜通常結(jié)合使用多種限制性內(nèi)切酶，通過(guò)綜合分析多種酶單切及不同組合的多種酶同時(shí)切所得到的限制性片段大小來(lái)確定各種酶的酶切位點(diǎn)及其相對(duì)位置，從而鑒定隱孢子蟲(chóng)種［16］。

運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)的研究已極大地提高了人們對(duì)隱孢子蟲(chóng)的認(rèn)知水平，隱孢子蟲(chóng)基因分型標(biāo)記的發(fā)展，對(duì)于理解隱孢子蟲(chóng)生物學(xué)、從基因型和亞型水平上理解隱孢子蟲(chóng)的傳播途徑、群體結(jié)構(gòu)和宿主相互作用機(jī)制及流行病學(xué)具有重要的作用［23-24］。

3.2 分子檢測(cè)技術(shù)

3.2.1 常規(guī)PCR PCR在檢測(cè)水和糞便中隱孢子蟲(chóng)卵囊方面比免疫熒光檢測(cè)等免疫學(xué)試驗(yàn)有更高的敏感性和特異性。向飛宇等［25］利用PCR技術(shù)檢測(cè)奶牛糞便中的隱孢子蟲(chóng)，可檢測(cè)出含卵囊445個(gè)/mL的樣品，其靈敏度與常規(guī)檢測(cè)相比有很大提高。

3.2.2 套式PCR（nested PCR） 套式PCR又稱巢式PCR，極易受到污染，假陽(yáng)性率高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性受到影響，因而對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境和操作人員要求較高。

Ryan等［26］以18SrRNA高變區(qū)內(nèi)一段長(zhǎng)434 bp的寡核苷酸為靶基因建立的套式PCR方法成功地用于檢測(cè)河水、地表水和污水中的隱孢子蟲(chóng)，敏感性極高。張龍現(xiàn)等［27］采用套式PCR方法以18SrRNA為靶基因檢測(cè)糞便中的微量隱孢子蟲(chóng)，最低可檢測(cè)到2.86個(gè)卵囊/g糞便。

3.2.3 實(shí)時(shí)PCR（Real time PCR） Real time PCR最早由Higuchi于1992年提出，具有操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、污染率低等優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)Real time PCR檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，最終對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

Guy等［28］設(shè)計(jì)的Real time PCR方法可以檢測(cè)出1個(gè)隱孢子蟲(chóng)卵囊的DNA含量。Fontaine等［29］將免疫磁性分離（immunomagnetic separation，IMS）技術(shù)與Real time PCR技術(shù)相結(jié)合，建立了IMS-Real time PCR方法，該方法最低能夠在20 L自來(lái)水中檢出5個(gè)隱孢子蟲(chóng)卵囊以及在5 L塞納河水中檢出8個(gè)卵囊。

3.2.4 反轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscriptionRT-PCR）Stinear等［30］采用寡dT25包被的磁珠捕獲隱孢子蟲(chóng)卵囊HSP mRNA作RT-PCR，可以檢測(cè)出水樣中的1個(gè)活卵囊。Fontaine等將Real time PCR技術(shù)與RT-PCR技術(shù)結(jié)合

起來(lái)，建立了Real time RT-PCR方法，以隱孢子蟲(chóng)18S rRNA基因作為靶基因進(jìn)行檢測(cè)，最少能夠檢測(cè)出5個(gè)活卵囊。

3.2.5 細(xì)胞培養(yǎng) PCR（cell cultivation-PCR，CC-PCR）

目前，微小隱孢子蟲(chóng)（C.parvum）、人隱孢子蟲(chóng)（C.hominis）、鼠隱孢子蟲(chóng)（C.muris）、安氏隱孢子蟲(chóng)、貝氏隱孢子蟲(chóng)（C.baileyi）等已在體外成功培養(yǎng)。

3.2.6 最大可能數(shù) PCR（most probable number-PCR, MPN-PCR）MPN-PCR檢測(cè)的整個(gè)過(guò)程可在幾小時(shí)之內(nèi)完成。Carey等［31］建立了一種MPN-PCR方法，該方法檢測(cè)效果優(yōu)于 MPN-foci檢測(cè)法（foci detection method，F(xiàn)DM），特別適合于環(huán)境水樣中微小隱孢子蟲(chóng)的活性檢測(cè)。

3.2.7 PCR-隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（PCR-randomamplified polymorphic DNA，PCR-RAPD）技術(shù) 該技術(shù)以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)。該方法的缺點(diǎn)是可重復(fù)性較差，不同實(shí)驗(yàn)條件下的結(jié)果不具有可比性。反應(yīng)條件的細(xì)微變化或使用不同的PCR擴(kuò)增儀可能使實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致。因此，PCR-RAPD技術(shù)因其自身存在的一些不足而使其應(yīng)用受到一定的限制。

田宗成等［32］對(duì)微小隱孢子蟲(chóng)進(jìn)行PCR-RAPD分析，找到了鑒別微小隱孢子蟲(chóng)的特異性引物。Morgan等利用PCR-RAPD技術(shù)將微小隱孢子蟲(chóng)區(qū)分為人型和畜型2個(gè)基因型，并檢出兩者的差異性。

