蘇子提取物對(duì)高脂血癥家兔血脂調(diào)控效果及作用機(jī)理的研究

■黃 軍王安忠趙 超

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)成人教育學(xué)院，河北保定 071000；2.河北學(xué)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定 071000；3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071000）

蘇子是傳統(tǒng)的藥食兩用植物，為唇形科紫蘇屬植物，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為蘇子具有解表散寒、行氣和胃的功效[1]。蘇子提取物提煉自紫蘇的種子，其中富含α-亞麻酸，據(jù)有關(guān)報(bào)道認(rèn)為α-亞麻酸在紫蘇油中含量高達(dá)56%～64%，甚至高達(dá)84.5%[2]。而α-亞麻酸具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化的功效。目前蘇子及其提取物已在動(dòng)物生產(chǎn)中廣為應(yīng)用，但是關(guān)于蘇子提取物對(duì)動(dòng)物血脂調(diào)控效果及其可能的調(diào)控機(jī)理研究還不多見(jiàn)，鑒于此，本研究系統(tǒng)研究了蘇子提取物對(duì)高脂血癥家兔血脂的調(diào)控效果并分析其對(duì)家兔體內(nèi)調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)酶類的影響，以期為實(shí)現(xiàn)畜產(chǎn)品綠色、保健而開(kāi)發(fā)新型飼料添加劑做出貢獻(xiàn)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1蘇子購(gòu)自河北省安國(guó)市中藥材市場(chǎng)，蘇子提取物（EPS）由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)學(xué)院畜牧生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室提取，濃度為1 g/ml原藥。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物：4月齡力克斯兔100只，雌雄各半，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院獺兔養(yǎng)殖基地提供。

1.1.3 試劑

膽固醇（上海源聚生物科技有限公司,批號(hào)：061030）；三酰甘油測(cè)定試劑盒、總膽固醇測(cè)定試劑盒、高密度脂蛋白測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白測(cè)定試劑盒,（均購(gòu)自南京建成生物制品研究所）；載脂蛋白AI(APoAI)測(cè)定試劑盒、載脂蛋白B(APoB)測(cè)定試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）；卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)測(cè)定試劑盒（sigma公司）；兔肝脂酶（HL）ELISA試劑盒（上海滬宇生物科技有限公司）；兔脂蛋白脂酶ELISA試劑盒（上海華壹生物科技有限公司）。

1.1.4 儀器

AV2700生化分析儀（olympus）；TissueLyserll高通量組織勻漿器（德國(guó)QIAGEN公司）；漩渦混勻器（合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司）；5415R低溫高速離心機(jī)（德國(guó) EPPPENDORF公司）；恒溫水浴鍋（上海博迅）；TriStar LB941酶標(biāo)儀（德國(guó)BERTHOLD）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分組

選取100只4月齡體重2.5 kg左右健康無(wú)病的力克斯兔，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、高脂模型組（HLM）、低EPS處理組（low dosage of EPS,LD）、中EPS處理組（medium dosage of EPS,MD）、高EPS處理組（high dosage of EPS,HD），每組20只，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只。NC組飼喂基礎(chǔ)日糧+10 ml/d蒸餾水灌胃，HLM組飼喂高脂日糧+10 ml/d蒸餾水灌胃，LD組飼喂高脂日糧+10 ml/d濃度0.2 g/ml的蘇子提取物，MD組飼喂高脂日糧+10 ml/d濃度0.6 g/ml的蘇子提取物，HD組飼喂高脂日糧+10 ml/d濃度為1.2 g/ml的蘇子提取物，各組力克斯兔每日上午10點(diǎn)灌胃一次。基礎(chǔ)日糧構(gòu)成及營(yíng)養(yǎng)成分含量見(jiàn)表1。高脂日糧參照王玉明等(2011)，膽固醇1%，蛋黃粉15%，豬油10%，基礎(chǔ)日糧74%[3]。

表1 基礎(chǔ)日糧構(gòu)成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2.2 飼養(yǎng)條件及樣品采集

試驗(yàn)用兔單籠飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度控制在20℃，濕度控制在70%，每天早中晚各飼喂一次，自由飲水。經(jīng)10 d預(yù)飼養(yǎng)進(jìn)入正式試驗(yàn)，試驗(yàn)期60 d。試驗(yàn)結(jié)束后第1 d，禁食12 h，空腹耳中動(dòng)脈采血，分離血清，待測(cè)。每組沒(méi)重復(fù)隨機(jī)抽取力克斯兔一只，枕骨大孔處死，取肝臟，4℃生理鹽水處理，于右肝距肝葉邊緣5 mm處取1 g肝組織，加冰生理鹽水9 ml，在4℃條件下制成10%肝勻漿，4 000 r/min離心10 min后取上清液[4]，待測(cè)肝脂酶（HL）、脂蛋白脂酶（LPL）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.5中的LSD法統(tǒng)計(jì)。各組統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，樣本比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 EPS對(duì)血脂調(diào)控效果分析（見(jiàn)表2）

