肥胖大鼠血清及肝臟中脂聯(lián)素水平的研究

李詩(shī)言，姜 濤＊，曲仁偉

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春130033；2.柳河縣醫(yī)院普外二科）

肥胖大鼠血清及肝臟中脂聯(lián)素水平的研究

李詩(shī)言1，姜 濤1＊，曲仁偉2

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春130033；2.柳河縣醫(yī)院普外二科）

肥胖是2型糖尿病、心血管疾病、肝脂肪變性和非酒精性脂肪性肝炎（NASH）常見(jiàn)的危險(xiǎn)因素。脂聯(lián)素是一種近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，主要在白色脂肪組織中表達(dá)和分泌，具有增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗，抗炎及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，對(duì)于血脂和血糖的調(diào)節(jié)也起到重要的作用。流行病學(xué)的研究表明，低脂聯(lián)素水平與NASH有關(guān)，并且脂聯(lián)素保護(hù)肝臟的作用已經(jīng)在動(dòng)物研究或體外的肝細(xì)胞中被證實(shí)。脂聯(lián)素水平升高對(duì)肝臟疾病會(huì)有所幫助，近年來(lái)的文章總結(jié)了它對(duì)肝脂肪變性和NASH的保護(hù)作用［1］。本研究旨在探討肥胖大鼠血清及肝臟中脂聯(lián)素水平的變化及其原因和脂聯(lián)素對(duì)肥胖相關(guān)的肝臟疾病的影響。

1 材料與方法

1.1 材料和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

正常成年雄性Wistar大鼠30只，體重180－220克，清潔級(jí)，由吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供［動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2007—0001］。將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組20只、肥胖組20只。大鼠血清及組織脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)于碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2 動(dòng)物模型制備

實(shí)驗(yàn)大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水，定量給食，對(duì)照組大鼠給予普通飼料，實(shí)驗(yàn)組大鼠參照李鴻雁［2］的飼料配方配制高脂飼料，各組大鼠喂養(yǎng)8周。與對(duì)照組比較，體重超過(guò)20%作為肥胖標(biāo)準(zhǔn)，模型成功率約為80%。

1.3 標(biāo)本采集及處理

成模后處死各組大鼠，每只采血約1ml，靜置30min后2 000轉(zhuǎn)／min離心10min，分離血清，－80℃冰箱保存，用ELISA方法統(tǒng)一檢測(cè)血清脂聯(lián)素含量。提取新鮮肝組織，在4℃生理鹽水中勻漿后2 500轉(zhuǎn)／min離心15min，分離上清，－80℃冰箱保存，用ELISA方法統(tǒng)一檢測(cè)肝臟內(nèi)蛋白濃度及單位蛋白濃度內(nèi)的脂聯(lián)素含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示。均數(shù)間的兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。全部統(tǒng)計(jì)在SPSS18.0軟件上進(jìn)行。

2 結(jié)果

與對(duì)照組比較，成模后肥胖組大鼠體重顯著升高，大鼠血清脂聯(lián)素水平顯著降低，肝臟脂聯(lián)素水平顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

3 討論

肥胖時(shí)脂肪細(xì)胞體積增大和（或）數(shù)量增加，可引起一系列代謝紊亂，主要表現(xiàn)為甘油三酯（TG）、游離脂肪酸（FFA）和血糖的升高及高密度脂蛋白（HDL）的降低。脂聯(lián)素與體重指數(shù)（BMI）成反比。在高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖嚙齒類(lèi)動(dòng)物和ob／ob小鼠，血漿中脂聯(lián)素水平降低，清除率顯著延長(zhǎng)，提示脂聯(lián)素的合成在肥胖時(shí)明顯受損［3］。內(nèi)臟脂肪堆積與低脂聯(lián)素水平相關(guān)，并且已經(jīng)確定內(nèi)臟脂肪與全身脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān)［4］。本研究中，肥胖大鼠隨著體重的顯著增加，肥胖程度越來(lái)越嚴(yán)重，血清脂聯(lián)素隨之明顯降低。