3.2.8 PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)

與RFLP相比，PCR-RFLP優(yōu)點(diǎn)在于大大提高了目的DNA的含量和相對(duì)特異性，而且對(duì)樣品純度要求不高，簡(jiǎn)便快速，特異性強(qiáng)，也不需要用放射性標(biāo)記探針做雜交，可直接用EB染色法檢測(cè)，適用于個(gè)體分析。此外，還可以揭示種間及種內(nèi)不同基因型間DNA水平的全部差異，為各種基因提供緊密連鎖的標(biāo)志。目前，PCR-RFLP已廣泛應(yīng)用于各種寄生蟲(chóng)的分類鑒定、診斷與防治上［33］。該方法的缺點(diǎn)是酶切條件要求較高，區(qū)分所有等位基因比較困難，且無(wú)法分辨雜合子，只能區(qū)分有限的多態(tài)性。

3.2.9 PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-single strand comformation polymorphism，PCR-SSCP）技術(shù) 該方法不但用于檢測(cè)基因點(diǎn)突變和短序列的缺失和插入，而且還被用于DNA定量分析和多個(gè)標(biāo)本的篩查，具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、耗費(fèi)低等優(yōu)點(diǎn)。

近年來(lái)，非同位素方法的發(fā)展使PCR-SSCP技術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。Gasser等［34］利用PCRSSCP技術(shù)檢測(cè)微小隱孢子蟲(chóng)，能夠區(qū)分出人型與牛型的差異。

3.2.10 核酸序列依賴的擴(kuò)增（nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）技術(shù) 該方法是一種連續(xù)等溫體外特異性核酸擴(kuò)增反應(yīng)，只需在一種溫度下就可完成反應(yīng)，不像普通PCR需要3個(gè)溫度，因此同一時(shí)間內(nèi)擁有更高的擴(kuò)增效率。NASBA技術(shù)還具有操作簡(jiǎn)便、不需特殊儀器、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。

3.2.11 基因芯片技術(shù) 目前，國(guó)外已有多種用于臨床檢測(cè)的基因芯片，只是價(jià)格昂貴，限制了實(shí)際的推廣應(yīng)用，還有待于進(jìn)一步優(yōu)化和完善，提高其實(shí)用性和可操作性。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，隱孢子蟲(chóng)分子檢測(cè)技術(shù)也日臻完善。以PCR為代表的分子檢測(cè)技術(shù)相對(duì)于傳統(tǒng)的組織活檢、漂浮法、密度梯度離心法等方法來(lái)說(shuō)，具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，不但可用于臨床大批量樣品的檢測(cè)，還可以針對(duì)隱性帶蟲(chóng)者、癥狀輕微者進(jìn)行檢測(cè)，采用合適的引物，還可以區(qū)分不同的蟲(chóng)種和基因型?；蛐酒夹g(shù)則具有同時(shí)檢測(cè)多種樣品、分析速度快、所需樣品量少、污染少等優(yōu)點(diǎn)，未來(lái)將會(huì)發(fā)展成為一項(xiàng)規(guī)模化的分子檢測(cè)技術(shù)。

4 展望

隱孢子蟲(chóng)病至今還沒(méi)有一種有效藥物進(jìn)行治療，在免疫缺陷機(jī)體中可造成嚴(yán)重腹瀉，也是目前艾滋病直接死亡的主要病原之一。因此，預(yù)防隱孢子蟲(chóng)病十分重要，其中檢測(cè)技術(shù)的研究是眾多環(huán)節(jié)中最有價(jià)值的一項(xiàng)工作。傳統(tǒng)方法和分子生物學(xué)方法都有各自的特點(diǎn)，很多學(xué)者都進(jìn)行過(guò)比較。由于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法對(duì)染色技術(shù)以及鑒定人員的經(jīng)驗(yàn)要求很高，存在很大的局限性，而分子生物學(xué)的檢測(cè)方法則以其精確度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)得到了廣泛應(yīng)用。隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，計(jì)算機(jī)技術(shù)與PCR技術(shù)的結(jié)合,基因檢測(cè)工具的應(yīng)用與發(fā)展都將推動(dòng)人們對(duì)人和動(dòng)物隱孢子蟲(chóng)病的認(rèn)識(shí)和理解。

致謝：本文承蒙石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院張居農(nóng)教授的校正指導(dǎo)，特此感謝！

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Progress in the Detection Methods for Cryptosporidium

ZhangBing1，ZhangJie2，Xu Jie2，et al
（1.Department ofHuman Parasitology，School ofBasic Medicine，XinjiangMedical University，Urumqi 830054，China；2.Class 2010-2，Clinical Medicine，XinjiangMedical University）

Cryptosporidium（Cryptosporidium SPP.）is a kind ofparasite that can cause infection in people,domestic animals and wildlife.Because the egg capsule is too small to be observed in identification under light microscopy conveniently,a lot of researches on the methods of cryptosporidium detection have been taken at home and abroad.In this paper,the main methods for detectingcryptosporidium and their advantages and disadvantages were reviewed.

Cryptosporidium；detection methods；progress

S851.2

A

2095-3887（2014）02-0056-05

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.02.018

2014-01-16

新疆維吾爾自治區(qū)青年科學(xué)基金（2012211B13）

張冰（1981-），女，講師，碩士研究生。