表2 EPS對(duì)血脂水平的影響（mmol/l）

由表2可知，在經(jīng)過(guò)60 d飼養(yǎng)試驗(yàn)后HLM組TG、TC、HDL-C、LDL-C均高于NC組，差異達(dá)極顯著水平（P＜0.01）;LD組TG、TC、LDL-C水平低于HLM組，且差異顯著（P＜0.05）；MD、HD組TG、TC、HDL-C、LDL-C水平低于HLM組，差異極顯著（P＜0.01）。說(shuō)明EPS具有調(diào)控血脂的功效。

2.2 EPS對(duì)載脂蛋白的影響（見(jiàn)表3）

表3 EPS對(duì)載脂蛋白的影響

由表3可知，試驗(yàn)?zāi)┢贖LM組的ApoAⅠ、ApoAⅠ/ApoB低于NC組，ApoB高于NC組，差異極顯著（P＜0.01）；各水平灌喂EPS組，ApoAⅠ高于HLM組，差異極顯著（P＜0.01）；ApoAⅠ/ApoB高于HLM組，其中LD組與HLM組相比差異顯著（P＜0.05），MD組、HD組與HLM組相比差異均達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）。ApoB方面各EPS處理組均低于HLM組，其中LD組、MD組與HLM組相比差異顯著（P＜0.05），HD組與HLM組相比差異極顯著（P＜0.01）。并且EPS在本試驗(yàn)應(yīng)用范圍內(nèi)，呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)。

2.3 EPS對(duì)脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的影響（見(jiàn)表4）

表4 EPS對(duì)脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的影響

由表4可知，試驗(yàn)?zāi)〩LM組的LCAT、HL、LPL低于NC組，差異極顯著（P＜0.01）；各EPS處理組LCAT、HL、LPL高于HLM組，差異極顯著（P＜0.01）；EPS能夠起到調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的作用，隨著EPS處理灌服水平的增高，LCAT、HL、LPL水平呈遞增趨勢(shì)，其中MD組的HL和LPL水平，HD組的LCAT和LPL水平，與NC組不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

3 討論

食物中脂肪含量和脂肪酸構(gòu)成是影響人類高血脂癥和心腦血管疾病發(fā)生率的重要因素?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明血清TC水平是導(dǎo)致冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，血清TC水平每降低1%，冠心病的發(fā)生率減少2%[5]。血清HDL-C與LDL-C是一對(duì)對(duì)立體，正常比例在1∶2左右，HDL-C有消除膽固醇的作用，而LDL-C水平升高是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的主要誘因[6]。TG水平往往因攝入食物中膽固醇水平和脂肪水平變化很大，但過(guò)高的TG水平會(huì)誘發(fā)冠心病的重要因素。本研究發(fā)現(xiàn)蘇子提取物能夠起到降低血清TC、TG、LDL-C，提高HDL-C的作用，有利于維護(hù)動(dòng)物心腦血管系統(tǒng)的健康。

ApoAⅠ、ApoB是動(dòng)物體內(nèi)兩個(gè)重要的載脂蛋白，其中ApoAⅠ具有激活LCAT的功效，通過(guò)激活LCAT的活性而加強(qiáng)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，降低體內(nèi)膽固醇水平[7]。ApoB主要存在于LDL-C，是LDL-C的主要載體蛋白，在體內(nèi)起到運(yùn)輸內(nèi)源性膽固醇、TG、LDL-C代謝起主要作用，其運(yùn)輸?shù)纳鲜鑫镔|(zhì)在血管壁沉積是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因。HL和LPL是體內(nèi)參與脂質(zhì)代謝的兩種主要酶類，主要作用是催化乳糜微粒（CM）和極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯降解。而CM的主要作用是運(yùn)輸外源性甘油三酯和膽固醇，其所攜帶的甘油三酯水解有利于膽固醇被肝臟吸收、清除[8]。VLDL的主要功能是運(yùn)輸內(nèi)源性甘油三酯，其水平升高會(huì)導(dǎo)致TG、TC升高[9]。本研究表明蘇子提取物能夠提高ApoAⅠ、LCAT、LPL、HL水平,降低ApoB水平，提高ApoAⅠ/ApoB。這一結(jié)果也從理論上與本研究在EPS對(duì)血脂水平影響中取得的結(jié)果一致。因此本研究認(rèn)為蘇子提取物能夠通過(guò)改變載脂蛋白ApoAⅠ、ApoB水平，提高LCAT、HL、LPL活性調(diào)節(jié)脂肪代謝。但是脂肪代謝調(diào)控涉及到多因子、多酶系的協(xié)同作用，關(guān)于蘇子提取物對(duì)其他途徑的影響作用有待于進(jìn)一步研究。