高效液相色譜法測(cè)定清熱化毒丸中連翹苷的含量

鄭 琰 劉淑華

遼寧省朝陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧朝陽(yáng) 122000

高效液相色譜法測(cè)定清熱化毒丸中連翹苷的含量

鄭 琰 劉淑華

遼寧省朝陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧朝陽(yáng) 122000

目的 建立高效液相色譜法測(cè)定清熱化毒丸中連翹苷含量的方法。 方法 采用Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-水（26∶74）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 277 nm，流速為 1.0 ml/min。 結(jié)果 連翹苷進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg（r=0.9994）線(xiàn)性范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好，平均回收率為 98.46%，RSD=0.86%（n=6）。 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清熱化毒丸的質(zhì)量控制。

清熱化毒丸；連翹苷；高效液相色譜法

清熱化毒丸是由連翹、青黛、黃芩、黃連、菊花、犀角粉等16味藥煉制而成，收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑第二冊(cè)，具有清火化毒，消腫止痛的作用，主要用于小兒身熱煩躁，咽喉腫痛，口舌生瘡，皮膚瘡癤，口臭，便秘等。原標(biāo)準(zhǔn)中只有薄層色譜法進(jìn)行定性分析，而文獻(xiàn)資料只有對(duì)黃連、黃芩之類(lèi)的質(zhì)量分析，沒(méi)有針對(duì)連翹苷的定量分析，藥理實(shí)驗(yàn)表明，連翹苷具有較強(qiáng)的抗病毒、強(qiáng)心、抗肝損傷性等活性，為了有效地控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，筆者故建立對(duì)連翹苷的高效液相色譜測(cè)定法（HPLC）[1-4]。

1儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀；Waters2489紫外檢測(cè)器；Waters Empower色譜工作站。BP 211D電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司），9860 A型超聲儀（費(fèi)納米科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥

連翹苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110821-201112）；清熱化毒丸（遼寧仙草堂藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：130901，130301，130501）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Hypersil C18（4.6 mm×250 mm；5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（26∶74）；流速：1.0 ml/min；柱溫：28℃；波長(zhǎng)：277 nm；理論板數(shù)：按連翹苷計(jì)算≥3000[5-9]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取連翹苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取清熱化毒丸，剪碎，精稱(chēng)15.0 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱(chēng)定重量，密塞，冷浸過(guò)夜，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取除連翹外的其他藥材，按所確定的工藝生產(chǎn)陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 取陰性供試品溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl，依法分別注入液相色譜儀，在連翹苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液在此處無(wú)干擾，表明其他組分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾（圖1）。

2.3.2 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液1、5、10、15、20、25 μl注入液相色譜儀，依法測(cè)定連翹苷的峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為Y=39029X+14747，r=0.9994，結(jié)果表明，連翹苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取供試品（批號(hào)130901），精密稱(chēng)取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密吸取10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定色譜峰面積的RSD為0.38%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（130901）樣品6份，分別精密稱(chēng)取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，分別進(jìn)樣分析，測(cè)定連翹苷的含量，結(jié)果平均含量為0.1024 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h 時(shí)分別進(jìn)樣 10 μl，分別進(jìn)樣分析，結(jié)果連翹苷峰面積的RSD為0.28%，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同批樣品（批號(hào)130901，連翹苷含量為 0.1024 mg/g）6 份，每份 7.5 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入連翹苷對(duì)照品溶液（0.2124 mg/ml）3.5 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.3.7 樣品測(cè)定 取3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣 10 μl，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中連翹苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中連翹苷的測(cè)定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 流動(dòng)相選擇

流動(dòng)相選擇時(shí)曾采用乙腈-0.1%磷酸溶液 （25∶75）與乙腈-水（26∶74）進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果還是采用乙腈-水（26∶74）作為流動(dòng)相，連翹苷能與其他雜質(zhì)有較好的分離。

3.2 提取方法的考察

《中國(guó)藥典》2010年版中采用的提到方法為上柱法，這種方法操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，而筆者采用的超聲法操作比較簡(jiǎn)單，消耗的時(shí)間相對(duì)比較少，而這種方法重現(xiàn)好，樣品與雜質(zhì)也能夠得到好的分離。

3.2 超聲時(shí)間的選擇

在 20、30、40 min 進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果提示，30 min 時(shí)連翹苷已基本提取完全，故確定時(shí)間為30 min。

綜上所述，本文建立了一種專(zhuān)屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快捷的定量方法，對(duì)連翹苷的質(zhì)量控制有一定的參考作用。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：284.

[2]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第二冊(cè)）[Z].274.

[3]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，2006：1552-1555.

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[6]孟和，朱艷紅，吳學(xué)軍.HPLC法測(cè)定保和丸中連翹苷的含量[J].中國(guó)藥事，2013，27（3）：312-314.

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The content of phillyrin of Qingre huadu wan determined by high performance liquid chromatography

ZHENG Yan LIU Shu-hua
Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

ObjectiveTo establish the method of high performance liquid chromatography(HPLC)determining the content of phillyrin of Qingre huadu wan.Methods Hypersil C18 （4.6 mm×250 mm,5 μm） chromatographic column was used.The mobile phase cinsisted of acetonitrile-water(26∶74),the detection wavelength was 277 nm and the flow rate of 1.0 ml/min.ResultsPhillyrin sample volume showed good linear relationship in the range of 0.2124-5.3100 μg(r=0.9994);the average recovery rate was 98.46%,RSD=0.86%(n=6).ConclusionThe method is accurate with a good reproducibility,and suitable for quality control of Qingre huadu wan.

Qingre huadu wan;Phillyrin;High performance liquid chromatography

R286.0

A

1674-4721（2014）04（c）-0061-02

2014-03-19 本文編輯：許俊琴）