肥胖者血中胰島素水平升高，血中胰島素水平與肥胖程度呈正相關(guān)。肥胖還可導(dǎo)致脂肪組織分泌的脂肪因子發(fā)生變化，脂聯(lián)素分泌的減少是內(nèi)臟脂肪增多后胰島素敏感性發(fā)生改變的機(jī)制之一。血漿脂聯(lián)素水平在胰島素敏感性增加和體重減輕等情況下升高，在肥胖、胰島素抵抗時(shí)降低。提示外周脂聯(lián)素水平的降低與胰島素抵抗伴隨發(fā)生。而肥胖恰恰是胰島素抵抗的主要因素之一。有研究顯示，體重的增加或減輕，胰島素敏感性會(huì)相應(yīng)地減低或提高，肥胖和胰島素抵抗呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。胰島素抵抗時(shí)機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性降低，出現(xiàn)高胰島素血癥，而胰島素能顯著下調(diào)脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)［5］，進(jìn)而導(dǎo)致脂聯(lián)素生成得更少。于是血清脂聯(lián)素降低與肥胖導(dǎo)致的胰島素抵抗之間形成一個(gè)正反饋的“惡性循環(huán)”。此外，肥胖被認(rèn)為是一種慢性炎癥狀態(tài)，減少肥胖，降低那些抑制脂聯(lián)素合成和分泌的促炎癥細(xì)胞因子，如TNF－α和IL－6，可有助于減重后循環(huán)脂聯(lián)素的增加。因此在肥胖組大鼠，這些抑制脂聯(lián)素合成和分泌的促炎因子大量產(chǎn)生，亦可導(dǎo)致血清脂聯(lián)素的下降。

肝臟是糖、脂代謝的重要器官，也是表達(dá)脂聯(lián)素受體2（AdipoR2）的主要器官。脂聯(lián)素受體是介導(dǎo)脂聯(lián)素生物學(xué)功能的重要蛋白。AdipoR2在肝臟中的表達(dá)增加了β氧化旁路和（或）氧化磷酸化過(guò)程中相關(guān)酶的表達(dá)，從而使肝臟中的游離脂肪酸快速氧化，進(jìn)而改善脂質(zhì)代謝。在我們的研究中，肥胖組大鼠肝臟內(nèi)脂聯(lián)素水平顯著升高，可能是對(duì)低脂聯(lián)素血癥的一種代償性反應(yīng)，以更多地與AdipoR2結(jié)合，發(fā)揮其緩解肥胖的作用。此外，這種肝臟脂聯(lián)素的代償性高水平與肥胖引起的肝臟損傷和脂代謝異常密切相關(guān)。脂聯(lián)素可抑制參與糖異生的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和葡萄糖－6－磷酸酶的活性，增強(qiáng)胰島素對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)糖異生和肝糖輸出的抑制作用。隨著肥胖的進(jìn)展，機(jī)體承擔(dān)的負(fù)荷和肝臟受到的損傷逐漸增多，肝臟作為人體代謝的主要器官，其內(nèi)脂聯(lián)素呈現(xiàn)代償性升高，以起到更好的保護(hù)和調(diào)節(jié)作用。

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）與肥胖及其引發(fā)的血脂異常密切相關(guān)。NAFLD主要包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪型肝炎（NASH）和肝硬化。以往的研究提示脂聯(lián)素在NAFLD的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到重要作用。在本研究中，隨著肥胖的加劇，大鼠肝臟會(huì)受到進(jìn)行性的損傷，其內(nèi)脂聯(lián)素的增高對(duì)于NAFLD的防治作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：一、抗脂肪變性［6，7］。二、抗炎和抗細(xì)胞凋亡［8－12］。三：抗纖維化作用［13，14］。NAFLD會(huì)隨著肥胖的日益流行而增多，對(duì)其病理生理學(xué)的認(rèn)識(shí)是發(fā)展非侵入性診斷方法和建立有效治療方案的前提條件。脂聯(lián)素已成為肥胖相關(guān)肝臟疾病的保護(hù)性脂肪因子。然而，脂聯(lián)素受體信號(hào)通路和NASH中潛在的肝臟脂聯(lián)素抵抗，到目前為止研究得還不是很明確。AdipoR1／2下游分子的識(shí)別和提高脂聯(lián)素受體活性的策略對(duì)治療NAFLD是有前景的途徑。脂聯(lián)素有望成為治療肥胖，及其相關(guān)肝臟疾病的切入點(diǎn)。

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2014－01－14）

1007－4287（2014）10－1597－03

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